Name: Isolamento di cellule umane ombelicale muscolatura liscia arteriosa (HUASMC) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-03T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 6 s
Description: Impara l'isolamento di cellule muscolari lisce arteriose da cordone ombelicale umano mediante trattamento enzimatico con collagenasi. Questo metodo garantisce elevata vitalità cellulare per studi di biologia cellulare e ingegneria tissutale.

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Ospedale Amato Lusitano, Castelo Branco in Portogallo. Ospedale Sousa Martins, Guarda il Portogallo.

<ol><li> Arterie sono ottenuti da pezzi di UC di 3-7 cm. </li><li> Gelatina di Wharton che circonda le arterie è stato accuratamente rimosso tagliandolo con le forbici. </li><li> Un brusco-end ago di un diametro esterno di 0.6-1mm è stato inserito 7 mm circa da una estremità delle arterie sezionato. </li><li> Per rimuovere il sangue residuo all&#39;interno dei vasi, le arterie sono tenute in verticale e perfusi con, circa 20 a 40 ml, soluzione fisiologica (PSS), utilizzando una siringa da 20 ml collegata ad un ago. Se necessario, questa fase di lavaggio è stato ripetuto per diverse volte. </li><li> La stessa procedura è stata ripetuta con RPMI 1640 supplementato con 10% di siero fetale bovino (FBS). </li><li> Una estremità del vaso sanguigno è stato chiuso. Una siringa da 10 ml è stato collegato all&#39;ago e perfusi con 3 ml di collagenasi tipo I (800 unità / ml in soluzione salina tampone di Hank (HBSS)). Poi l&#39;altra extremityof la nave è stata anche chiusa. </li><li> La nave è stata incubata con una soluzione salina tampone fosfato (PBS), per 15 minuti a 37 ° C con agitazione. </li><li> Dopo la fine della nave sono stati tagliati per raccogliere le SMC libero. Le arterie erano profumato con circa 20 a 40 ml di DMEM-F12 integrato con il 5% di FBS e antibiotico ad un tubo da 50 ml. </li><li> Il tubo è stato centrifugato a temperatura ambiente (250 g, 8 min) e pellet cellulare è stato risospeso in 5 ml di DMEM-F12 integrato con il 5% di FBS. </li><li> La sospensione cellulare è stato trasferito in un collagene rivestito T-pallone e incubate a 37 ° C, con un 5% di CO 2 nell&#39;atmosfera umidificata. </li><li> Dopo 5 16 h, la non-aderenti cellule e drebis cellulari sono stati rimossi, 5 ml di terreno di coltura è stata aggiunta e le cellule sono state incubate a 37 ° C, con un 5% di CO 2 nell&#39;atmosfera umidificata. </li><li> I mezzi di coltura cellulare era cambiato ogni 2 3 giorni, fino a raggiungere SMC confluenza. </li><li> Dopo aver raggiunto confluenza le cellule sono state seminate in due o tre 25 cm 2 T-fiaschi. </li></ol> Pulizia <ol><li> Smaltire gli aghi in un contenitore taglienti. </li><li> Smaltire le siringhe in grandi contenitori a rischio biologico. </li><li> Mettere tutto il tessuto in una piccola borsa a rischio biologico. Chiudere il sacchetto e congelare a -20 ° C fino a quando l&#39;incenerimento. </li><li> Immergere tutti gli strumenti in virucida per almeno 10 min. </li><li> Ritorna supporti non utilizzati per frigorifero. </li><li> Smaltire i guanti in rifiuti biologici. </li></ol>

<ol><li>Van Rijen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gap+junctions+in+human+umbilical+cord+endothelial+cells+contain+multiple+connexins%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+journal+of+physiology%22%5BJournal%5D)">Gap junctions in human umbilical cord endothelial cells contain multiple connexins.</a> The American journal of physiology. 272 (1 PT 1), C117-C117 (1997).</li>
<li>Martín de Llano, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedure+to+consistently+obtain+endothelial+and+smooth+muscle+cell+cultures+from+umbilical+cord+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Procedure to consistently obtain endothelial and smooth muscle cell cultures from umbilical cord vessels.</a> Translational Research. 149 (1), 1-9 (2007).</li>
<li>Jaffe, E. A., Nachman, R. L., Becker, C. G., Minick, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+human+endothelial+cells+derived+from+umbilical+veins.+Identification+by+morphologic+and+immunologic+criteria%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Culture of human endothelial cells derived from umbilical veins. Identification by morphologic and immunologic criteria.</a> J Clin Invest. 52 (11), 2745-2756 (1973).</li>
<li>Cairrão, E., Santos-Silva, A., Alvarez, E., Correia, I., Verde, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+human+umbilical+artery+smooth+muscle+cells+expressing+functional+calcium+channels%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Developmental+Biology-Animal%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of human umbilical artery smooth muscle cells expressing functional calcium channels.</a> In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal. 45 (3), 175-184 (2009).</li>
</ol>

Le SMC possono essere utilizzati come modelli per i test futuri con farmaci constrictor, di isolare e caratterizzare strutturalmente di tipo L canali del calcio, per studiare gli aspetti cellulari e molecolari della funzione vascolare e di utilizzarli in ingegneria dei tessuti. SMC e EC sono fondamentali per lo sviluppo di nuovi biomateriali che possono essere utilizzati per la produzione di semi vasi sanguigni sintetici da utilizzare negli esseri umani.

