Name: Fabbricazione e impianto di elettrodi nel Aplysia californica Per registrazioni multi-canale neurale e muscolare in intatto, Animali liberamente Comportarsi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-04T17:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 37 s
Description: Scopri come fabbricare e impiantare elettrodi multicanale in Aplysia californica per registrare l'attività neurale e muscolare durante il comportamento alimentare. Questa tecnica consente studi elettrofisiologici in vivo su animali liberamente comportanti.

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Noi riconosciamo con gratitudine il sostegno del NIH (NS047073 a HJC). Anche noi siamo grati a Caterina Kehl per lei i primi esperimenti con Kwik-Sil, che ci ha incoraggiato ad usarlo per la nostra applicazione.

1. Elettrodo Fabrication <ol><li> Per creare l'elettrodo, usare le forbici per tagliare un pezzo di smalto rivestite 0.001 pollici filo di acciaio inox del diametro di circa 2 metri di lunghezza. Allegare una pallina di gomma pane a ciascuna estremità del filo, piegare il filo a metà, e far girare le estremità per creare un doppino, chiamato elettrodo differenziale. </li><li> Nastro entrambe le estremità del filo per evitare svelare. Fare quattro elettrodi differenziale, utilizzando un nastro di colore diverso per ogni elettrodo differenziale a scopo di identificazione (Figura 1A). </li><li> Twist due elettrodi differenziale insieme, lasciando due centimetri non torti da una parte e 1 pollice su l'altra estremità. Ripetere con la coppia di elettrodi rimanenti differenziale (Figura 1B). </li><li> Twist entrambe le serie di due elettrodi differenziale insieme, facendo in modo che le estremità rimangono torti. Tenere il gruppo elettrodi in silicone e applicare la colla casa all'incrocio dei quattro elettrodi differenziale, lasciando l'estremità libere. Hang e consentire la colla per asciugare per almeno 4 ore (Figura 1C). </li><li> Per isolare i rami, giaceva il gruppo elettrodi su un piatto, mobile, tale superficie un pezzo di legno. Si aprono a ventaglio le estremità e fissarli con nastro adesivo. Utilizzare un piccolo pezzo di plastica per elevare il gruppo elettrodi appena prima che i rami, e sicuro che con il nastro. </li><li> In un microscopio da dissezione, utilizzare pinze per rivestire i rami con la colla al silicone. Le estremità lunga da 1 pollice sarà dentro l'animale, per cui dovrebbero avere uno strato molto sottile di colla. Lasciare asciugare la colla per almeno 3 ore. </li><li> Accorciare la 1-pollice lungo termine di un elettrodo differenziale a due centimetri. Su ogni filo, togliere 1 cm di silicone e smalto. Curl un filo nudo in un gancio per la registrazione. Piegare l'altro filo in alto e lontano dal gancio, questo servirà come il filo di terra. Ripetere l'operazione per i rimanenti tre elettrodi. </li><li> Selezionare uno dei quattro elettrodi sul fine da 2 pollici. Usare pinze per raschiare silicone e smalto fuori, esponendo 1 cm di nudo filo di acciaio inossidabile su ciascuno dei 2 fili. Saldare un connettore d'oro a ciascuno dei due fili. Usare un pezzo di nastro di laboratorio per assicurare la fine e di mantenere una separazione tra il suolo ed i perni di registrazione. Ripetere l'operazione per i rimanenti tre elettrodi. </li><li> Collegare un 1-2cm sfera della colla di silicone al cavo, a circa 1,5 cm dalla fine gancio per fissare gli elettrodi dentro l'animale. Lasciare asciugare per almeno un'ora (Figura 1D). <img src="/files/ftp_upload/1791/1791fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Dell'Assemblea Fabrication elettrodi. (A) elettrodo differenziale singola costituita da un filo piegato e intrecciato con la sua estremità fissato con nastro adesivo. (B) Due elettrodi differenziale intrecciati insieme, lasciando spazio torti alle estremità. Diverse nastro colorato o un altro contrassegno deve essere utilizzato per identificare le estremità. (C) Tutti gli elettrodi differenziale quattro combinati in un singolo gruppo elettrodi formando un unico cavo, con sedi distaccate degli elettrodi individuali su ciascuna estremità, indicati con colori diversi di nastro. (D) forma finale del gruppo elettrodi. Sulla sinistra, ci sono arricciate ganci per le registrazioni e fili di terra per ogni elettrodo differenziale. Sulla destra, pin del connettore d'oro sono stati saldati i fili per la connessione all'amplificatore. Una palla di ancoraggio del silicone colla è stato anche collocato verso il lato sinistro del gruppo. </li></ol> 2. Preparazione di animali per l'impianto <ol><li> Selezionare un animale sano che pesa circa 350-450g. In risposta a piccoli pezzi di alghe, l'animale deve generare morsi ad intervalli da 3 a 5 secondi. L'intervento completo di impianto di elettrodi dovrebbe durare circa un'ora. </li><li> Per anestetizzare l'animale, si iniettano con il 30% w / v isotonica MgCl 2. Per evitare la perdita di emolinfa e MgCl 2, il sito di iniezione possono essere rivestiti in supercolla prima di rimuovere l'ago. <img src="/files/ftp_upload/1791/1791fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Schema che mostra come l'animale è appuntata per l'impianto di elettrodi, e la posizione della ferita (indicato da una barra). </li><li> Lay anestetizzato l'animale in un vassoio dissezione con il suo piede. Di fronte alla testa di animale in poi, spostare l'area di branchie alla vostra sinistra tale che l'animale è parzialmente su un fianco, appoggiato distanza. Definire con precisione i tentacoli anteriori (Figura 2). </li><li> Collocare il vassoio sul palco di un microscopio da dissezione. Sostenere il vassoio in un angolo di circa 20 gradi di elevare la testa e raccogliere il emolinfa nella coda, lontano dalla incisione. </li><li> Dissezione con forbici, avviare una incisione leggermente a destra del eyespot ed estenderlo da 1 a 1,5 centimetri anteriormente. Usa divaricatori attaccato ai bordi del vassoio per tenere aperta l'incisione (Figura 2; bar vicino nota incisione eyespot indicazione). </li><li> Per esporre la massa buccale, utilizzare pinze per sollevare la membrana trasparente sottola pelle e usare le forbici per tagliare un'apertura corrispondente l'incisione principale. Rimboccare