Pulcino Ex ovo Cultura e Ex ovo CAM saggio: Come funziona veramente

Ciao, sono Susan Paa. Lavoro presso l'Istituto di Chimica Fisiologica, dipartimento di Endocrinologia Biochimica presso l'Università di Burg Esen in Germania. Ciao, sono Daniel Ze Basian Dole.

Vengo dalla stessa istituzione di Susan. Ciao, sono Mann dell'Istituto di Anatomia del Dipartimento di Neuro dell'Università di Burg. Ti mostreremo come funzionano davvero la cultura CH X e il saggio sulla membrana.

Quindi andiamo in laboratorio. Nella maggior parte degli studi sperimentali recenti, la cam, cioè la membrana di Chico, è stata esposta tagliando una finestra attraverso il guscio d'uovo, e gli esperimenti sono stati condotti in ovo, con conseguenti limitazioni significative nell'accessibilità della CAM e nelle possibilità di osservazione e documentazione fotografica degli effetti. Le colture X ovo di embrioni di pollo facilitano significativamente l'accessibilità della camma e dell'embrione di pollo.

Si prega di vedere il cuore pulsante che consente una facile documentazione in vivo degli effetti e la manipolazione sperimentale dell'embrione. Nel nostro articolo video, forniremo una dimostrazione passo dopo passo dell'applicazione di successo della coltura X ovo per un gran numero di domande scientifiche. Le uova vengono incubate in un'incubatrice con un vassoio mobile.

Qui puoi vedere l'elemento riscaldante e il vassoio che gira le uova 12 volte al giorno continuamente. L'umidità viene mantenuta al 60% aggiungendo acqua a contenitori di plastica sul fondo dell'incubatrice e la temperatura di incubazione viene impostata a 37,5 gradi centigradi prima di iniziare l'incubazione. Lo sporco, le piume e gli escrementi vengono accuratamente rimossi dai gusci delle uova, pulendo meccanicamente le uova con etanolo o disinfettante, tuttavia, riducono significativamente i tassi di sopravvivenza degli embrioni.

Le uova sono posizionate orizzontalmente sul vassoio mobile dell'incubatrice. Assicurati di mantenere una distanza sufficiente tra le singole uova per consentire la rotazione libera. Dopo l'incubazione Per 72 ore, le uova vengono rimosse dall'incubatrice e il lato superiore delle uova dove risiede l'embrione viene segnato a matita.

Poiché l'embrione resiste alla rotazione in una certa misura e rimane situato qui Per una sensazione migliore, non si devono usare guanti per rompere le uova, ma le mani devono essere disinfettate con etanolo al 70%. L'uovo viene tenuto orizzontalmente con un segno di matita sulla parte superiore e incrinato sul bordo di una barra di agitazione magnetica triangolare Per il massimo controllo della forza durante le procedure di cracking, i gomiti non devono poggiare sul piano del banco. È importante che il guscio dell'uovo e la membrana dell'uovo vengano aperti durante la rottura La perdita di albume è un segno sicuro che la membrana dell'uovo è stata perforata.

L'uovo viene tenuto vicino al fondo del piatto patriota. Per evitare ulteriori perdite di albume durante questa procedura iniziale di apertura, è importante che l'albume sul fondo del piatto patriot sia ancora collegato al resto all'interno dell'uovo. Poiché ciò si traduce in un vuoto all'interno dell'uovo che tiene il tuorlo in posizione applicando delicatamente una pressione sul meridiano che attraversa la fessura e l'equatore dell'uovo con il pollice e il medio, è possibile regolare il vuoto e l'estrusione del contenuto dell'uovo.

Il contenuto dell'uovo può quindi essere trasferito nella capsula di Petri con il tuorlo integro. Se l'uovo viene sollevato delicatamente ed entrambe le metà del guscio vengono accuratamente separate, le colture ex ovo vengono quindi poste su un vassoio, rimesse in un'incubatrice e mantenute a 37,5-38,2 gradi centigradi e 70% di umidità. Non è necessario un apporto di anidride carbonica o ossigeno.

Se si utilizzano speciali piastre patriottiche con distanziatori tra il coperchio e la piastra e incubatrici con griglia di ventilazione, la griglia di ventilazione deve essere mantenuta aperta a metà. Le carte filtranti per autoclave vengono utilizzate come materiale di supporto per le sostanze liquide applicate alla camma in quanto sembrano causare la minima irritazione della camma. Il sito di applicazione dovrebbe essere a metà strada tra l'embrione e il bordo della cam, altrimenti l'embrione ostacola l'osservazione microscopica degli effetti nella luce trasmessa.

