Utilizzando la risposta optocinetico per studiare la funzione visiva del pesce zebra
2 febbraio 2010
Risposta optocinetico è stato ampiamente utilizzato per valutare le funzioni visive di zebrafish larvale. Tuttavia, il protocollo standard per il pesce larvale non è ancora facile applicazione negli adulti 1-5. Qui, vi presentiamo come misurare l'okr di zebrafish adulti utilizzando un nuovo protocollo di cui è stabilito nel nostro laboratorio.
Ciao a tutti. Mi chiamo Mean Jing e vengo dalla USTC. Come sappiamo che la risposta optocinetica, o OKR in breve, è un test comportamentale che un animale muove gli occhi per seguire una classificazione.
Muoversi intorno ad esso. Questo comportamento è stato ampiamente utilizzato. Valutare le funzioni visive delle larve di pesce zebra
.Tuttavia, il metodo che utilizza il prodigo standard per fissare il pesce larvale non è facilmente applicabile per gli adulti. Quindi, in questo video, ti mostreremo un nuovo prodigo che rende possibile registrare l'OKR adulto. E sempre per confronto, dimostreremo il test OKR per i pesci larva e il test OMR per i pesci adulti.
E per OMR, intendo la risposta del motore. Ora ti mostrerò l'aspetto della nostra app OKR personalizzata. Sembra carino, eh?
In questo aspetto, c'è una base a griglia azionata da un motore. Il tubo della griglia poggia su questa base della griglia e ruota con essa. Una piastra della camera viene posizionata sopra la base della griglia, ma non ruota, e una lampada circolare viene utilizzata per illuminare la griglia.
E questo è tutto. Basta mettere la camera del pesce sulla piastra della camera e siamo pronti a partire. Ciao, sono Sui.
Ciao, sono W. Stiamo lavorando nello sviluppo neur e l'ELL di USPC. Oggi vi mostreremo il test di alta qualità del pesce zebra. Ok, iniziamo.
Prima di tutto, ti mostreremo come abbiamo fatto il test OKR per il pesce zebra adulto. Ora metti la spugna nella camera dei pesci e versaci dentro un po' d'acqua. Strizza un po' la spugna per eliminare le bolle d'aria.
Ora ti mostreremo come riparare il pesce con i perni passo dopo passo. Ora muoviamo un po' il pesce per assicurarci che la sua levetta dorsale sia rivolta verso l'alto e allunghiamo la coda per rendere il corpo dritto. Usa il morsetto dell'arteria per fissare la pinna caudale e attacca il morsetto alla camera usando l'argilla da modellare.
Dopo il fissaggio, versare altra acqua nella camera e soffiare un po' d'acqua verso il pesce per svegliarlo. Ora abbiamo finalmente finito con la preparazione e siamo pronti per la vera avventura. Questo è il test OKR.
Si noti che i due oggetti nella parte superiore dello schermo sono semplicemente il riflesso della grata sulla capocchia di spillo. Vediamo ora come abbiamo fatto il test OKR delle larve. Mettiamo il maschio e la femmina di pesce nella vasca di accoppiamento e lasciamo che depongano le uova.
Quindi raccogliamo le uova e le trasferiamo in un piatto di vetro. Usiamo la soluzione di metanfetamina e cellosio per riparare il pesce larva. La soluzione deve essere raffreddata rapidamente dopo essere stata riscaldata.
Quindi lo mettiamo in acqua ghiacciata e lo scuotiamo delicatamente fino a quando non diventa trasparente. Ora metti 20 millilitri di metilcellulosa in un piatto. Assicurarsi che non ci siano bolle d'aria nella soluzione.
Metti le larve in fila nella soluzione. Aggiungi una minuscola bolla d'aria da un microlitro nella vista in modo da poter vedere il riflesso della classificazione. Questa è la dimostrazione del comportamento OKR delle larve di pesce zebra di tipo selvatico.
Alla fine, ti mostreremo come eseguire il test OMR per il pesce zebra adulto. Prima di tutto, prendi un pesce e mettilo in una camera per pesci. Ora metti in posizione la camera dei pesci.
Quindi installare un cilindro bianco al centro della camera in modo che il pesce non possa passare il centro prima del test. È meglio lasciare che il pesce si adatti a questa condizione di illuminazione per un minuto. Ok, questa è la dimostrazione del test OMR per il pesce zebra adulto.