i bordi della membrana in divaricatori. </li></ol> 3. L'impianto di elettrodi <ol><li> Posizionare il gruppo elettrodi su un micromanipolatore e spostarlo sopra incisione dell'animale. </li><li> Il nervo radular è più difficile da accedere, e dovrebbe essere affrontata prima. Ci sono due opzioni per l'accesso al nervo radular. </li><li> La prima opzione, che è preferibile, è di guardare sotto il ganglio buccale tra BN1 e BN2. Se un ramo del nervo radular è visibile, utilizzare punta fine pinze piegato in un gancio per sollevare il ramo (Figura 3, ciclo di RN sotto ganglio etichettati 1). </li><li> Se un ramo del nervo radular non è accessibile al di sopra del muscolo, una seconda opzione è quella di accedervi tramite una piccola incisione in I2 accanto al tessuto connettivo alla base del ganglio vestibolare (Figura 3, RN sotto muscolare etichettati 2). L'incisione in I2 deve passare attraverso due strati del muscolo I2. Tenere su il bordo del muscolo incisione con una pinza dritta e usare il forcipe agganciato per tirare fuori un ramoscello di RN. </li><li> Tenendo premuto il nervo con le pinze agganciato, utilizzare un diverso set di pinze per manipolare il gancio elettrodo sul nervo. </li><li> Utilizzare il micromanipolatore per sollevare il gancio in modo che il nervo viene innalzato dalla massa buccale chiara e precisa dei nervi o altri tessuti. Non estendere il nervo. </li><li> Asciugare l'elettrodo con un Kim-Wipe o aspirazione fuori il liquido in eccesso con una siringa. Tensione dell'acqua può causare il coraggio di crollare su se stesso, o un sigillo d'acqua per formare sotto il nervo. In entrambi i casi, l'area deve essere completamente asciutta prima di colla è applicata. </li><li> Applicare una goccia di colla dove la base del gancio è in contatto con la parte inferiore del nervo. Applicare una goccia di soluzione fisiologica o Aplysia emolinfa per impostare la supercolla. Quando la colla è niente di bagnato dovrebbe essere spostato come ottenere collante tra il filo ed il nervo avrebbe bloccato il collegamento elettrico. </li><li> Secco il gancio di nuovo. Mix Kwik-Sil colla su un impacco di ghiaccio. </li><li> Usare la punta di uno spillo di applicare una piccola quantità di Kwik-Sil colla, ricoprendo completamente qualsiasi filo esposto del gancio, ma non il filo di terra. </li><li> Lasciare che la colla da impostare per circa 5 minuti, riaggiustare la colla se si tira fuori dalle sezioni del gancio. La colla è impostato quando si attacca più al tatto con il perno (Figura 4 mostra la configurazione finale). </li><li> Una volta che l'elettrodo nervo radular è impostato, il muscolo I2 è possibile accedere. Nella zona tra BN1 e BN2, usare il forcipe agganciati al gancio e per separare due fasce del muscolo I2 dal resto del muscolo tirando delicatamente le bande verso l'alto. Collegare l'elettrodo con la stessa procedura. </li><li> Nervi buccale 2 e 3 sono facilmente accessibili e gli elettrodi sono collegati con la stessa procedura. </li><li> Una volta che tutti gli elettrodi sono collegati, far scorrere il gruppo elettrodi in l'animale fino alla ancoraggio silicone. </li><li> Sutura l'incisione chiuso intorno al cavo elettrodo sporgente, mantenendo l'ancora dentro l'animale. Supercolla i punti per garantire una buona tenuta. </li><li> Inserire le punte d'oro connettore all'altra estremità dell'elettrodo in un piccolo blocco di polistirolo. Rispedire l'animale verso il serbatoio principale in un contenitore aerato isolamento per il pernottamento di recupero. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1791/1791fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Uno schema dell'apparato di alimentazione Aplysia conosciuta come la massa buccale. Vengono mostrati i nervi buccale (BN1, BN2, BN3), il nervo radular (RN) che esce dal fondo del ganglio buccale, poi si tuffa sotto il muscolo, e la posizione sul muscolo I2 cui è collegato l'elettrodo. <img src="/files/ftp_upload/1791/1791fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Schema di singolo elettrodo collegato ad un nervo (o muscolare) e incollate in posizione. Si noti che il de-isolata regione del gancio arricciata è in contatto diretto con il nervo (o muscolare), ancorata in posizione con colla, e isolati elettricamente dal mezzo liquido con Kwik-Sil. Si noti inoltre che la punta deinsulated dell'elettrodo di massa è esposto al mezzo fluido. 4. Registrazione <ol><li> Acclimatare l'animale in un contenitore aerato, mentre collegato l'apparecchio di controllo per almeno 1,5 ore. Monitorare il segnale, mentre l'animale è acclimatando per verificare che tutti gli elettrodi sono di lavoro e che i livelli di rumore sono bassi. </li><li> Utilizzare una videocamera per registrare il comportamento alimentare durante l'uso del computer per registrare i segnali dagli elettrodi neurali e muscolari. Sincronizzare i video e le registrazioni degli elettrodi utilizzando un segnale onda quadra che controlla un contatore digitale in vista della telecamera mentre si è contemporaneamente registrato come un canale aggiuntivo sul computer in Axoscope. </li><li> Alimentazione comportamenti sono suscitato dalle tecniche dedescritto nel Morton e Chiel 1993. </li></ol> Anche se gli animali invertebrati non richiedono l'approvazione formale da parte di un uso animale e del comitato istituzionale di cura, ci siamo assicurati che tutti i trattamenti di Aplysia minimizzare i danni e sofferenze agli animali, e che tutte le tecniche chirurgiche sono fatto mentre l'animale è completamente anestetizzato. Rappresentante Risultati <img src="/files/ftp_upload/1791/1791fig5.jpg" alt="Figura 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 5"> Figura 5. (A) le registrazioni simultanee a quattro canali da un muscolo (il muscolo goniometro I2), e da tre nervi buccale (il nervo radular, RN, nervo buccale 2, BN2, e del nervo vestibolare 3, BN3) durante una risposta deglutizione. (B) Un fermo immagine dal video registrazione simultanea degli animali liberamente comportarsi come ingoia una striscia di alga pretagliate (0,5 cm di larghezza), che è stato segnato a intervalli di 0,5 cm con fasce bianche in modo che i suoi movimenti possono essere facilmente visualizzati come Si nutre.

