Name: Sezionamento sottile fetta di preparativi per immunoistochimica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Impara la sezione criostatica riproducibile di campioni tissutali piccoli e difficili come biopsie e fette cerebrali. Questo metodo utilizza un congelatore in alluminio per facilitare la manipolazione e garantisce sezioni seriali di alta qualità.

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<ol><li> Preparare stampo da nastro per la piattaforma ottobre </li><li> Riempire stampo con ottobre Blocco entro criostato o utilizzando schiacciato ghiaccio secco. </li><li> Rimuovere il nastro di tutto congelato piattaforma ottobre </li><li> Allineare segni sul mandrino congelamento e criostato fase di montaggio e serratura a mandrino. </li><li> Sezione attraverso la piattaforma di ottobre fino a superficie piana. </li><li> Rimuovere riemersi piattaforma ottobre e il luogo sul palco congelamento criostato. </li><li> Luogo campione di tessuto (precedentemente crioconservati con il 30% glicerolo o saccarosio in PBS) a ottobre </li><li> Preparare colonna congelamento con anello esterno proiettando circa 5 mm sopra la parte superiore della colonna formando bene per ottobre </li><li> Posizionare accuratamente campione di tessuto nella parte centrale della superficie colonna congelamento e aggiungere lentamente fino a ottobre e si riempie. </li><li> Surround colonna congelamento schiacciato con ghiaccio secco. Tessuti e ottobre dovrebbero completamente blocco entro 20-60 secondi. </li><li> Con l&#39;aumentare della preparazione della temperatura, l&#39;anello esterno può essere rimosso mentre il campione rimane congelato. </li><li> Diapositiva campione fuori lateralmente colonna congelamento e il luogo in criostato. </li><li> Goccia luogo di ottobre sulla superficie della piattaforma di ottobre e il campione di posizione (il tessuto verso il basso) applicando una pressione decisa. Campione rapidamente congelare sulla piattaforma ottobre </li><li> Mandrino sicuro sul criostato di montaggio palco con segni allineati. </li><li> Sezione di ottobre superficiale al campione di tessuto. </li><li> Scongelare il montaggio su sezioni sottili lastre di vetro e conservare congelati oa temperatura ambiente. </li><li> Immunoreazioni può essere eseguita per tessuto montate su lastre di vetro. </li><li> Il reagente è in pool sul vetrino, possono essere leggermente agitato, e possono essere coperti se sensibile alla luce. </li><li> Le successive fasi della reazione sono facilmente eseguiti da scivolare invertendo nella presa dei rifiuti, che l&#39;assorbimento della diapositiva e quindi applicando il reagente successivo. </li></ol>

<ol><li>Scoutern, C. W., O'Connor, R., Cunningham, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+fixation+of+research+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Today%22%5BJournal%5D)">Perfusion fixation of research animals.</a> Microsc. Today. 14, 26-33 (2006).</li>
<li>Cunningham, M. G., Connor, C. M., Zhang, K., Benes, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diminished+serotonergic+innervation+of+adult+medial+prefrontal+cortex+after+6-OHDA+lesions+in+the+newborn+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Dev.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Diminished serotonergic innervation of adult medial prefrontal cortex after 6-OHDA lesions in the newborn rat.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 157, 124-131 (2005).</li>
</ol>

Il protocollo qui presentato fornisce ai ricercatori un conciso, facile da seguire di ingombro di come ottenere criostato sezioni sottili di piccole dimensioni, difficili da gestire, pezzi di tessuto, come ad esempio biopsie e fette di cervello per ulteriori studi da eseguire, come ad esempio vari metodi di colorazione, di ibridazione in situ, o immunoistochimica.

<table><tbody><tr><td>O. C. T.</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27050</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di glicerolo</td><td></td><td></td><td>30% Soluzione di glicerolo in PBS w/v</td></tr><tr><td>Soluzione di saccarosio</td><td></td><td></td><td>30% Soluzione di saccarosio in PBS w/v</td></tr></tbody></table>

sezionamento sottile fetta di preparativi per immunoistochimica

Thin Sectioning of Slice Preparations for Immunohistochemistry

Molte indagini nel campo delle neuroscienze, così come altre discipline, coinvolgono lo studio piccolo, ma pezzi macroscopici o sezioni di tessuto che sono stati conservati, appena rimossa, o espunto ma mantenuto vitale, come in preparazioni fetta del tessuto cerebrale. Successivi studi microscopici di questo materiale può essere impegnativo, come i campioni di tessuto può essere difficile da gestire. Dimostrato qui è un metodo per ottenere sezioni congelate di tessuto sottile con uno spessore che può variare 0,2-5,0 mm. Siamo regolarmente tagliato 400 micron di spessore fette di cervello Vibratome serialmente in 5-10 sezioni congelate micron coronale. Le fette sono tipicamente utilizzato per un primo esperimento di elettrofisiologia e quindi richiedere l&#39;analisi microscopica dei citoarchitettura della regione da cui sono state osservate le registrazioni. Abbiamo costruito un semplice dispositivo che permette la preparazione controllato e riproducibile e il posizionamento della fetta del tessuto. Questo dispositivo è costituito da un cilindro di 5 cm di lunghezza con un diametro di 1,2 cm, che funge da palcoscenico congelamento della porzione. Un anello scivola perfettamente sulle pareti del cilindro che fornisce in tutto il fetta permettendo al tessuto di essere immersi in mescola congelamento (ad esempio, OCT). Questa è poi rapidamente congelato con ghiaccio tritato secco e il wafer risultante può essere posizione facilmente per sezionamento criostato. Sezioni sottili possono essere disgelo-montate su vetrini rivestiti per permettere ulteriori studi per essere eseguito, come vari metodi di colorazione, di ibridazione in situ, o immunoistochimica, come illustrato di seguito.