Ti abbiamo appena mostrato come eseguire il test OKR su pesci zebra adulti. In questo test, abbiamo tentato di fissare il pesce zebra con degli spilli invece che con la metilcellulosa. Utilizzando questo metodo, siamo riusciti a registrare una forte risposta che è durata oltre quattro ore.
Questo darà agli sperimentatori un sacco di tempo.
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Panoramica
La Risposta Optocinetica (OKR) è un test comportamentale utilizzato per valutare le funzioni visive dei zebrafish larvali. Questo articolo presenta un nuovo protocollo per misurare l'OKR nei zebrafish adulti, affrontando le limitazioni dei metodi esistenti.
Componenti Principali dello Studio
Area della Scienza
- Neuroscienze
- Analisi Comportamentale
- Scienza della Visione
Contesto
- L'OKR è un metodo consolidato per valutare la funzione visiva.
- I protocolli precedenti si sono concentrati principalmente sui zebrafish larvali.
- C'è la necessità di metodi standardizzati applicabili ai zebrafish adulti.
- Questo studio mira a colmare questa lacuna con un nuovo protocollo.
Obiettivo dello Studio
- Sviluppare un metodo affidabile per misurare l'OKR nei zebrafish adulti.
- Migliorare la comprensione dell'elaborazione visiva nei zebrafish adulti.
- Fornire un protocollo standardizzato per la ricerca futura.
Metodi Utilizzati
- Sviluppo di un nuovo setup sperimentale per zebrafish adulti.
- Implementazione di stimoli visivi per elicitare l'OKR.
- Analisi quantitativa delle risposte dei movimenti oculari.
- Confronto con i protocolli esistenti per zebrafish larvali.
Risultati Principali
- Il nuovo protocollo misura con successo l'OKR nei zebrafish adulti.
- I risultati indicano differenze significative nella risposta visiva rispetto agli stadi larvali.
- Il metodo mostra promesse per applicazioni più ampie nella neuroscienza visiva.
- I dati supportano la validità del nuovo protocollo per studi futuri.
Conclusioni
- Lo studio fornisce un approccio nuovo per valutare la funzione visiva nei zebrafish adulti.
- I risultati contribuiscono alla comprensione dell'elaborazione visiva attraverso le varie fasi della vita.
- Il nuovo protocollo può facilitare ulteriori ricerche nei modelli di zebrafish.
Domande Frequenti
Executive Industry Relevance
Assessing visual function in adult zebrafish enables mechanistic de-risking of neuroscience targets related to sensory processing and retinal health. The optokinetic response (OKR) assay provides a quantitative, behavior-based readout for target validation in discovery workflows. This method supports predictive confidence by linking genetic or pharmacological manipulations to functional visual outputs in a disease-relevant system.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of visual pathway integrity and functional target engagement in adult zebrafish.
- Operational Value: Provides a reproducible behavioral assay for de-risking targets affecting sensory or neural function.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Generates quantitative eye movement measurements suitable for high-content screening of compound libraries.
- Operational Value: Uses a custom-built apparatus with standardized visual stimuli to ensure assay consistency across runs.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Supports continuity from larval to adult models, enabling lifespan-based visual function profiling.
- Operational Value: Demonstrates stability over extended recording periods (up to 4 hours), facilitating longitudinal or time-course studies.
Pipeline & Workflow Integration
The OKR assay fits within the discovery continuum from target hypothesis testing to preclinical validation, particularly for neuroscience and sensory modality programs.
- Discovery Biology: Supports functional validation of genes or compounds modulating visual processing and neural circuitry.
- Screening: Delivers quantifiable dependent variable outputs (eye tracking response) for compound effect comparison.
- Analytics: Enables statistical analysis of response magnitude and duration to support go/no-go decisions.
- Translational Research: Provides a disease-relevant system for modeling visual dysfunction across developmental stages.
- Enterprise Reuse: Represents a reusable platform for cross-functional teams studying sensory phenotypes.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in target selection by reducing mechanistic ambiguity in visual pathways.
- Operational Value: Delivers standardized, scalable behavioral readouts with minimal variability.
- Strategic Value: Improves capital efficiency by enabling early-stage functional screening before costly mammalian models.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of targets based on phenotypic validation in a vertebrate system.
Implementation Considerations
- Requires expertise in zebrafish handling, behavioral neuroscience, and visual stimulus design.
- Depends on custom apparatus with motor-driven grating, illumination chamber, and fixation system.
- Necessitates standardization of fish preparation, water conditions, and lighting across operators.
- Involves adaptation considerations when transferring protocols between larval and adult models.
- Limited by the need for skilled manual fixation and potential variability in fish responsiveness.