<ol><li>Lu, H., Chestek, C. A., Shaw, K. M., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+extracellular+stimulation+of+individual+neurons+in+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neural+Eng%22%5BJournal%5D)">Selective extracellular stimulation of individual neurons in ganglia.</a> J. Neural Eng. 5, 287-309 (2008).</li>
<li>Morton, D. W., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+buccal+nerve+activity+that+distinguishes+ingestion+from+rejection+can+be+used+to+predict+behavioral+transitions+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">In vivo buccal nerve activity that distinguishes ingestion from rejection can be used to predict behavioral transitions in Aplysia.</a> J Comp. Physiol. A. 172, 17-32 (1993).</li>
<li>Warman, E. N., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+technique+for+chronic+single+extracellular+recording+in+freely+behaving+animals+using+pipette+electrodes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A new technique for chronic single extracellular recording in freely behaving animals using pipette electrodes.</a> J. Neurosci. Methods. 57, 161-169 (1995).</li>
<li>Ye, H., Morton, D. W., Chiel, H. J., J, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((nbsp%3BNeuromechanics+of+multifunctionality+during+rejection+in+Aplysia+californica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">nbsp;Neuromechanics of multifunctionality during rejection in Aplysia californica.</a> J. Neurosci. 26, 10743-10755 (2006).</li>
</ol>

