Saggio di formazione di sfere: un metodo in vitro per identificare le cellule staminali del cancro del pancreas e le terapie di screening

- L'adenocarcinoma duttale pancreatico (PDAC) contiene un sottogruppo di cellule staminali tumorali (CSC) esclusivamente tumorigeniche. Le CSC sono autorinnovabili, pluripotenti e in grado di formare tumori. Esprimono proteine anti-apoptotiche e contengono anche geni multiresistenti, che li rendono resistenti alla chemioterapia. Per identificare le cellule staminali tumorali e studiare l'effetto dei farmaci su di esse, eseguiamo un saggio di formazione di sfere.

Innanzitutto, sospendere le cellule staminali tumorali estratte nel terreno di coltura cellulare desiderato. Quindi, seminare la sospensione cellulare in una piastra a più pozzetti e incubare per la durata desiderata. Aggiungere una quantità richiesta di farmaco di interesse in alcuni pozzetti e placebo in altri pozzetti come controllo negativo. Incubare le cellule per la durata desiderata. Le cellule staminali tumorali formano colonie a forma di sfera in un ambiente di coltura non aderente.

Dopo l'incubazione, pipettare una piccola quantità di sospensione cellulare su un emocitometro e inserirla in un contatore di cellule automatizzato. Ora, conta il numero di sfere formate. Le cellule trattate con il farmaco di solito mos