Low-stress Learning percorso con la Maze Lashley III nel Mice

Nel labirinto Lash three, i topi hanno imparato a navigare attraverso una serie di braccia per raggiungere un ambiente di pseudo gabbia domestica. Durante le prove ripetute all'inizio di una prova, i topi vengono collocati nello Starbucks, che è separato dal labirinto da una porta. Una volta aperta la porta, i topi entrano nelle braccia del labirinto e possono esplorare liberamente il percorso che il topo percorre.

Il labirinto viene registrato, compresi gli ingressi nelle zone di errore senza uscita. All'ingresso nella scatola d'oro, un'altra porta viene chiusa per impedire il rientro nel labirinto e indirizzare il topo ad entrare nella pseudo gabbia domestica. Concludendo la prova del labirinto, le prestazioni dei labirinti vengono confrontate tra gruppi di età o ceppi per valutare il ruolo nell'apprendimento e nella memoria.

Ciao, sono Amanda Bressler. Lavoro nel laboratorio di Anne Andrews qui alla Pennsylvania State University. Oggi ti mostrerò come utilizzare il labirinto a tre Lashley.

Usiamo questo labirinto principalmente nel nostro laboratorio per studiare l'invecchiamento di topi geneticamente modificati. Quindi eccoci qui. Per prima cosa, vediamo come appare il labirinto dei tre Lashley.

Il labirinto della scatola di partenza, i bracci e la scatola d'oro sono modulari per consentire la pulizia e la modificabilità del labirinto. Le pareti della scatola di partenza, del labirinto, delle braccia e della scatola d'oro sono tutte costruite in plexiglass nero per eliminare i segnali visivi dall'esterno e dall'interno del labirinto. Le braccia del labirinto sono lunghe 45 centimetri, alte sette centimetri e larghe cinque.

Le porte che conducono ai bracci consecutivi della mazza sono quattro centimetri per quattro centimetri e si trovano a 11 centimetri dalle pareti esterne della mazza, la scatola d'oro è lunga 19,5 centimetri per sette centimetri di altezza per cinque centimetri di larghezza. La casella di partenza è di otto centimetri per 9,5 centimetri per sette centimetri. Pezzi separati di plexiglass trasparente sono posizionati sopra il labirinto di Starbucks e la scatola d'oro per consentire la visualizzazione di ogni topo mentre avanza attraverso il labirinto.

Pur impedendo ai topi di fuggire, il labirinto poggia su una base costruita in plexiglass rosso che è abbastanza grande da contenere i tre pezzi del labirinto, oltre a una pseudo gabbia domestica che ha le stesse dimensioni della gabbia domestica standard dell'animale. Per preparare le gabbie pseudo domestiche prima della prima prova MACE, aggiungere materiale fresco per la lettiera al fondo delle singole gabbie con le porte tagliate ai lati, posizionare le parti superiori dei fili sulla gabbia, sul fondo e numerarle individualmente una per ogni animale in una coorte di test. Queste gabbie serviranno come gabbie individuali pseudo domestiche per ogni animale per tutta la durata del periodo di test.

Con il labirinto preparato, vediamo come condurre i test comportamentali di almeno un'ora. Prima del test, spostare gli animali nella sala di test comportamentale per consentire loro di acclimatarsi all'ambiente di test. 30 minuti Prima del test, rimuovere il cibo e l'acqua da tutte le gabbie domestiche.

Tieni il cibo e l'acqua nella sala dei test comportamentali, ma fuori dalla portata dei topi. L'esperimento è in genere il tempo in modo che il cibo e l'acqua vengano rimossi 30 minuti dopo il passaggio dalla fase di luce alla fase di buio, quando si verifica il picco di alimentazione. Ciò garantisce che gli animali siano per lo più sazi di cibo e acqua prima del test a scopo dimostrativo.

In questo video, mostriamo questa procedura in condizioni di luce intensa. Il test viene solitamente condotto durante la fase di buio del ciclo luce-buio. Trascorso il periodo di pre-test di 30 minuti, pulire il labirinto con etanolo al 70%.

Lascia la porta che conduce dallo Starbucks al labirinto. Braccia chiuse. Le porte ad entrambe le estremità della scatola d'oro devono essere lasciate aperte.

Ora posiziona la pseudo gabbia domestica corrispondente al primo animale. Alla fine della scatola d'oro, porta il primo topo nel labirinto. Stringendolo a coppa in mano.

Metti il mouse nello Starbucks e rimetti il coperchio. Quando si è in posizione per osservare il labirinto senza ostacoli, aprire lo sportello della scatola di partenza e avviare immediatamente tre cronometri. Quando tutte e quattro le zampe del mouse hanno lasciato la scatola di avvio, chiudere lo sportello della scatola di partenza e fermare manualmente il primo timer.

