Name: Ortotopico Hind-Limb trapianto in topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-12T17:40:00.000+00:00
Duration: 14 min 3 s
Description: Impara il trapianto ortotopico dell'arto posteriore nel ratto per studiare l'allotrapianto di tessuti compositi. Questo modello esamina ischemia, reinfusione e risposte immunologiche per migliorare la sopravvivenza del trapianto.

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Operazione dei donatori e Hind-Limb Harvest <ol><li> Per la procedura operativa un insieme sterile di strumenti di microchirurgia viene utilizzato. Il chirurgo deve indossare abbigliamento adeguato compresi i guanti sterili, che devono essere modificati prima dell&#39;inizio della procedura chirurgica. </li><li> Il ratto è anestetizzato con un&#39;iniezione intraperitoneale di pentobarbital (IP 50mg/kg) e posto in posizione supina su un campo riscaldato operazione, che facilita una stabile la temperatura corporea degli animali durante tutta la procedura chirurgica. </li><li> Prima incisione cutanea l&#39;depositato di funzionamento è sterilizzata tre volte con entrambi, un disinfettante e alcol. Per evitare che le cornee animali si secchi, gli occhi sono lubrificati con una pomata oftalmica (Vidisic) prima dell&#39;intervento. </li><li> Una incisione cutanea è fatta attraverso l&#39;inguine destro circa a livello del legamento inguinale. I vasi femorali sono sezionati libero con cauterizzazione bipolare e dissezione smussa; rami profondi sono legatura con 8-0 seta. </li><li> 300μl (50 UI) di eparina sono iniettati attraverso la vena del pene per l&#39;anti-coagulazione. </li><li> Vasi femorali sono legatura a livello del legamento inguinale e tagliato distalmente alla legatura. </li><li> L&#39;arto posteriore viene lavata con ghiaccio freddo (4 ° C) soluzione HTK (5ml) attraverso l&#39;arteria femorale più di 5 minuti. </li><li> Tutti i gruppi muscolari sono nettamente divise con le forbici e osteotomia viene eseguita con una sega elettrica a rotazione a livello del terzo distale del femore. </li><li> L&#39;arto raccolto viene poi immerso in 20 mL di soluzione ghiacciata HTK per la conservazione e lo stoccaggio a freddo fino a trapianto. </li></ol> Destinatario di funzionamento e Trapianto <ol><li> Il ratto è anestetizzato con un&#39;iniezione intraperitoneale di pentobarbital e posto in posizione supina sul campo operativo. </li><li> Una incisione cutanea è fatta attraverso l&#39;inguine destro circa a livello del legamento inguinale. I vasi femorali sono sezionati libero con cauterizzazione bipolare e una dissezione smussa. </li><li> Vasi femorali sono legatura distale come possibile, ma in prossimità del decollo nave epigastrico. Pinze vascolari sono collocati a livello del legamento inguinale sulla arteria e vena. </li><li> Un bracciale in polietilene è tirato su l&#39;arteria (diametro interno della cuffia: 0,912 millimetri, bracciale-spessore: 0,010 mm, lunghezza bracciale: 2,0 mm) e la vena (diametro interno della cuffia: 1,151 millimetri; gemelli spessore: 0,010 mm, lunghezza bracciale : 2,0 mm). Il bordo del lume del vaso viene poi tirato con un vaso dilatatore e l&#39;arteria femorale e la vena sono estroflesso su tutto il corpo della cuffia (circa 2 mm) e fissato con una legatura circonferenziale 8-0 seta. </li><li> Per fare spazio per l&#39;arto donatore l&#39;arto destinatario viene rimosso con dissezione acuto di gruppi muscolari e osteotomia viene eseguita a metà del femore. </li><li> L&#39;arto donatore viene rimosso dalla soluzione HTK e il trapianto inizia con osteosintesi del femore con un ago calibro 18 (lunghezza: 1,5-2,0 cm) come una bacchetta intramidollare. </li><li> Gruppi di muscoli ventrali sono strettamente approssimato con Vicryl 4-0 o Prolene punti staccati. </li><li> Anastomosi vascolari vengono eseguite tirando la vena del donatore e l&#39;arteria oltre la vena destinatari e complessa della cuffia. Un circonferenziale 8-0 legatura in seta è di nuovo in grado di assicurare l&#39;anastomosi. </li><li> Il morsetto venoso viene rilasciato seguita dalla pinza arteriosa, e la riperfusione è visualizzato dal ritorno di colore alla distali degli arti e del piede, così come il flusso pulsatile attraverso l&#39;arteria. </li><li> Restanti gruppi muscolari dorsali sono ri-approssimato con Vicryl 4-0 o Prolene punti staccati. </li><li> La pelle è chiusa con Vicryl 4-0 o prolene punti staccati. </li><li> Il ratto destinatario è collocato su una piastra elettrica e strettamente monitorati fino al recupero. </li><li> Animali destinatario ricevere profilassi antibiotica (Cefazolina, 20 mg / die, IM) e Buprenex (0,1 mg / kg, SC) per tre giorni post-trapianto. </li></ol>

