Name: Rapida rilevazione omogenea dei saggi biologici Utilizzando Magnetic biopercezione sistema di modulazione (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-13T17:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 58 s
Description: Scopri un metodo di rilevazione omogenea e rapida di molecole biologiche con il sistema MMB, utilizzando microsfere magnetiche e marcatura fluorescente per rilevare IL-8 senza passaggi di lavaggio.

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Questo lavoro è stato in parte sostenuto dal Horowitz Ishaya Fondo.

IL-8 saggio: <ol><li> La miscela di reazione compresi i seguenti quattro componenti in 100 microlitri di volume finale di tampone nelle loro rispettive concentrazioni. 10 ml di sfere magnetiche con anticorpo di cattura a 100 perline / mL concentrazioni finali, 2 l di biotinilato IL-8 a 1 la concentrazione di anticorpi nano-gram/μl finale, 1 l di streptavidina proteina fluorescente a 20 nano-gram/μl concentrazione finale, e 1 ml di IL-8 target a 0,48 pico-gram/μl. I componenti vengono aggiunti uno ad uno per il tampone e poi agitato per 30 minuti. </li><li> Una reazione di controllo è preparato allo stesso modo senza l'IL-8 di destinazione. </li><li> Le reazioni sono poi collocati senza alcuna separazione o lavaggio in cuvette e controllati con il sistema MMB. </li></ol> MMB sistema: <ol><li> Posizionare la cuvetta nella sua posizione tra i due poli elettromagnetici. </li><li> Operare la corrente di modulazione ed attendere 30 secondi per consentire l'aggregazione e la condensazione delle perle </li><li> Misurare il segnale del amplificatore lock-in con un oscilloscopio. </li></ol> Rappresentante dei risultati: Ispezione visiva delle perle aggregati presentato una netta differenza tra la reazione con il target e la reazione senza il bersaglio. In tutte le reazioni con il bersaglio, le perle formano un unico aggregato denso che si muoveva dentro e fuori il raggio laser in modo uniscono. Tuttavia, in tutti la reazione senza il bersaglio, le perle erano meno aggregata e il loro movimento è stato meno unire (vedi Figura 1). <img src="/files/ftp_upload/1935/1935fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1: ispezione visiva del immunodosaggio a sandwich '(a) senza l'obiettivo di IL-8 (b) con l'obiettivo di IL-8. L'orologio di modulazione palo (giallo) e il segnale di uscita PMT (magenta), mentre la rilevazione 0,48 pico grammi IL-8 di destinazione sono presentati nella figura 1 (a). La modulazione di frequenza per ogni polo è a 2 Hz. Tuttavia, come è stato previsto teoricamente, quando le perline passare il raggio laser, la PMT rileva la luce fluorescente e non vi è un picco della tensione di uscita PMT. Pertanto, la frequenza di demodulazione è a 4 Hz. Quando il segnale di PMT e il raddoppio-modulazione dell'orologio (a 4 Hz), sono alimentati per il blocco amplificatore, il rilevatore di fase sensibile rileva la sincronizzazione e risultati con alta tensione (vedi Figura 2). <img src="/files/ftp_upload/1935/1935fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2: (a) l'orologio di modulazione (giallo) e il segnale di PMT (magenta) quando il rilevamento 0,48 pico grammi di IL-8 di destinazione. (B) Il blocco provocato tensione amplificatore a due diverse scansioni. Il blocco amplificatore non ha rilevato alcun segnale quando il campione di controllo è stato testato. Questo fatto, insieme con la differenza visiva di aggregazione suggerisce che il sistema MMB può chiaramente identificare la presenza di IL-8 di destinazione.

<ol><li>Danielli, A., Arie, A., Porat, N., Ehrlich, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+fluorescent-labeled+probes+at+sub-picomolar+concentrations+by+magnetic+modulation%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Detection of fluorescent-labeled probes at sub-picomolar concentrations by magnetic modulation.</a> Optics Express. 16, 19253-19259 (2008).</li>
<li>Danielli, A., Porat, N., Arie, A., Ehrlich, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+homogenous+detection+of+the+Ibaraki+virus+NS3+cDNA+at+pico-molar+concentrations+by+magnetic+modulation%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+and+Bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Rapid homogenous detection of the Ibaraki virus NS3 cDNA at pico-molar concentrations by magnetic modulation.</a> Biosensors and Bioelectronics. 25, 858-863 (2009).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Bio-Rad+%22Human+angiogenesis+assay+panel%22%22">Bio-Rad "Human angiogenesis assay panel"</a>. , Bio-Plex Pro. Forthcoming.</li>
<li>Instruction Manual. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Bio-Plex+Precision+Pro+Cytokine+Assay%22">Bio-Plex Precision Pro Cytokine Assay</a>. , Bio-Rad Laboratories. Hercules, CA. Forthcoming.</li>
</ol>

In sintesi, abbiamo dimostrato che il sistema MMB può essere utilizzato per rilevare la presenza di IL-8 bersaglio a basse concentrazioni (0,5 pico grammi è il limite di rilevabilità del Bio-Plex saggi di citochine Precision Pro [3,4]). La capacità del sistema non si limita a IL-8 e può essere utilizzato per rilevare altre proteine. I vantaggi del sistema MMB sono la capacità di individuare il target rapidamente e senza alcuna separazione o fase di lavaggio. Così, facilita il processo di rilevamento e consente al sistem...