Registra il percorso. Il mouse viaggia mentre naviga nel labirinto. Su un foglio dei punteggi, un topo entra in una nuova zona o braccio del labirinto quando tutte e quattro le zampe si sono incrociate in quell'area.

Quando tutte e quattro le zampe entrano nella scatola della porta, chiudi la porta tra il labirinto e la scatola d'oro e ferma il secondo cronometro. Quando il topo è completamente entrato nella pseudo gabbia domestica, chiudi la porta tra la scatola d'oro e la gabbia. Arrestare il terzo cronometro.

Registra i tempi dei tre cronometri e conta il numero di errori commessi dal mouse. Un errore è definito come l'ingresso in una zona senza uscita o il viaggio a ritroso attraverso un braccio del labirinto già percorso. Lasciare l'animale nella pseudo gabbia domestica per un minuto prima di rimetterlo nella gabbia domestica.

Dopo aver testato tutti i topi della coorte, attendere 30 minuti e poi restituire cibo e acqua a tutti i topi. Infine, riporta gli animali nella loro stanza della colonia. Ripetere questa procedura per notti consecutive con una prova per giorno di prova per animale fino a quando tutti i topi della coorte non hanno raggiunto un criterio di apprendimento definito o fino a quando non si è verificato un numero predeterminato di prove di prova.

Un topo è classificato come colui che ha imparato il labirinto quando può eseguire il compito con errori da zero a uno in due prove consecutive. I topi vengono testati nello stesso ordine in prove successive. Ora mostreremo alcuni risultati comportamentali rappresentativi.

Qui vediamo i dati di giovani topi di 24 mesi, maschi di 24 mesi, C 57 neri di sei e CR che sono stati addestrati sul labirinto di lashley per un massimo di 15 prove. Nella figura due A, i giovani topi hanno imparato il labirinto in una media di 7,6 giorni. Al contrario, gli animali anziani hanno impiegato 11,7 giorni per raggiungere il criterio.

C'era una forte tendenza per l'invecchiamento C 57, sei topi neri NCR R a impiegare più tempo per imparare la mazza. L'indice di apprendimento è il rapporto tra le entrate corrette del braccio e i segmenti totali del percorso percorso in una singola prova quando l'indice di apprendimento è calcolato nella figura due B.Entrambi i gruppi di età hanno un rapporto di circa 0,50 per la prima prova. Sia i topi giovani che quelli anziani mostrano un aumento costante dell'indice di apprendimento dalle prove due alla quarta, ma non ci sono state differenze significative tra i due gruppi. Mostrato.

Ecco i dati degli studi che esaminano l'effetto della tensione di fondo sul comportamento di apprendimento. Sono stati confrontati i topi giovani maschi, C 57, neri sei NCR e CD uno di controllo da quattro a cinque mesi. I topi C 57 black six sono gli stessi topi della giovane coorte nella figura due.

Nella figura tre, un topo CD uno impara il labirinto di lashley three in 4,5 giorni. Non c'è stata alcuna differenza significativa tra i ceppi in giorni necessari per raggiungere i criteri. Al contrario, l'esame dell'indice di apprendimento nella figura tre B mostra che mentre tutti gli animali stavano navigando per caso nel labirinto durante la prima prova, i topi CD 1 hanno imparato il compito più rapidamente.

Ciò è illustrato dall'aumento statisticamente significativo dell'indice di apprendimento negli studi da due a quattro nei topi CD 1 rispetto ai topi C 57, BL 6 e CR. È interessante notare che, se i topi CD 1 continuano ad essere addestrati nel labirinto oltre il punto di raggiungimento del criterio, mostrano un comportamento indicativo di sovrallenamento Nella figura quattro A, c'è un aumento del numero di errori commessi dopo il quinto giorno. Il quinto giorno è stato il giorno in cui i topi CD uno hanno raggiunto il criterio.

I topi CD 1 trascorrevano anche più tempo all'interno del MACE dopo aver acquisito il compito, che può essere visto nella figura quattro B.So vi abbiamo appena mostrato come utilizzare il labirinto di Lashley tre per misurare l'apprendimento e la memoria e i topi. Quando si implementa questo esperimento nel proprio laboratorio, potrebbe essere necessario condurre un lavoro pilota poiché diversi ceppi di topi acquisiranno le MA a velocità diverse e potrebbero essere soggetti a sovrallenamento. Grazie per aver guardato e buona fortuna per i tuoi esperimenti futuri.