<table><tbody><tr><td>DMEM-F12</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>095K8311</td><td></td></tr><tr><td>Serum bovino fetale (FBS)</td><td>Biochrom AG</td><td>0117T</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>3103806</td><td></td></tr><tr><td>Collagene</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>067K2302</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotico</td><td></td><td></td><td>10 &amp;#x03BC;L/ 1 mL di mezzo</td></tr><tr><td>Forbici</td><td></td><td></td><td>Sterilizzate</td></tr><tr><td>Ago</td><td></td><td></td><td>Diametro di 0,6-1 mm</td></tr><tr><td>Siringa</td><td></td><td></td><td>10 - 20 mL</td></tr><tr><td>Soluzione fisiologica salina (PSS)</td><td></td><td></td><td>20-40 mL per arteria</td></tr><tr><td>Collagenasi tipo I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>047K1052</td><td>3 mL per arteria</td></tr><tr><td>Soluzione salina tampone di Hank&amp;rsquo;s (HBSS)</td><td></td><td></td><td>Collagenasi diluita</td></tr><tr><td>Soluzione salina tampone al fosfato (PBS)</td><td></td><td></td><td>Scaldata a 37&amp;#x00B0;C</td></tr></tbody></table>

isolamento di cellule umane ombelicale muscolatura liscia arteriosa (huasmc)

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells (HUASMC)

Il cordone ombelicale umano (UC) è un campione biologico che può essere facilmente ottenuto solo dopo la nascita. Questo campione biologico è, il più delle volte, scartati e la loro raccolta non comporta alcun rischio aggiuntivo per la salute neonato o la madre s. Inoltre non sono preoccupazioni etiche sollevate. L&#39;UC è composto da una vena e due arterie da cui entrambe le cellule endoteliali (EC)<sup&gt; 1</supCellule muscolari&gt; e liscia (SMC)<sup&gt; 2</sup&gt;, Due dei principali componenti cellulari dei vasi sanguigni, può essere isolato. In questo progetto la SMC sono stati ottenuti dopo il trattamento enzimatico delle arterie UC di conseguenza la procedura sperimentale descritta da Jaffe<em&gt; Et al</em<sup&gt; 3</sup&gt;. Dopo l&#39;isolamento delle cellule sono stati tenuti in t-flash con DMEM-F12 integrato con il 5% di siero fetale bovino e sono state coltivate per diversi passaggi. Cellule mantenuto le loro caratteristiche morfologiche e fenotipiche altri nelle generazioni diverse. Lo scopo di questo studio è stato quello di isolare le cellule muscolari lisce al fine di utilizzarli come modelli per le analisi future con farmaci constrictor, isolare e caratterizzare strutturalmente di tipo L canali del calcio, per studiare gli aspetti cellulari e molecolari della funzione vascolare<sup&gt; 4</sup&gt; E di utilizzarli in ingegneria dei tessuti.

Il cordone ombelicale sono utilizzate per isolare le cellule muscolari lisce per vie diverse. In questo lavoro abbiamo usato il trattamento enzimatico per isolato cellule muscolari lisce.

Isolamento di cellule umane ombelicale muscolatura liscia arteriosa (HUASMC)

Il cordone ombelicale umano (UC) è un campione biologico che può essere facilmente ottenuto subito dopo la nascita. Questo campione biologico, nella maggior parte dei casi, viene scartato...

Per isolare le cellule muscolari lisce arteriose umane del cordone ombelicale, ho utilizzato le seguenti soluzioni: PSS (soluzione salina fisiologica), FBS (siero bovino fetale) inattivato, AB (antibiotico e antimicotico), PBS (soluzione salina tampone al fosfato), DMEM/F12, collagenasi e HBSS (soluzione salina equilibrata di Hank) per sciogliere la collagenasi di tipo I.In termini di manipolazione dei campioni, tutto il processo viene eseguito all'interno di una cabina a flusso laminare. La cartilagine amicale viene tagliata in piccoli pezzi compresi tra tre e sette centimetri. Successivamente, i pezzi vengono posti in un contenitore più grande con antibiotico PSS, antimicotico e antiproteasi per evitare deterioramento o perdita della vitalità cellulare.L'isolamento viene effettuato alla temperatura di quattro gradi Celsius. Il ricercatore sta ora indicando la vena e le arterie presenti nel cordone ombelicale. La gelatina di Wharton che circonda le arterie viene accuratamente rimossa mediante taglio.Utilizziamo le forbici per rimuovere il doppio dello strato interno residuo all'interno dei vasi. Le arterie vengono mantenute in posizione verticale e perfuse con PSS utilizzando una

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Biologia

Questo protocollo video illustra l'isolamento e la coltura di cellule umane endoteliali della vena ombelicale (HUVEC) da cordone ombelicale umano. Una volta isolato queste cellule possono essere utilizzati per test in vitro angiogenesi come il saggio Ottimizzato fibrina Gel Bead dimostrata anche dal laboratorio di Hughes.