<ol><li>Shapiro, R. I., Cerra, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+reimplantation+and+transplantation+of+a+complex+organ%3A+the+rat+hind+limb%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb.</a> J Surg Res. 24 (6), 501-506 (1978).</li>
<li>Petruzzo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+international+registry+on+hand+and+composite+tissue+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The international registry on hand and composite tissue transplantation.</a> Transplantation. 86 (4), 487-492 (2008).</li>
<li>Schneeberger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+forearm+transplantation%3A+outcome+at+3+years%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">First forearm transplantation: outcome at 3 years.</a> Am J Transplant. 7 (7), 1753-1762 (2007).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Decenni di ricerche sperimentali hanno preceduto e permesso di successo il trapianto di mano umana nel recente passato. Nel 1978, Shapiro et al. sviluppato un modello di trapianto ortotopico posteriori degli arti nei ratti, adatto per studiare vari aspetti patologici, fisiologici e immunologici così come risultato funzionale di innesti di tessuto composito. Abbiamo modificato la parte più impegnativa della procedura, vale a dire l&#39;anastomosi vascolari, con l&#39;introduzione di un non-tecnica di sutura della cuffia....

<table><tbody><tr><td>Nembutal&amp;#174;</td><td>OVATION Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eparina Immuno</td><td>Ebewe Pharma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soluzione Custodiol HTK</td><td>Essential Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forbici per avventizia</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;SAS-21 R-8T</td><td></td></tr><tr><td>Pinze</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;JFC-7</td><td></td></tr><tr><td>Pinze dilatatrici</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;D-5AZ</td><td></td></tr><tr><td>Tubi in polimide</td><td>River Tech Medical</td><td>#17; #19</td><td></td></tr></tbody></table>

ortotopico hind-limb trapianto in topi

Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

Allotrapianto tessuto composito (CTA) rappresenta oggi una valida opzione terapeutica dopo la perdita di un avambraccio mano, o le cifre ed è diventato un&#39;entità romanzo terapeutico nella chirurgia ricostruttiva. Tuttavia, a lungo termine ad alto dosaggio multi-farmaco terapia immunosoppressiva è necessaria per garantire la sopravvivenza del trapianto, con il rischio di gravi effetti collaterali che cavezza una più ampia applicazione. Ulteriore progressione in questo campo può dipendere da una migliore comprensione di base di immunologia e di ischemia riperfusione in innesti di tessuto composito. Ad oggi, il trapianto ortotopico degli arti posteriori nei ratti è stato preferito il modello roditore per ricostruttiva trapianto (RT), tuttavia, è una procedura estremamente esigente che richiede competenze di microchirurgia straordinario per riattacco di vasi, ossa, muscoli e nervi. Abbiamo introdotto la tecnica di anastomosi vascolari bracciale a questo modello, fornendo un approccio rapido e affidabile per ratto trapianto degli arti posteriori. Questa tecnica semplifica e accorcia la procedura chirurgica e consente ai chirurghi con esperienza di microchirurgia di base per svolgere con successo l&#39;operazione con la sopravvivenza alto e basso tasso di complicanze. La tecnica sembra essere adatto per immunologici e ischemia riperfusione (IRI) studi.

Qui si descrive il ratto ortotopico arti posteriori procedura di trapianto, che sembra essere il gold standard<em&gt; In vivo</emModello&gt; per la ricerca dei tessuti compositi allotrapianto.

Ortotopico Hind-Limb trapianto in topi

L'allotrapianto di tessuto composito (CTA) rappresenta oggi un'opzione terapeutica valida in seguito alla perdita di una mano, dell'avambraccio o delle dita ed è diventato un nuovo...

