Isolamento delle isole pancreatiche attraverso la perfusione di collagenasi: un metodo enzimatico per isolare le cellule delle isole pancreatiche

- Le cellule insulari del pancreas producono ormoni essenziali coinvolti nelle funzioni endocrine. Per isolare le isole, per prima cosa, metti in sicurezza un topo soppresso ed esponi chirurgicamente la sua cavità addominale. Spazzola via il fegato e l'intestino per individuare e bloccare il dotto biliare comune. Identificare l'ampolla di Vater, il dotto formato dall'unione dei dotti biliari pancreatici e comuni.

Successivamente, iniettare una soluzione di enzima collagenasi nel dotto biliare comune. Il riflusso dal dotto gonfia con successo il pancreas, facilitando la dissociazione dei tessuti pancreatici indotta dalla collagenasi. Asciugare il pancreas in un tubo contenente altra soluzione di collagenasi. Tritare meccanicamente il tessuto e incubare per favorire la digestione dei tessuti da parte della collagenasi.

Una volta ottenuta una sospensione omogenea, fermare la digestione enzimatica aggiungendo una soluzione contenente proteine che inibiscono l'attività della collagenasi. Centrifuga per raccogliere un pellet di tessuto. Risospendere il pellet in un mezzo di gradiente di densità appropriato, sovrapporvi sopra un tampone adatto e centrifugare per generare strati di gradien