Una innovazione fondamentale che ha fatto queste registrazioni di successo sta combinando gli elettrodi in un unico cavo. Due registrazioni elettrodi sono stati usati in precedenza, ma l&#39;espansione a quattro elettrodi individuali ha portato alla formazione di aderenze chirurgiche che spesso impedito all&#39;animale di fare movimenti di alimentazione normale. Combinando gli elettrodi in un cavo di ridurre la maggior parte degli elettrodi dentro l&#39;animale, che a sua volta riduce la risposta immunitaria e permette ...

<table><tbody><tr><td>Filo di acciaio inossidabile rivestito in smalto</td><td>California Fine Wire Company</td><td></td><td>0.001D, rivestimento h</td></tr><tr><td>Colla siliconica Household Silicone II</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adesivo Kwik-Sil</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Supercolla Duro Qwik-Gel</td><td>Henkel Corp</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amplificatore A-M Systems modello 1700</td><td>A-M Systems</td><td></td><td>Impostazioni del filtro: 100-1000 Hz per i nervi, 10-1000 Hz per il muscolo I2</td></tr><tr><td>Axoscope 10.1</td><td>Molecular Devices</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Perni connettore dorati</td><td>Bulgin</td><td>SA3148/1</td><td></td></tr><tr><td>Prese connettore dorate</td><td>Bulgin</td><td>SA3149/1</td><td></td></tr></tbody></table>

fabbricazione e impianto di elettrodi nel aplysia californica per registrazioni multi-canale neurale e muscolare in intatto, animali liberamente comportarsi

Electrode Fabrication and Implantation in Aplysia californica for Multi-channel Neural and Muscular Recordings in Intact, Freely Behaving Animals

Registrazione da nervi e muscoli chiave di<em&gt; Aplysia</em&gt; Durante comportamento alimentare ci permette di studiare i modelli di controllo neurale in un animale intatto. Contemporaneamente la registrazione da nervi e muscoli più ci dà informazioni precise sui tempi di attività neurale. Metodi di registrazione precedente hanno lavorato per due elettrodi, ma lo studio dei nervi o dei muscoli necessari ulteriori combinando e la media delle registrazioni degli animali multiple, che ha reso difficile determinare dettagli di tempi e graduale, a causa della variabilità di risposta alla risposta, e da animale ad animale. L&#39;impianto di quattro elettrodi individuo ha un tasso di successo molto bassa a causa della formazione di aderenze che impediscono di compiere movimenti animali normale alimentazione. Abbiamo sviluppato un nuovo metodo di fabbricazione di elettrodi che riduce la maggior parte degli elettrodi all&#39;interno dei movimenti degli animali, affinché per l&#39;alimentazione normale. Utilizzando una combinazione di colle per attaccare i risultati elettrodi in un isolamento più affidabile dell&#39;elettrodo che dura più a lungo, rendendo possibile la registrazione per periodi fino a una settimana. La tecnica di fabbricazione che descriviamo potrebbe essere esteso per incorporare diversi elettrodi supplementari e sarebbero applicabili agli animali vertebrati.

Una tecnica è descritta per impiantare quattro<em&gt; In vivo</em&gt; Elettrodi per monitorare il controllo neuromuscolare del comportamento alimentare in<em&gt; Aplysia californica</em&gt;.