Il liquido qui l'atropina deve essere applicata immediatamente dopo che il filtro è stato posizionato sulla camma per evitare che si secchi. Ogni giorno devono essere riapplicate dosi aggiuntive o tampone. Quando la camma è completamente sviluppata, possono essere applicati fino a sei campioni diversi e gli effetti possono essere confrontati su un singolo anello a camma tagliato da un millilitro, il puntale della pipetta deve essere tagliato il più sottile possibile per ridurre al minimo il peso ed evitare l'indentazione della camma.

L'anello viene quindi applicato alla camma e le cellule vengono pipettate nell'anello. Una siringa da microlitro Hamilton viene risciacquata più volte con etanolo al 70% e infine con soluzione salina tamponata con fosfato sterile o PBS, la micro siringa viene riempita con una sospensione cellulare preparata con attenzione ma penetra rapidamente la camma e gli strati dell'occhio con l'ago della siringa e inietta continuamente la sospensione cellulare. L'ago deve rimanere alcuni secondi nell'occhio per evitare una perdita della sospensione cellulare iniettata mediante controllo delle perdite X Ovo.

Le colture di ovuli incubati per tre giorni vengono utilizzate come donatrici di gemme per gli arti. L'embrione viene sezionato dai vasi vitellino collegati. Tagliando un cerchio, l'embrione viene trasferito in una capsula di Petri riempita con PBS sterile freddo mediante l'uso di un piccolo cucchiaio di drenaggio e lavato mediante agitazione.

L'embrione viene quindi trasferito in una capsula di Petri fresca riempita con PBS sterile e liberato dalle membrane circostanti, strappandole accuratamente con una pinza fine. Le gemme degli arti vengono staccate con una pinza il più vicino possibile al corpo, afferrate e trasferite alla camma di un pollo ospite di 8-10 giorni. Nel sito di applicazione desiderato, la camma viene traumatizzata selettivamente mediante raschiatura delicata con un pezzo della pinza.

Quindi l'innesto viene afferrato e stratificato sulla camma con l'altro pezzo della pinza. Il Topo femmina sacrificale è fissato su una tavola. La parete addominale è inumidita con etanolo al 70% tagliato lungo la linea mediana e i lembi cutanei sono fissati lateralmente da perni.

L'utero viene rimosso dall'addome, staccato e trasferito in un becher. Con PBS freddo. Le membrane embrionali vengono rimosse con cura mediante l'uso di pinze a scopo dimostrativo.

Un embrione di topo di 16 giorni è mostrato qui per una migliore visibilità delle gemme degli arti. Si ottengono solo risultati ottimali dell'innesto. Tuttavia, se vengono utilizzate gemme di arti da 10 a 13 giorni di vita, le gemme degli arti vengono tagliate o l'uso di pinze sottili il più vicino possibile al corpo.

Al sito di applicazione desiderato, il CAM viene traumatizzato selettivamente mediante raschiatura delicata con una pinza. Quindi le gemme degli arti vengono afferrate e trasferite al CAM di un pollo ospite di 8-10 giorni. L'innesto viene posizionato una o due volte su un lato della camma dove non è previsto alcun innesto finale per rimuovere il PBS in eccesso.

Gli innesti sono idealmente posizionati sulla camma vicino a una biforcazione a Y di un tumore dei vasi sanguigni. Le biopsie vengono tagliate in uno o due millimetri cubi con bisturi sterili. Il prelievo di materiale dalla superficie della biopsia aumenta il rischio di contaminazione con il muscolo o il tessuto connettivo.

Nel sito di applicazione desiderato, il CAM viene traumatizzato selettivamente mediante raschiatura delicata. Un pezzo del nucleo del campione bioptico viene innestato sulla CAM di un pollo ospite di 8-10 giorni. Gli innesti sono idealmente posizionati sulla camma vicino a una biforcazione a Y di un vaso sanguigno.

L'innesto viene quindi trasferito al CAM con PBS minimo attaccato. Potrebbe essere applicata una leggera pressione per manovrare l'innesto in una risultante rientranza della camma. L'embrione di pollo ospite viene ucciso per decapitazione.

Il CAM con l'innesto attaccato viene rimosso mediante un taglio circolare e trasferito in una piastra di Petri riempita con PBS. Una CAM eccessiva viene tagliata dall'innesto, ad eccezione del precedente sito di attacco. Di nuovo Nel luogo di applicazione desiderato.

La camma di un nuovo embrione di pollo ospite viene traumatizzata selettivamente da un raschiamento delicato e l'innesto viene trasferito alla camma del secondo ospite con PBS minimo attaccato. Abbiamo appena dimostrato come funziona davvero CH X o la cultura. Vi ho mostrato i vantaggi rispetto agli esperimenti Orval e vi ho fornito alcuni esempi per la sua applicazione.

Quindi questo è tutto. Grazie per aver guardato e buona fortuna con i tuoi esperimenti.