Name: Valutazione di vocalizzazioni ultrasoniche Durante Drug autosomministrazione in topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-22T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: Scopri come valutare le vocalizzazioni ultrasoniche nei ratti durante l'autosomministrazione di farmaci. Questo metodo combina registrazione in tempo reale e analisi spettrale per studiare le risposte emotive alla cocaina.

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Questo lavoro è stato finanziato da sovvenzioni NIH RO1DA014640 e 3R01DA014640-05S1, l&#39;Università del Texas VP Research Office (CLD), NIDA programma di approvvigionamento della droga, e l&#39;Università del Texas Waggoner Centro per l&#39;alcol e le tossicodipendenze di ricerca di Bruce Jones-Graduate Fellowship (EYM) . Ringraziamo Lia McAleer, Mohamed Abdalla, Neha Thakore, Byron Barksdale, Tiffany Nguyen, Tian Tian, ​​Owen Hunter, proy Phongsawad, Helen Reed, Rachel Chavana, Linda Ju e Rosie Maddox per la loro assistenza in USV analisi dei dati.

*= Punti importanti <ol><li> Ben gestiti maschile ratti Sprague-Dawley sono addestrati a premere con leva ricompensa in cibo (45 mg di saccarosio pellet; Bio-Serv, Frenchtown, NJ). </li><li> * Cateteri per via endovenosa sono costruiti in acciaio inossidabile cannula (Plastica One, VA) e tubi Silastic. Ratti sottoposti a una procedura di cateterizzazione giugulare chirurgica per consentire droga auto-somministrazione. Dopo l'intervento chirurgico, pervietà del catetere viene mantenuta quotidianamente con vampate di calore con 0,1 ml di una soluzione salina allo 0,9%, eparina e soluzione Timentin. </li><li> Cocaina (Inventario Drug NIDA e Fornitura e programma di controllo; RTI International, Research Triangle Park, Carolina del Nord) utilizzato in questo esperimento è stato dissolto in soluzione salina isotonica (0,9%) nelle concentrazioni dose appropriata in base al peso degli animali (0,75 mg / kg / iniezione ) in modo che ciascuna iniezione è 0,1 ml. Animali di controllo hanno ricevuto una soluzione salina allo stesso volume / iniezione. </li><li> * L'apparecchio utilizzato per la droga auto-amministrazione è costituito da una singola leva camera operante (28 x 22 x 21 cm) dotato di luci di casa e di stimolo e 3 set di photobeams. La camera operante è ospitato all'interno di una più ampia camera di attenuazione del suono (Med associati, St. Albans, VT) per limitare il rumore esterno e la luce. Durante le sessioni di amministrazione, gli animali erano per via endovenosa collegato tramite tubi a una siringa montata su una pompa a motore (Strumenti Razel scientifico, modello A, St. Albans, VT), contenente una soluzione di cocaina (0,75 mg / kg / iniezione) o soluzione salina sterile . Dopo ogni premere la leva, una luce sopra la leva di stimolo si accende e la cocaina o di soluzione salina viene somministrato nell'arco di 6 secondi il tempo di infusione. Attività locomotoria è valutata come numero di interruzioni PHOTOBEAM. L'auto-somministrazione programma della droga è controllato, e le risposte comportamentali (ad esempio, le risposte leva e attività locomotoria) sono registrati utilizzando un computer dotato di processore Pentium Med Med software per PC (Associati Med). </li><li> * Per rilevare e registrare USV, microfoni ad ultrasuoni, hardware di acquisizione dati, software di registrazione (bioacustica Avisoft, Berlino, Germania) e sistemi di computer PC sono necessari. Per l'esperimento in corso, i microfoni ad ultrasuoni (la risposta di frequenza = 10-100-kHz) sono saldamente montato al centro delle camere operante. I microfoni sono collegati ad hardware di acquisizione dati (Avisoft-Ultrasoundgate) situati al di fuori della camera operante e le registrazioni sono raccolte su un computer PC (Dell Optiplex GX270, Windows XP Professional, Intel (R) Pentium (R) 4 CPU, 2.60 GHz, 1 GB di RAM) con REGISTRATORE multi-canale software di registrazione (bioacustica Avisoft). </li><li> * Ogni farmaco self-administration/USV sessione di registrazione continua come segue: <ol class="lalpha"><li> Gli animali sono gentilmente presi dalla loro gabbia e la loro casa catetere endovenoso viene lavata con 0,05 ml di una soluzione salina eparinata per rilevare malfunzionamenti catetere possibile. </li><li> * I ratti sono collegati ad un