<table><tbody><tr><td>Set Bio-Plex Pro Citochina Umana IL-8</td><td>Bio-Rad</td><td>171-B5008M</td><td></td></tr><tr><td>Target ricombinante umano IL-8</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>R202625</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo monoclonale biotinilato da topo anti IL-8 umano G265-8</td><td>BD Biosciences</td><td>554718</td><td></td></tr><tr><td>Proteina fluorescente coniugata con streptavidina</td><td>Bio-Rad</td><td>Streptavidin PE</td><td></td></tr></tbody></table>

rapida rilevazione omogenea dei saggi biologici utilizzando magnetic biopercezione sistema di modulazione

Rapid Homogeneous Detection of Biological Assays Using Magnetic Modulation Biosensing System

Un sistema di modulazione magnetica sensori biologici (MMB) [1,2] rapidamente e omogeneamente rilevato bersagli biologici a basse concentrazioni, senza lavaggio o fase di separazione. Quando l&#39;IL-8 bersaglio era presente, un &#39;sandwich&#39; saggio basato su sfere magnetiche attaccato con IL-8 anticorpo di cattura per streptavidina accoppiato proteina fluorescente attraverso l&#39;IL-8 e un obiettivo biotinilato IL-8 anticorpi. Le sfere magnetiche sono manovrati in movimento oscillatorio applicando un gradiente di campo magnetico alternato attraverso due poli elettromagnetici. Le proteine ​​fluorescenti, che sono attaccati ai talloni magnetici sono condensate nella zona di rilevamento e il loro movimento dentro e fuori di un raggio laser ortogonali produce un segnale periodico fluorescente che viene demodulato utilizzando il rilevamento sincrono. Il sistema di sensori biologici di modulazione magnetica è stato precedentemente utilizzato per rilevare le sequenze codificanti della proteina non strutturale del virus Ibaraki 3 (NS3) DNA complementare (cDNA) [2]. Le tecniche che si dimostrano in questo lavoro per la manipolazione esterna e la condensazione delle particelle possono essere utilizzate per altre applicazioni, ad esempio la consegna di farmaci magneticamente accoppiati<em&gt; In-vivo</em&gt; O migliorare il contrasto<em&gt; In-vivo</em&gt; Applicazioni di imaging.

Magnetico modulazione del sistema sensori biologici è utilizzata in modo rapido, con sensibilità e semplicemente rilevare saggi biologici, come le molecole di DNA e proteine.

Rapida rilevazione omogenea dei saggi biologici Utilizzando Magnetic biopercezione sistema di modulazione

Un sistema di biosensing a modulazione magnetica (MMB) [1,2] ha rilevato in modo rapido e omogeneo target biologici a basse concentrazioni senza alcun lavaggio o ...

La BIOSENSORIZZAZIONE con modulazione magnetica o MMB è una tecnica innovativa per il rilevamento di molecole biologiche. Qui viene mostrato un saggio dimostrativo in cui l'interleuchina otto viene rilevata quando l'interleuchina otto, chiamata anche IL otto, viene aggiunta a una miscela di reazione contenente microsferette magnetiche rivestite con anticorpi e anticorpo anti-IL otto marcati con streptavidina fluorescente. Viene così creato un sandwich molecolare che collega efficacemente la molecola fluorescente alla microsfera magnetica.La reazione viene posta in un vete e in un campo magnetico alternato. I gradienti sono applicati attraverso due poli elettromagnetici, che muovono le perle in un moto oscillatorio. Il movimento periodico della perla, a cui sono legate proteine fluorescenti, all'interno e all'esterno di un fascio laser ortogonale produce un segnale fluorescente che viene raccolto da un PMT e demodulato.Utilizzando un amplificatore a blocco, il movimento delle perline può essere visualizzato mediante una telecamera CCD al posto del movimento sincrono del PMT, osservato in campioni in cui le perline magnetiche sono state legate a proteine fluorescenti tramite IL eight

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Descriviamo un metodo di analisi sensore elettrochimico per la rilevazione rapida di batteri e di identificazione. Il saggio comporta una serie di sensori funzionalizzato con DNA oligonucleotide sonde di cattura per RNA ribosomiale (rRNA) sequenze specie-specifici. Sandwich ibridazione del target rRNA con la sonda di cattura e di una perossidasi-coniugati DNA sonda rivelatore oligonucleotide rafano produce una corrente amperometrico misurabile.