Sono Robert Suha del Laboratorio di Ricerca Daniels Roski del Dipartimento di Chirurgia Addominale, dei Trapianti e Toracica dell'Università Medica di Innsbrook. Oggi vi mostreremo la procedura del trapianto di arto in modelli animali, introducendo una tecnica con manicotto per la rivascolarizzazione. Questo intervento di trapianto di arto viene eseguito dai nostri chirurghi in formazione, tra cui io stesso.Utilizziamo questo modello animale per studiare le lesioni associate all'ischemia e al ripristino della perfusione in un innesto allotrapiantato di tessuto composito. Inoltre, impieghiamo questa procedura per studiare gli eventi immunologici legati al rigetto dell'innesto allotrapiantato di tessuto composito, nonché le strategie per prevenire tale rigetto. Queste strategie includono la riduzione o persino l'evitamento dell'immunosoppressione di mantenimento mediante l'utilizzo di regimi immunomodulanti mirati.La procedura di trapianto dell'arto posteriore rosso inizia con il prelievo del graft di tessuto composito dal donatore, nel quale l'arto posteriore destro viene rimosso dal ratto donatore e conservato sul ghiaccio. Successivamente, l'arto posteriore destro viene asportato dal ratto ricevente per fare spazio all'arto del donatore. L'arto del donatore viene quindi rimosso dal ghiaccio e trapiantato nel ratto ricevente.In questo modello, le anastomosi vascolari vengono eseguite utilizzando una tecnica con manicotto. Per i nostri esperimenti, sono stati utilizzati ratti maschi Louis Reds del peso di 250 grammi. L'anestesia è stata indotta mediante iniezione intraperitoneale di pentobarbital sodico a 50 milligrammi per chilogrammo.La regione inguinale del ratto anestetizzato viene rasata e disinfettata prima della procedura. È necessario disporre di un set completo di strumenti microchirurgici, inclusi pinze microchirurgiche dritte, forbici, dilatatori per vasi e due pinze curve. Inoltre, gli strumenti più importanti sono le pinze microchirurgiche per vasi mostrate qui.Per verificare la profondità dell'anestesia, si utilizza il riflesso alla compressione del dito del piede. Il ratto viene posizionato su una piattaforma sterile e fissato con tutte e quattro le zampe in completa estensione prima dell'incisione. L'arto viene liberato rapidamente da qualsiasi asse qui presente per prevenire contaminazioni.Viene effettuata un'incisione a livello dell'inguine destro, approssimativamente al livello del legamento inguinale. I vasi femorali si presentano immediatamente al di sotto della cute e vengono dissecati con pinze bitermiche e dissecazione ottusa. I vasi epigastrici vengono quindi dissecati e cauterizzati.Un singolo punto a punto d'ancoraggio viene posizionato intorno alla vena e all'arteria per consentire una trazione senza dover manipolare direttamente i vasi con strumenti dopo la dissezione. I rami profondi dell'arteria e della vena vengono legati con sutura di seta 8/0 in sede prossimale e cauterizzati in sede distale prima del prelievo dell'arto donatore. Vengono somministrati 50 unità di eparina attraverso la vena peniena.Dopo un minuto, si torna a concentrarsi sui vasi femorali. L'arteria femorale viene legata il più accuratamente possibile utilizzando filo di seta 8-0 e la stessa procedura viene ripetuta per la vena femorale. Entrambi i vasi vengono quindi recisi in posizione distale rispetto alla legatura e l'arto posteriore viene perfuso attraverso l'arteria con soluzione HDK eparinizzata e fredda con ghiaccio per cinque minuti.Successivamente, tutti i gruppi muscolari vengono accuratamente divisi con le forbici. L'osteotomia viene eseguita utilizzando una sega elettrica rotante al livello del terzo distale del femore. L'arto prelevato viene quindi immerso in 20 millilitri di soluzione HDK fredda per la conservazione e la conservazione a freddo fino al trapianto.L'operazione sul ricevente inizia in modo simile a quella sul donatore, con l'isolamento e la dissezione dei vasi femorali. Dopo una dissezione accurata, i vasi vengono legati utilizzando un filo di seta 8-0 il più distalmente possibile, ma prossimalmente rispetto all'origine dei vasi epigastrici. Procediamo quindi con il montaggio della cuffia sulla vena del ricevente, facendo scivolare la cuffia polilineare sopra il vaso.Una pinza singola viene applicata in posizione prossimale rispetto al manicotto sulla vena e sul manico del manicotto per garantire un'emostasi completa. La ligatura all'estremità distale della vena viene recisa e la vena viene quindi rivoltata sul manicotto. Una ligatura 8-O viene annodata in modo circonferenziale attorno al vaso e al manicotto, fissando saldamente la vena del ricevente in posizione.La stessa identica procedura viene eseguita per l'arteria con il manicotto di diametro più piccolo. L'arto del ricevente viene dissezionato in modo analogo all'arto del donatore, con dissezione secca dei gruppi muscolari e osteotomia eseguita a livello della metà del femore. A questo punto siamo pronti per trapiantare l'arto posteriore.Il lembo donatore viene rimosso dalla soluzione HDK. Il trapianto inizia con l'osteosinapsi del femore utilizzando un ago da 18 gauge come asta intramidollare. La punta viene tagliata e l'ago rimanente viene tagliato in un segmento lungo da uno e mezzo a due centimetri.I gruppi muscolari ventrali vengono avvicinati strettamente con quattro punti separati in Vicryl o prolene per stabilizzare l'arto e prepararsi all'anastomosi vascolare. Per l'anastomosi con manicotto, la vena del donatore viene dilatata, fatta scivolare sopra la vena e il manicotto del ricevente e fissata con un altro punto di legatura circonferenziale otto o. La stessa procedura viene eseguita per l'arteria del donatore.Infine, una volta che entrambi i vasi sono stabili, si rilascia la pinza venosa, seguita dalla pinza arteriosa. La riprofusione è immediata e facilmente visibile attraverso il ritorno del colore nell'arto distale e nel piede, nonché attraverso il flusso pulsatile nell'arteria. I gruppi muscolari dorsali rimanenti vengono quindi riavvicinati.La cute viene chiusa con punti separati in Vicryl o prolene 4-0 e il trapianto è completato. Postoperatoriamente, il topo viene riscaldato su un tappetino riscaldante e gli vengono somministrati analgesici e antibiotici. Il topo viene monitorato attentamente per 48-72 ore alla ricerca di segni di malessere o complicanze chirurgiche.La tecnica con manicotto per l'anastomosi è stata ampiamente utilizzata in diverse aree di ricerca chirurgica negli ultimi decenni, dai modelli di trapianto renale marino ai modelli di trapianto cardiaco eterotopico. Permette di studiare vari aspetti della lesione da ischemia-riperfusione, nonché fenomeni immunologici. Dopo il nostro trapianto.Qui mostriamo la prima applicazione di questa tecnica unica con manicotto nel trapianto di tessuti compositi degli arti. In un modello animale di piccole dimensioni, la tecnica con manicotto riduce in modo significativo il tempo operatorio, l'esperienza microchirurgica richiesta all'operatore e la perdita ematica intraoperatoria rispetto alle tecniche convenzionali con sutura per l'anastomosi.