girevole montato sulla camera operante che consente l'amministrazione sia di droghe o di un veicolo durante le sessioni di auto-somministrazione. Gli animali sono gentilmente messi in camera di operante e le porte sono chiuse in silenzio. L'auto-somministrazione programma farmaco (Med PC) e il software di registrazione USV (RECORDER) sono disposte su due sistemi separati. Pertanto, al fine di essere in grado di collegare i comportamenti all'interno della camera operante con rilevazione USV, entrambi i programmi devono essere avviati contemporaneamente (ad esempio, potrebbe essere necessario due persone a seconda della posizione del computer). </li><li> * L'USV individuali sono registrati e cronodatati continuamente durante la sessione. Il programma MedPC il controllo e la registrazione degli eventi all'interno della camera operante può essere scritto a qualsiasi specifica. Il programma MedPC chiude automaticamente al termine della sessione. La registrazione USV deve essere fermato manualmente sul sistema informatico di registrazione dedicato USV. </li><li> Al termine della sessione, gli animali sono gentilmente presi dalla camera operante, scollegato dalla girevole e lavata con 0,05 ml di soluzione fisiologica eparinata per cancellare il catetere da residui di droghe. </li></ol></li><li> * Per motivi logistici, abbiamo utilizzato un sistema separato per le analisi del computer USV (Dell Optiplex 745, Windows XP Professional, Intel (R) Core (TM), 2 CPU, 2,40 GHz, 2 GB di RAM), ma il software di analisi può anche essere installati nel sistema stesso computer del software di registrazione. USV analisi deve essere eseguita con attenzione per garantire la precisione: <ol class="lalpha"><li> * SASLab Pro analizzare il software (bioacustica Avisoft, Berlino, Germania) consente USV registrato per essere visibile e udibile per gli sperimentatori umano visualizzato in un spectogram. </li><li> * Utilizzare le impostazioni di configurazione disponibili, il spectogram risultante può essere modificato per preferenze individuali. Inoltre, i rumori di fondo nelle frequenze basse (ad esempio, generato dalla ventola delle camere operante) può essere tagliato per consentire al software di rilevare automaticamente i suoni di frequenza superiore a quella del spectogram. Queste funzioni di assistenza nelle analisi dei datiesempio rendendo i file audio più brevi e più veloci da valutare. </li><li> Rumori di fondo nelle frequenze stesse USV a volte sono rilevati nello spettrogramma. Poiché i file audio vengono registrati come. Wav, il ricercatore ha bisogno di ascoltare i file audio durante la valutazione per confermare e differenziare USV dal rumore di fondo. </li><li> * Il software di analisi in grado di creare file di Excel con parametri quali le frequenze di chiamata, la larghezza di banda, la durata, e l'ora esatta del USV emessa. Quest'ultimo consente la correlazione di USV per l'ora esatta prima o dopo il farmaco è auto-somministrato. Questo permette USV per essere usato come misurazioni in tempo reale della risposta emotiva del ratto a casi specifici durante la procedura sperimentale. </li></ol></li></ol> Rappresentante dei risultati: <img src="/files/ftp_upload/2041/2041fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1:. Visualizzare Spectogram di un 22-kHz USV chiamate a lungo raggio in 22-kHz gamma sono suscitato in collaborazione con stimoli avversi e si pensa a riflettere uno stato emotivo negativo. <img src="/files/ftp_upload/2041/2041fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2: display Spectogram di 50-kHz USV Breve "piatto" e "a modulazione di frequenza" 50-kHz USV si suscitato in previsione e durante la cocaina auto-somministrazione.. Essi sono associati con effetto positivo. <img src="/files/ftp_upload/2041/2041fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3:. Cocaina-indotta 50-kHz USV gamma grafico raffigura USV (10-sec cassonetti) ha provocato prima e dopo l'auto-somministrato iniezioni di cocaina (0,75 mg / kg / inj) in un ratto rappresentante al giorno 5 di cocaina autosomministrazione sessioni. Immediatamente dopo il posizionamento all'interno della camera operante e prima disponibilità di cocaina, cocaina anticipatoria USV sono stati suscitato e durante l'auto-somministrazione, cocaina-indotta USV sono stati emessi.