Isolamento di cellule umane endoteliali della vena ombelicale (HUVEC)

Abbiamo sviluppato una nuova tecnica e riproducibile per isolare colture primarie di cellule muscolari lisce delle arterie polmonari (PASMC) da topi giovani come P7, consentendo in tal modo una migliore studio delle vie di segnalazione coinvolte nella contrazione delle cellule muscolari lisce neonatale e relax.

Isolamento di polmonare cellule muscolari lisce di topi neonati

I vasi sanguigni all'interno del porto muscolo scheletrico diverse popolazioni precursori multi-lignaggio umane che sono ideali per applicazioni rigenerative. Questo metodo di isolamento permette la purificazione simultanea di tre popolazioni di cellule precursori multipotenti rispettivamente da tre strati strutturali dei vasi sanguigni: cellule endoteliali da miogenici intima, periciti dai media, e le cellule avventiziali da avventizia.

Isolamento dei vasi sanguigni derivati ​​da Multipotent precursori del muscolo scheletrico umano

Lo scopo di questo protocollo è quello di dimostrare l'isolamento e coltura tecniche di cellule muscolari murine primarie lisce vascolari (VSMC) dalla circolazione coronarica. Una volta VSMC sono stati isolati, essi possono essere utilizzati per vari tecniche di coltura standard.

L&#39;isolamento di Murine coronarica vascolari cellule muscolari lisce

Le cellule staminali e progenitrici ematopoietiche (HSPC) derivano da (hemogenic) cellule endoteliali specializzate durante lo sviluppo, ma poco si sa circa il processo attraverso il quale alcune cellule endoteliali specificano a diventare la formazione del sangue. Dimostriamo un metodo basato citometria a flusso che permette l'isolamento simultaneo di cellule endoteliali hemogenic e HSPC da tessuti embrionali murine.

Isolamento di cellule murine embrionali Hemogenic endoteliali

Questo documento descrive un metodo basato su colture di espianto per l'isolamento e la coltura di cellule muscolari lisce aortiche umane primarie e specifiche per il paziente e fibroblasti dermici. Inoltre, viene presentato un nuovo metodo per misurare la contrazione cellulare e la successiva analisi, che può essere utilizzato per studiare le differenze specifiche del paziente in queste cellule.

Isolamento delle cellule muscolari lisce aortiche primarie specifiche del paziente e misurazioni semiquantitative di contrazione in tempo reale in vitro

Il protocollo descrive l'isolamento, la coltura e la profilazione delle cellule endoteliali dall'arteria mesenterica umana. Inoltre, viene fornito un metodo per preparare l'arteria umana per la trascrittomica spaziale. Proteomica, trascrittomica e saggi funzionali possono essere eseguiti su cellule isolate. Questo protocollo può essere riproposto per qualsiasi arteria di medie o grandi dimensioni.

Isolamento e profilazione delle cellule endoteliali arteriose mesenteriche primarie umane a livello di trascrittoma

Questo studio presenta un'esclusiva procedura di dissezione smussata per preservare l'integrità della gelatina di Wharton (WJ), con conseguente WJ meno danneggiata e una maggiore quantità e vitalità delle cellule staminali mesenchimali (MSC) raccolte. Il metodo dimostra una resa e una capacità proliferativa superiori rispetto ai metodi convenzionali di dissezione tagliente.

Isolamento di cellule staminali mesenchimali derivate dal cordone ombelicale con rese elevate e basso danno

L'isolamento delle MSCalteMFGE8 di BAMBI, uno dei tre principali sottogruppi che costituiscono UC-MSC umane eterogenee, è utile per comprendere appieno le caratteristiche e le funzioni di questo sottotipo per la sua futura applicazione per migliorare l'efficacia clinica in malattie specifiche. Qui, presentiamo un metodo per lo smistamento di BAMBIhighMFGE8high UC-MSC.

Isolamento di cellule stromali mesenchimali umane derivate dal cordone ombelicalead altoMFGE8

Dettagli di metodi ad alta risoluzione...

Focale Ca 2 + Rilevamento transitoria nel muscolo liscio

Impara l'isolamento di cellule muscolari lisce arteriose da cordone ombelicale umano mediante trattamento enzimatico con collagenasi. Questo metodo garantisce elevata vitalità cellulare per studi di biologia cellulare e ingegneria tissutale.

Isolamento di cellule umane ombelicale muscolatura liscia arteriosa (HUASMC)

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