Transgenesi vettoriale miniCoopR: una tecnica per lo screening dei geni che inducono il melanoma nel modello tumorale di zebrafish

- Nel pesce zebra, il melanoma deriva dalla trasformazione maligna dei melanociti, le cellule produttrici di melanina. Per studiare l'insorgenza del melanoma, utilizzare un modello di zebrafish transgenico con deficit di melanociti incline al melanoma. Questo modello manca di melanociti a causa di una mutazione con perdita di funzione nel suo promotore mitfa specifico per i melanociti.

Inizia prendendo un embrione unicellulare di questo modello transgenico su una piastra di agar. Co-iniettare nell'embrione una miscela contenente un vettore miniCoopR basato su trasposoni e trasporre l'mRNA dell'enzima. Il vettore contiene una cassetta genica, comprendente un minigene mitfa portatore di promotori accoppiato a un gene candidato inserito tra due elementi trasposoni.

Gli mRNA co-iniettati codificano per le proteine della trasposasi. Queste proteine agiscono sugli elementi del trasposone e catalizzano l'escissione della cassetta dal vettore miniCoopR, seguita dalla sua integrazione nel DNA genomico dell'embrione. Successivamente, il promotore della cassetta guida l'espressione sia del gene mitfa che del gene candidato di interesse.

Il gene mitfa supporta il salvataggio e lo sviluppo dei