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Ricerca sul cancro
0 visualizzazioni • 3:59 min. • April 30th, 2023
- La terapia fotodinamica o PDT è un trattamento basato sulla luce che coinvolge molecole fotosensibilizzanti. Queste molecole sono attivate da luci di lunghezze d'onda specifiche e convertono l'ossigeno molecolare presente nelle cellule in specie reattive dell'ossigeno che inducono la morte cellulare. Per iniziare, sviluppare un modello murino portatore di tumore polmonare iniettando la concentrazione appropriata di sospensione di cellule tumorali polmonari nel fianco inferiore di un topo anestetizzato. Monitorare fino a quando un tumore non raggiunge un volume appropriato.
Successivamente, preparare una sospensione del fotosensibilizzatore desiderato caricato in un sistema di somministrazione basato su nanoparticelle mirato al cancro del polmone. Iniettare questa sospensione nella vena caudale di un topo anestetizzato portatore di tumore. Fornire tempo sufficiente al fotosensibilizzatore contenente nanoparticelle per raggiungere il sito del tumore ed entrare nelle cellule tumorali.
Quindi, anestetizzare il topo. Posizionare un laser PDT a una distanza ottimale sopra il tumore per garantire un'illuminazione uniforme dell'intero volume. Irradiare il tumore a una lunghezza d'onda appropriata per il tempo desiderato. Tenere il mouse all'interno di una gabbia al buio per 24 ore. Monitorare le variazioni quotidiane del volume del tumore. I topi portatori di tumore irradiati iniettati con il fotosensibilizzatore hanno mostrato una diminuzione del volume del tumore. In questo protocollo, analizzeremo l'efficacia antitumorale dell'ipocrellina B, un fotosensibilizzante, incapsulato in nanoparticelle di ceramide di acido ialuronico in topi portatori di tumore A549.
Raccogli le cellule A549 e sospendi nuovamente un milione di cellule in 0,1 millilitri di terreno RPMI 1640. Posizionare le celle ri-sospese sul ghiaccio. Successivamente, preparare un topo nudo maschio BALB/C per l'iniezione. Quindi caricare le cellule in una siringa da 1 millilitro dotata di un ago calibro 26 e iniettarle nel fianco sinistro del topo. Misurare le dimensioni del tumore con i calibri ogni giorno.
Quando la dimensione del tumore raggiunge circa 200 millimetri cubi di volume, iniziare l'esperimento pesando prima ogni topo. Quindi sciogliere le nanoparticelle in PBS a una concentrazione finale di 2 milligrammi per millilitro e caricare un microlitro di sospensione per grammo di topo in una siringa da 1 millilitro dotata di un ago da 26 gauge. Iniettare le nanoparticelle tramite iniezione della vena caudale nei giorni zero e sette.
24 ore dopo ogni iniezione, anestetizzare il topo e posizionare il toro tumorale sotto la fibra della terapia fotodinamica in modo che si trovi a un centimetro dalla fibra.
È importante coprire l'intera superficie tumorale con la luce per ottenere il miglior risultato.
Indossa gli occhiali di sicurezza laser, spegni l'interruttore della stanza e illumina il tumore con un laser per terapia fotodinamica per 500 secondi sia il primo che l'ottavo giorno. Dopo il trattamento laser, mantenere i topi nelle loro gabbie al buio per 24 ore. Monitorare visivamente il volume del tumore e i cambiamenti nel sito del tumore ogni giorno. Usa i calibri per misurare le dimensioni del tumore e scatta foto dei siti tumorali ogni giorno per verificare la presenza di alterazioni superficiali.