Isolamento delle cellule staminali del melanoma: un metodo per ottenere cellule di melanoma CD133 positive e negative utilizzando la selezione cellulare attivata magneticamente

- Il melanoma ospita una piccola sottopopolazione di cellule staminali tumorali che possiedono sia capacità di autorinnovamento che di iniziazione del tumore. CD133 o Prominin-1, una glicoproteina transmembrana pentaspan, è uno dei marcatori chiave espressi dalle cellule staminali tumorali del melanoma metastatico. Per isolare le cellule CD133-positive, iniziare con una sospensione di cellule primarie di melanoma in un tampone appropriato.

Incubare con un reagente bloccante contenente proteine che bloccano i siti di legame non specifici sulla superficie cellulare. Trattare le cellule con anticorpi primari CD133 biotinilati. Questi anticorpi si legano agli antigeni CD133 espressi sulle cellule CD133-positive. Ora, aggiungi microsfere magnetiche anti-biotina alla sospensione. Incubare per far sì che le microsfere si leghino alle cellule marcate con biotina.

Infine, far passare la sospensione incubata attraverso una colonna posta in un campo magnetico. Con l'influenza magnetica, tutte le cellule CD133-positive marcate con le microsfere si attaccano alla colonna, mentre le cellule non marcate vi passano attraverso. Raccogli queste cellule CD133-negative non marcate. Rimuovere la colonn