Fabbricazione e impianto di elettrodi nel Aplysia californica Per registrazioni multi-canale neurale e muscolare in intatto, Animali liberamente Comportarsi

La registrazione da nervi e muscoli chiave di Aplysia durante il comportamento alimentare ci permette di studiare i pattern del controllo neurale in un animale intatto.

Per realizzare il montaggio dell'elettrodo per registrazioni in vivo multicanale, vengono create quattro elettrodi differenziali e intrecciati insieme, con i singoli elettrodi differenziali che si diramano separatamente. Alle estremità, l'animale anestetizzato viene fissato e viene praticata un'incisione laterale rispetto alla macchia oculare. Vengono individuati i nervi e i muscoli bersaglio e gli elettrodi vengono attaccati alla goccia di colla superattiva alla base dell'uncino, quindi isolati con sigillante rapido.Ciao, sono Miranda Collins del laboratorio del Dottor Halal Thiel del dipartimento di biologia della Kiss Western Reserve University. Oggi vi mostrerò una procedura per l'assemblaggio e l'implantazione di elettrodi per registrazioni in vivo in SIA, California. Utilizziamo questa procedura nel nostro laboratorio per studiare il controllo neuromuscolare dell'alimentazione e della SIA.Iniziamo. Per creare l'elettrodo, utilizzare delle forbici per tagliare un pezzo di filo di acciaio inossidabile rivestito con smalto, del diametro di 0,001 pollici, lungo circa due piedi. Applicare una piccola pallina di pasta modellabile ad ogni estremità del filo.Piegare il filo a metà e intrecciare le estremità per creare una coppia intrecciata chiamata elettrodo differenziale. Fissare con del nastro entrambe le estremità del filo per evitare che si sfilino. Realizzare quattro elettrodi differenziali utilizzando un colore diverso di nastro per ciascun elettrodo differenziale.Per scopi di identificazione, intrecciare due degli elettrodi differenziali insieme, lasciando due pollici non intrecciati su un'estremità e un pollice sull'altra estremità. Ripetere con la coppia rimanente di elettrodi differenziali. Intrecciare insieme entrambe le coppie di elettrodi differenziali, assicurandosi che le estremità rimangano non intrecciate.Sollevare l'insieme dell'elettrodo e applicare una colla siliconica domestica al giunto dei quattro elettrodi differenziali, lasciando libere le estremità. Appendere e lasciare asciugare la colla per almeno quattro ore. Per isolare i rami, appoggiare l'insieme dell'elettrodo su una superficie piana mobile, come un pezzo di legno.Utilizzare un piccolo pezzo di plastica per sollevare l'insieme dell'elettrodo appena prima che si dirami, e fissarlo con del nastro adesivo. Disporre i capi a ventaglio e fissarli con del nastro adesivo. Al microscopio stereoscopico, utilizzare una pinzetta per ricoprire i rami con colla al silicone.Gli estremi lunghi un pollice saranno all'interno dell'animale, quindi dovrebbero avere uno strato molto sottile di colla. Lasciare asciugare la colla per almeno tre ore. Accorciare l'estremità lunga un pollice di un elettrodo differenziale a due centimetri su ciascuna estremità dell'elettrodo.Utilizzare una pinzetta per rimuovere il silicone e lo smalto da entrambi i fili. Per esporre un centimetro di filo nudo, arrotolare un filo nudo a formare un gancio per la registrazione. Quindi portare l'altro filo verso l'alto e lontano dal gancio, in modo che funga da filo di terra; sull'estremità lunga due pollici, saldare un perno connettore d'oro a ciascun filo.Utilizzare un pezzo di nastro per fissare l'estremità e mantenere uno spazio tra i perni di massa e di registrazione. Ripetere questi passaggi in modo da avere ganci e connettori dorati su tutti e quattro gli elettrodi differenziali. Applicare una pallina di colla al silicone lunga da uno a due centimetri sul cavo, a circa 1,5 pollici dall'estremità con il gancio.Per fissare gli elettrodi all'interno dell'animale, lasciarlo asciugare per almeno un'ora, scegliere un animale sano che pesi tra i 350 e i 450 grammi in risposta a piccoli pezzi di alga. L'animale dovrebbe produrre morsi a intervalli compresi tra tre e cinque secondi. L'intervento chirurgico completo, compreso l'impianto degli elettrodi, dovrebbe richiedere circa un'ora.Posizionare l'animale anestetizzato su un vassoio per dissezione con il piede rivolto verso il basso e la testa dell'animale rivolta verso l'alto. Ruotare la zona delle branchie a sinistra in modo che l'animale sia parzialmente di lato, inclinato verso l'esterno, con i tentacoli anteriori fissati. Posizionare il vassoio sul piano di un microscopio stereoscopico.Posizionare il vassoio a un angolo di circa 20 gradi per sollevare la testa e raccogliere l'emolinfa nella parte terminale lontano dall'incisione; utilizzando forbici da dissezione, praticare un'incisione leggermente a destra del punto oculare e prolungarla da uno a 1,5 centimetri verso la testa. Usare i vostri trapani. Fissarli ai bordi del vassoio per mantenere l'incisione