Rilevamento e identificazione batterica Utilizzando Sensori elettrochimici

Questo video mostra un sistema microfluidico per un test immunologico basato su nanoparticelle magnetiche. Il sistema di rilevamento utilizza un dispositivo microfluidico che incorpora una trappola magnetica all'interno dei suoi canali. Immunocomplessi preformati, costituiti da nanoparticelle magnetiche rivestite di antigene legate ad anticorpi primari e secondari coniugati con perossidasi, vengono introdotti nei canali. Gli immunocomplessi vengono catturati nella trappola magnetica porosa dopo...

Un test immunologico basato su nanoparticelle magnetiche utilizzando un dispositivo microfluidico

Questo video mostra la rilevazione quantitativa multiplex di batteri utilizzando microsfere di polistirene magnetico carbossilato colorate in set distinti. La procedura comprende la formazione di complessi perline-batteri, la separazione magnetica e l'analisi basata sul flusso, consentendo una quantificazione precisa e simultanea di più batteri nello stesso pozzetto di reazione.

Rilevazione quantitativa multiplexata di batteri mediante microsfere magnetiche marcate con colorante

Uno scanner per l'imaging particelle magnetiche nei campioni planari è stato sviluppato utilizzando la frequenza planare miscelazione tecnica di rilevamento magnetico. La risposta del prodotto di intermodulazione magnetico dal magnetizzazione nonhysteretic non lineare delle particelle viene registrato su una eccitazione a due frequenze. Può essere usato per prendere immagini 2D di campioni biologici sottili.

Frequenza di miscelazione Scanner rilevamento magnetico per l&#39;imaging particelle magnetiche in Planar Campioni

Presentiamo una tecnica di levitazione magnetica accoppiata con imaging e analisi automatizzate sia in un dispositivo compatibile con smartphone che in un dispositivo con imaging ed elaborazione incorporati. Questo viene applicato per misurare la distribuzione della densità delle cellule con due applicazioni biomediche dimostrate: la diagnosi dell'anemia falciforme e la separazione dei globuli bianchi e rossi.

Levitazione magnetica Accoppiato con Imaging portatile e analisi per la malattia di diagnostica

Questo protocollo descrive la realizzazione di una cassetta piccola, ready-to-use che possa essere applicata per rilevamento visivo degli acidi nucleici multipli in un singolo, test che è facile da usare. In questo approccio, una matrice capillare è stata utilizzata per il rilevamento di multiplex e altamente efficiente di bersagli di OGM.

Riconoscimento visivo delle più acidi nucleici in una matrice capillare

Qui, presentiamo un protocollo per la rilevazione e la quantificazione delle molecole abbondanti bassi in soluzioni complesse utilizzando molecolare imprinting in combinazione con un biosensore di capacitanza.

Ultrasensibile rilevazione di biomarcatori utilizzando un Imprinting molecolare basato biosensore capacitivo

Microfluidico digitale basato sull'elettrowetting è una tecnica che utilizza un cambiamento basato sulla tensione nell'angolo di contatto apparente di una goccia di microlitro-volume per facilitarne la manipolazione. La combinazione di questo con perline magnetiche funzionalizzate consente l'integrazione di più operazioni di unità di laboratorio per la preparazione del campione e l'identificazione di agenti patogeni utilizzando Immunosorbent Assay (ELISA) legato all'enzima.

Piattaforma di microfluidica digitale basata su Electrowetting per l'analisi automatizzata di Immunosorbent legata all'enzima

Questo documento descrive un metodo basato sulla levitazione magnetica in grado di rilevare specificamente la presenza di antigeni, solubili o legati alla membrana, quantificando i cambiamenti nell'altezza di levitazione delle perle di cattura con densità fisse.

Quantificazione delle densità cellulari e delle proprietà antigeniche mediante levitazione magnetica

La microfluidica è un potente strumento per lo sviluppo di test diagnostici. Tuttavia, sono spesso necessarie attrezzature e materiali costosi, nonché laboriose tecniche di fabbricazione e manipolazione. Qui, descriviamo in dettaglio il protocollo di fabbricazione di un dispositivo microfluidico acrilico per saggi immunologici magnetici basati su micro e nanoparticelle in un ambiente a basso costo e semplice da usare.

Microfresatura a controllo numerico computerizzato di un dispositivo acrilico microfluidico con restrizione sfalsata per saggi immunologici magnetici basati su nanoparticelle

Scopri un metodo di rilevazione omogenea e rapida di molecole biologiche con il sistema MMB, utilizzando microsfere magnetiche e marcatura fluorescente per rilevare IL-8 senza passaggi di lavaggio.

Rapida rilevazione omogenea dei saggi biologici Utilizzando Magnetic biopercezione sistema di modulazione

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