Il metodo attuale consente criostato riproducibile sezionamento di piccole dimensioni, difficili da gestire, pezzi di tessuto, come ad esempio biopsie e fette di cervello. Utilizziamo una semplice fase di congelamento in alluminio da facilitare la manipolazione di tessuti e un criostato standard per produrre regolarmente sezioni 5-10 micron di serie da 400 sezioni di cervello micron di spessore.

Sezionamento sottile fetta di preparativi per immunoistochimica

Numerose indagini nelle neuroscienze, così come in altre discipline, comportano lo studio di piccoli frammenti o sezioni di tessuto, pur macroscopici, che sono stati...

Ciao, mi chiamo Jun Park, sono ricercatore presso la Harvard Medical School e allo stesso tempo studente di medicina presso la Y University College of Medicine, Severance Hospital, EO Corea. Questi sono i materiali per la sezione sottile di preparati a fette. Sto preparando uno stampo con nastro adesivo, quattro piastre OCT.Sto modellando con OCT e congelando all'interno del criostato oppure, utilizzando occhi secchi tritati, sto rimuovendo il TAFE dalla zona intorno alla piattaforma congelata di OCT. Sto mostrando i segni di allineamento sul gesso di congelamento e sul piano di montaggio del criostato, e fisso il gesso. Sto effettuando sezioni attraverso la piattaforma di OCT.La superficie dell'Ontario è piatta. Sto rimuovendo la piattaforma OCT riportata in superficie e la sto posizionando sullo stadio di congelamento del criostato. Sto inserendo questo campione in OCT e questo campione è stato precedentemente crioconservato con glicerolo al 30% o saccarosio in PBS.Questo è il passaggio per preparare la colonna di congelamento con l'anello esterno che sporge di circa cinque millimetri sopra la parte superiore della colonna in formazione. Formare una depressione per OCTI posiziona

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Questo protocollo di livello introduttivo descrive i reagenti, le attrezzature e le tecniche necessarie per completare la colorazione immunoistochimica del cervello dei roditori, utilizzando come esempio marcatori per microglia ed elementi neuronali.

Primer per immunoistochimica su Cryosectioned Rat tessuto cerebrale: Esempio colorazione per Microglia e neuroni

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Immunofluorescenza indiretta su sezioni congelate di mouse ghiandola mammaria

Molti tipi di tumori cerebrali umani sono localizzati in regioni specifiche all'interno del cervello e sono difficili da coltivare in coltura. Questo protocollo affronta il ruolo del microambiente tumorale e studia nuovi trattamenti farmacologici analizzando le cellule tumorali cerebrali primarie fluorescenti che crescono in una fetta di cervello di topo organotipico.

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Qui, forniamo un semplice, a basso costo, e in tempi rapidi protocollo fissiamo chimicamente tessuto cerebrale dei primati con acroleina fissativo, consentendo per la conservazione a lungo termine che è compatibile con pre-embedding immunoistochimica per microscopia elettronica a trasmissione.

Preparazione del tessuto cerebrale Primate non umano per la pre-embedding immunoistochimica e microscopia elettronica

Qui, presentiamo un protocollo per migliorare la paraffina sezionamento. Questo metodo combina taglio e mobile utilizzando una semplice camera termostatica per evitare il processo di trasferimento richiesto secondo il metodo convenzionale. Di conseguenza, l'efficienza e il numero di sezioni della paraffina intatti furono notevolmente migliorate.

Il taglio e il metodo di galleggiamento per tessuto paraffina-incastonato per il sezionamento

Forniamo un metodo per la generazione, la coltivazione e l'analisi sistematica delle fette organotipiche derivate da tumori del polmone murino. Inoltre descriviamo come ottimizzare per spessore della fetta e come selezionare le concentrazioni di farmaco per il trattamento di fette di tumore.

Valutazioni e analisi di tumore fetta espianti come prerequisito per la prova diagnostica

Viene presentato un protocollo per preparare colture di fette galleggianti libere dal cervello umano adulto. Il protocollo è una variazione del metodo di coltura della fetta ampiamente utilizzato utilizzando inserti di membrana. È semplice, conveniente e consigliato per l'esecuzione di saggi a breve termine volti a svelare meccanismi di neurodegenerazione dietro le malattie cerebrali associate all'età.

A breve termine, le colture di fette libere dal cervello umano adulto

La tecnica free-floating consente ai ricercatori di eseguire colorazioni istologiche, compresa l'immunoistochimica su sezioni di tessuto fisse per visualizzare le strutture biologiche, il tipo di cellula e l'espressione e la localizzazione delle proteine. Questa è una tecnica istochimica efficiente e affidabile che può essere utile per studiare una moltitudine di tessuti, come cervello, cuore e fegato.

Colorazioni istologiche con sezioni di tessuto fluttuanti

Questo protocollo descrive un metodo affidabile per ottenere criosezioni di alta qualità di occhi interi di coniglio. Descrive in dettaglio le procedure di dissezione, fissazione, inclusione e sezionamento dell'occhio di coniglio, che possono essere facilmente adattate per l'uso in qualsiasi studio che utilizza l'immunoistochimica negli occhi più grandi.

Ottenere criosezioni di alta qualità dell'intero occhio di coniglio 

Impara la sezione criostatica riproducibile di campioni tissutali piccoli e difficili come biopsie e fette cerebrali. Questo metodo utilizza un congelatore in alluminio per facilitare la manipolazione e garantisce sezioni seriali di alta qualità.

Sezionamento sottile fetta di preparativi per immunoistochimica

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