aperta.Per esporre la massa buccale, utilizzare la pinzetta per sollevare la membrana trasparente al di sotto della pelle e usare le forbici per praticare un'apertura, allineandola all'incisione principale. Inserire i bordi della membrana sotto i retrattori.Posizionare l'insieme dell'elettrodo su un micromanipolatore e spostarlo sopra l'incisione dell'animale. L'attacco di ciascuna delle quattro elettrodi richiederà circa da 10 a 15 minuti; verrà mostrato innanzitutto l'accesso ai nervi, seguito quindi il collegamento dell'elettrodo al nervo finale. Tuttavia, nella pratica, ciascun nervo dovrebbe essere collegato a un elettrodo prima che venga esposto il nervo successivo.Il nervo ular è il più difficile da raggiungere e andrebbe quindi accesso per primo. Esistono due opzioni per accedere al nervo ular. La prima opzione, che è preferibile, consiste nel cercare al di sotto del ganglio buccale tra BN uno e VN due.Se un ramo del nervo ular è visibile, utilizzare una pinzetta a punta fine piegata a uncino per sollevare il ramo. Se un ramo del nervo ular non è accessibile al di sopra del muscolo, un'alternativa consiste nel raggiungerlo mediante una piccola incisione in I due vicino al tessuto connettivo alla base del ganglio buccale. L'incisione in I due deve attraversare due strati del muscolo I due per applicare un elettrodo a I due.Utilizzare la pinza a uncino per sollevare e separare due fasce del muscolo I, accesso al nervo buccale due qui. Il nervo buccale tre si trova qui e verrà utilizzato per dimostrare l'applicazione dell'elettrodo. Tutti gli elettrodi vengono applicati nello stesso modo qui dimostrato sul nervo buccale tre.Una volta che il nervo è agganciato alla pinzetta, utilizzare un altro paio di pinzette per posizionare un elettrodo sul nervo mediante il micromanipolatore. Sollevare l'uncino in modo da sollevare il nervo, staccandolo dalla massa buccale. Assicurarsi che non vi siano altri nervi o tessuti sollevati, alzando il più possibile il nervo di mezzo centimetro o meno.Per evitare di stirare eccessivamente il nervo, utilizzare un fazzoletto di carta kim per asciugare l'elettrodo e la zona adiacente del nervo. Un perno da insetto viene usato per applicare la colla; fissare l'elettrodo con una piccola goccia di colla istantanea nel punto in cui la base dell'uncino è a contatto con il fondo del nervo. Applicare una goccia di soluzione salina di alysia o emolinfa per far indurire la colla istantanea.Quindi asciugare il gancio in rosso su una miscela di pacchetto di ghiaccio. Incollare rapidamente con colla sigillante. Questo mantiene la colla lavorabile per circa 30 minuti.Potrebbero essere necessarie ulteriori mescolanze nel corso dell'intervento chirurgico. Utilizzare il perno per insetti per ricoprire completamente con una piccola quantità di sigillante rapido qualsiasi filo esposto dell'uncino, evitando il filo di massa.Lasciare asciugare la colla per cinque minuti. Riregolare la colla. Se si stacca dal gancio, attendere che la colla sia completamente asciutta prima di accedere al nervo successivo.Una volta attaccati tutti gli elettrodi, inserire l'insieme degli elettrodi nell'animale fino all'ancora in silicone. Suturare l'incisione intorno al cavo degli elettrodi sporgente. Mantenendo l'ancora all'interno dell'animale, incollare con colla cianoacrilica i punti di sutura per garantire una buona tenuta.Inserire le punte del connettore dorato all'estremità opposta dell'elettrodo in un piccolo blocco di polistirolo espanso. Restituire l'animale al serbatoio principale in un contenitore di isolamento aerato per il recupero durante la notte. Abituare l'animale in un contenitore aerato mentre è collegato all'apparecchiatura di registrazione per almeno 1,5 ore.Monitorare il segnale mentre l'animale si abitua per verificare che tutti gli elettrodi funzionino e che i livelli di rumore siano bassi. Utilizzare una videocamera per registrare il comportamento alimentare mentre si usa il computer per registrare i segnali provenienti dagli elettrodi neurali e muscolari. Sincronizzare le registrazioni video e quelle degli elettrodi mediante un segnale a onde quadre che controlla un contatore digitale nel campo visivo della videocamera mentre viene contemporaneamente registrato come canale aggiuntivo sul computer.In un'analisi durante l'alimentazione dell'animale, si osserveranno picchi di attività nei nervi e nei muscoli. Ecco un esempio di un modello di deglutizione con attività EMG da I due e ENG da RN BN due e BN tre. Vi abbiamo appena mostrato come fabbricare e impiantare elettrodi multicanale per registrare l'attività neurale e muscolare durante il comportamento alimentare in soggetti sia liberi di muoversi.Quando si esegue questa procedura, manipolare attentamente il nervo e assicurarsi di sigillare completamente i ganci di registrazione in modo che nessuna parte del filo risulti esposta. Grazie per aver guardato e buona fortuna con i vostri esperimenti.

