Saggio della dose eritematosa minima: un metodo per misurare la sensibilità ai raggi UV nei modelli murini

- I melanociti producono un pigmento scuro chiamato eumelanina che assorbe le radiazioni UV dannose, proteggendo la pelle. Per misurare la sensibilità ai raggi UV, iniziare prendendo un modello murino anestetizzato. Prepara il topo rimuovendo la sua pelliccia dorsale per esporre lo strato epidermico. Fissare un pezzo di nastro che blocca i raggi UV con un determinato numero di fori sulla pelle esposta. Fissa dei piccoli nastri staccabili su tutti i fori, tranne uno, per mascherare l'apertura.

Ora, sottoponi il mouse ai raggi UV per la durata desiderata. Durante il periodo di esposizione, smascherare i fori rimanenti in sequenza in punti temporali predeterminati. Ciò facilita le chiazze cutanee successivamente esposte a ricevere dosi decrescenti di radiazioni UV. I fori permettono la penetrazione localizzata dei raggi UV nell'epidermide del topo.

Dopo l'esposizione, le cellule epidermiche rilasciano molecole pro-infiammatorie. Queste molecole si diffondono verso il derma e dilatano i vasi sanguigni dermici causando eritema o arrossamento della pelle. Successivamente, i leucociti si infiltrano nel derma e causano edema o gonfiore nella zona esposta.

Al punto finale dell'esperimento, fermare la radiazione e rimuovere il nastro per osservare eritema ed edema. Nel seguente protocollo, misureremo la sensibilità ai raggi UV in un modello murino umanizzato trattato con forskolina - un farmaco produttore di melanina - determinando la dose minima eritematosa.

- Per determinare la dose eritematosa minima, o MED, ogni animale sarà esposto a una varietà di dosi UV. Inizia preparando un pezzo di nastro occlusivo UV, utilizzando una perforatrice per impieghi gravosi con un ritaglio circolare di 1 centimetro quadrato per praticare i fori nel nastro. Su ogni foro del nastro, applica un pezzo di nastro piccolo ma facilmente staccabile che può essere rimosso per l'esposizione ai raggi UV. Posizionare il nastro sulla superficie dorsale del topo anestetizzato.

Se gli occhi dell'animale sono aperti, applicare lacrime artificiali per evitare lesioni dovute all'essiccazione e all'esposizione ai raggi UV. Accendi la sorgente UV composta da due lampade UVB con un'emissione di picco di 313 nanometri e una gamma da 280 a 370 nanometri. Lasciare che la lampada si equilibri a un'emissione UV costante prima di utilizzare un fotometro UV con il sensore UVB per verificare l'uscita.

In base alla velocità di trasmissione UV misurata dal fotometro UV, calcolare il tempo di esposizione ai raggi UV per ciascuna dose desiderata. Ad esempio, l'emissione UVB della lampada misura 2,4 milliwatt per centimetro quadrato. Pertanto, per somministrare 5 kilojoule per metro quadrato, la pelle dovrebbe essere esposta a 208 secondi di radiazioni UVB come calcolato qui.

Quindi, posiziona la superficie ventrale dell'animale sedato verso il basso per garantire un'esposizione uniforme ai raggi UV. Per somministrare la dose di radiazioni scelta, rimuovere in sequenza i piccoli pezzi di nastro adesivo che coprono i fori al momento opportuno.

Ad esempio, se 40 kilojoule per metro quadrato è la dose massima, il topo starebbe sotto la lampada per 27 minuti e 47 secondi e il foro per questa dose sarebbe esposto fin dall'inizio. Tuttavia, per la condizione di 5 kilojoule per metro quadrato, il nastro verrebbe rimosso con 208 secondi di tempo di esposizione rimanenti. Dopo l'esposizione ai raggi UV, rimuovere con cura il nastro adesivo e posizionare gli animali in un luogo caldo e tranquillo per riprendersi dall'anestesia prima di rimetterli nelle loro gabbie.

Il valore della dose eritematosa minima, o MED, corrisponde alla dose minima di UV che provoca infiammazione definita da eritema e/o edema dell'intero cerchio cutaneo esposto. Monitorare il mouse per 24-48 ore per cercare aree discrete di eritema o edema nelle aree esposte ai raggi UV.

A volte, la barba incolta residua confonde l'interpretazione del test MED mascherando l'eritema o l'edema cutaneo sottostante. Bagnare la pelle con il 70% di etanolo rende la pelle molto più interpretabile. Documenta fotograficamente eventuali reperti cutanei e poi riporta i topi alla struttura per animali.