Metodo della goccia sospesa: una tecnica per generare sferoidi di melanoma 3D

- Gli sferoidi sono modelli tridimensionali in vitro di colture cellulari che imitano l'architettura tumorale in vivo e aiutano a studiare le interazioni intra-tumorali. Per impostare la coltura, in primo luogo, preparare una sospensione unicellulare di cellule di melanoma nel terreno appropriato. Quindi, individuare piccoli volumi di questa sospensione cellulare, sufficientemente distanti sulla superficie interna del coperchio di una piastra di coltura sterile e non adesiva. Capovolgere con cautela il coperchio e posizionarlo sulla base del piatto di coltura contenente PBS per creare una camera di idratazione. Incubare la piastra in condizioni appropriate.

L'umidità del PBS impedisce l'evaporazione dei fluidi dalle gocce pendenti. Rinfrescare le gocce sostituendo alcuni microlitri di supporto. A causa della tensione superficiale, le goccioline mantengono la loro forma sferica e rimangono sospese dalla superficie interna della piastra. Le forze gravitazionali facilitano le cellule a rimanere in sospensione senza diffondersi, ma si aggregano per formare sferoidi tridimensionali all'interno delle goccioline. Infine, sciacquare le goccioline con PBS per raccogliere gli sferoidi. Racco