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Questo studio introduce un metodo per la registrazione simultanea di potenziali di campo locale nel cervello, elettrocardiogrammi, i electromyograms e segnali di un ratto liberamente commovente di respirazione. Questa tecnica, che riduce i costi di sperimentali e semplifica l'analisi dei dati, contribuirà alla comprensione delle interazioni tra il cervello e gli organi periferici.

Registrazioni simultanee di potenziali di campo locale corticale, elettrocardiogramma, elettromiogramma e respirazione ritmo da un ratto liberamente commovente

Di seguito è descritto un metodo per l'impianto di più array di elettrodi polimerici attraverso regioni cerebrali anatomicamente distanti per la registrazione elettrofisiologica cronica in ratti liberamente in movimento. La preparazione e l'impianto chirurgico sono descritti in dettaglio, con particolare attenzione ai principi di progettazione per guidare l'adattamento di questi metodi per l'uso in altre specie.

Impianto cronico di più array di elettrodi polimerici flessibili

Presentato qui è un protocollo per la produzione di un sistema impiantabile per la registrazione cronologica in vivo di potenziali elettromiografici evocati e spontanei. Il sistema viene applicato allo studio della reinnervazione dei muscoli lariangici in seguito a lesioni nervose.

Un sistema impiantabile per l'elettromiografia cronica in vivo

Descriviamo qui un metodo per fabbricare array di microelettrodi Ti3C2 MXene e utilizzarli per la registrazione neurale in vivo.

Fabbricazione di array di microelettrodi Ti3C2 MXene per la registrazione neurale In Vivo

Abbiamo sviluppato un approccio semplificato ed economico per la fabbricazione di elettrodi e condotto registrazioni di segnali su più regioni in topi che si muovono liberamente. L'utilizzo dell'optogenetica, insieme all'elettrofisiologia multiregionale e alla registrazione del segnale del calcio, ha permesso la rivelazione delle attività neuronali in tutte le regioni nel modello di accensione delle crisi.

Un metodo integrato per la creazione di optrodi elettrofisiologici flessibili e convenienti per la registrazione in vivo multi-regione

Scopri come fabbricare e impiantare elettrodi multicanale in Aplysia californica per registrare l'attività neurale e muscolare durante il comportamento alimentare. Questa tecnica consente studi elettrofisiologici in vivo su animali liberamente comportanti.

Fabbricazione e impianto di elettrodi nel Aplysia californica Per registrazioni multi-canale neurale e muscolare in intatto, Animali liberamente Comportarsi (Video) | JoVE Journal

Fabbricazione e impianto di elettrodi nel Aplysia californica Per registrazioni multi-canale neurale e muscolare in intatto, Animali liberamente Comportarsi

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