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Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Vi presentiamo uno facile da stabilire revisione della classica due-bracciale tecnica di trapianto di fegato nel ratto.

Trapianto di fegato in ratti

Descriviamo una nuova tecnica per il trapianto addominale eterotopico cuore-polmone (HAHLT) nei ratti. La configurazione del trapianto si traduce in una circolazione dell'innesto parzialmente caricata, consentendo una valutazione funzionale diretta. Questo modello può essere impiegato per studi acuti o cronici sulla funzione e sullo stato immunologico del trapianto trapiantato.

Rat eterotopico addominale Cuore / Trapianti Single-polmone in una configurazione del volume-caricato

Questo nuovo modello per il trapianto degli arti posteriori ortotopico nel topo, applicando una tecnica bracciale non sutura per anastomosi super-microvascolare, fornisce un potente strumento per la ricerca in vivo meccanicistica immunologica relative al allotrapianto composito vascolarizzato (VCA).

Ortotopico degli arti posteriori del trapianto di mouse

Lo scopo di questo manoscritto e protocollo è quello di spiegare e dimostrare in dettaglio la procedura chirurgica del trapianto di rene ortotopico nei ratti. Questo metodo è semplificato per ottenere la corretta perfusione del rene donatore e abbreviare il tempo di riperfusione utilizzando la tecnica di anastomosi del polsino venoso e ureterale.

Trapianto di rene ortotopico ratto: un nuovo approccio chirurgico semplificato

Questo protocollo presenta un modello robusto e riproducibile di allotransplant composito vascolarizzato (VCA) orientato allo studio simultaneo dell'immunologia e del recupero funzionale. Il tempo investito in una tecnica meticolosa in un trapianto ortotopico dell'arto posteriore della coscia destra con anastomose vascolari cucite a mano e coaptation neurale produce la capacità di studiare il recupero funzionale.

Fare il passo successivo: un modello di trapianto di arto hind di coaptation neurale per massimizzare il recupero funzionale nel ratto

Descriviamo un modello di trapianto di cuore addominale eterotopico nei ratti, implicando modifiche delle strategie attuali, che portano a un approccio chirurgico semplificato. Inoltre, descriviamo un nuovo modello di rigetto mediante iniezione in-ear di cellule muscolari cardiache vitali, consentendo ulteriori analisi immunologiche dei trapianti nei ratti.

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Questo documento presenta un protocollo di trapianto di lembi osteomiocutaneo eterotopico parziale nei ratti e i suoi potenziali risultati nel follow-up a medio termine.

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Il modello di trapianto renale ortotopico di ratto contribuisce a studiare il meccanismo di rigetto dell'allotrapianto renale. Il modello attuale aumenta la sopravvivenza dei riceventi senza interferenze con l'afflusso di sangue e il reflusso venoso della parte inferiore del corpo utilizzando un'anastomosi end-to-end dell'impianto renale e un metodo "tunnel" end-to-side di anastomosi uretere-vescica.

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Il presente articolo descrive una tecnica modificata per il trapianto cardiaco vascolarizzato eterotopico con tecnica asettica, analgesia e anestesia aggiornate.

Un protocollo di trapianto di cuore eterotopico murino modificato che corrisponde agli standard contemporanei di tecnica asettica, anestesia e analgesia

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