<ol><li>Brudzynski, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Communication+of+adult+rats+by+ultrasonic+vocalization%3A+biological%2C+sociobiological%2C+and+neuroscience+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Communication of adult rats by ultrasonic vocalization: biological, sociobiological, and neuroscience approaches.</a> ILAR J. 50 (1), 43-43 (2009).</li>
<li>Knutson, B., Burgdorf, J., Panksepp, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+vocalizations+as+indices+of+affective+states+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Psychol+Bull%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic vocalizations as indices of affective states in rats.</a> Psychol Bull. 128 (6), 961-961 (2002).</li>
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<li>Flagel, S. B., Robinson, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+the+psychomotor+activating+effects+of+cocaine+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Quantifying the psychomotor activating effects of cocaine in the rat.</a> Behav Pharmacol. 18 (4), 297-297 (2007).</li>
<li>Pierce, R. C., Kalivas, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locomotor+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Locomotor behavior.</a> Curr Protoc Neurosci. Chapter 8 (Unit 8), 1-1 (2007).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Ratti vocalizzare in frequenze ultrasoniche che hanno una funzione sociale e comunicativo ed esprimere stati emotivi soggettivi 1,2. 22-kHz USV vengono attivati ​​dagli eventi che provocano ansia e angoscia, come spunti footshock, la presenza di predatori, le droghe repulsivo e sconfitta sociale 2,3. Pertanto, questi USV tipicamente lungo (&gt; 0,3 s), si pensa di rappresentare uno stato di effetto negativo dell&#39;animale. Viceversa, più corta 50-kHz USV (&gt; 0,3 s) sono emessi durante e in previsione di incontri positivi, come l&#39;alimentazione, accoppiamento e gioco sociale, e sono stati quindi collegati ad uno stato emotivo positivo dell&#39;animale 2,4. Queste chiamate sono state associate a rafforzare gli eventi legati alla attivazione del sistema dopaminergico 5. Ad esempio, aumento 50-kHz USV sono stati suscitato da iniezioni sistemica di cocaina 6 o d-amfetamina 7 e gli ambienti precedentemente associato a farmaci abuso di 8-10. E &#39;stato proposto che gli aumenti di attività locomotoria nei roditori si riferiscono a una maggiore motivazione e il comportamento appetitivo 11-14. Tuttavia, questo rapporto è indiretto come migliore. Studiando la nascita e la persistenza di USV di frequenze particolari, è possibile ottenere una visione di effetti emotivi di vari aspetti della esperienza della droga. In questa configurazione sperimentale, abbiamo raccolto le registrazioni USV immediatamente prima e durante la droga auto-somministrazione sessioni. Questo ci ha permesso di esaminare lo sviluppo di farmaci durante l&#39;aspettativa non-droga intervallo appena prima dell&#39;inizio della sessione e per valutare gli effetti diretti di cocaina sul USV. L&#39;auto-somministrazione di droghe metodo permette ratti di controllare direttamente i propri livelli di assunzione di droghe animali e sviluppare le aspettative accurata dei tempi e la frequenza di somministrazione del farmaco. Di conseguenza, USV individuate durante le sessioni di riflettere le aspettative precise di consegna della droga. Inoltre, USV può essere valutato durante gli intervalli prima della disponibilità di droghe (per esempio, USV anticipatori), nei ratti trattati con farmaci somministrati-sperimentatore, e durante le prove di estinzione della droga. Pertanto, i cambiamenti influiscono associati con anticipazione della droga, non contingente somministrazione del farmaco e l&#39;astinenza farmaco può anche essere determinato. Analisi dei cambiamenti USV nel corso di esposizione al farmaco a breve e lungo termine potrebbe fornire una interpretazione più dettagliata degli effetti del farmaco esposizione sul funzionamento affettivo. Oltre ai farmaci di auto-somministrazione esperimenti, registrazioni USV in camere operante può anche essere usato per una varietà di altre manipolazioni comportamentali associati a premiare o avversione, come bere alcool, di rinforzo cibo e condizionamento alla paura e le procedure di estinzione. Importanti dettagli metodologici Poiché il software MedPC può essere usato per manipolare con precisione le condizioni sperimentali, come la disponibilità di leva e le condizioni di illuminazione, il suo utilizzo in combinazione con la registrazione USV e analisi permette effetti emotivi di presentazioni spunto farmaci associati (ad esempio, presentazioni di luce o di altri stimoli sensoriali) e gli effetti diretti di assunzione del farmaco da determinare. Pertanto, per assicurare tempi sovrapposizione di auto-amministrazione delle procedure e registrazioni USV, è fondamentale che entrambi i programmi (per esempio, e MedPC RECORDER) si attivano contemporaneamente all&#39;inizio di ogni sessione. A causa dell&#39;enorme quantità di spazio digitale per archiviare i dati richiesti USV (ad esempio, a 10 minuti di file audio richiede circa 250 MB), cautela deve essere presa quando gli animali multipli sono eseguiti su un solo computer al tempo stesso. Per evitare errori di registrazione, la dimensione della RAM del sistema informatico di registrazione deve essere sostanziale (1-2 GB). Altri modi per ridurre gli errori di registrazione sono abbassando la risoluzione USV durante la registrazione e / o ridurre il numero di animali esecuzione allo stesso momento. Inoltre, è importante che il ricercatore è vigile a tutti gli aspetti della raccolta dati per tutta la procedura sperimentale. Per esempio, l&#39;accumulo di una grande quantità di registrazione dei dati sul disco rigido può causare il programma USV per mettere in pausa la registrazione. In questo caso, il programma di registrazione avrebbe bisogno di essere riavviato immediatamente per evitare la perdita di dati USV e de-sincronizzazione dei USV con altre misure comportamentali. Le condizioni ambientali possono influenzare la chiamata USV. Per esempio, il tocco di un essere umano non familiare può provocare l&#39;animale a emettere negativo 22-kHz chiamate, che potrebbe essere scambiato per una avversione per le condizioni sperimentali. Pertanto, la gestione intensiva prima di manipolazioni sperimentali è un aspetto importante di esperimenti comportamentali. Inoltre, gli ambienti romanzo dato che può anche suscitare non specifici chiamate USV, gli animali devono essere abituati a un ambiente di prova, se possibile.

<table><tbody><tr><td>Pacchetto di test per comportamento di condizionamento operante (auto-somministrazione di farmaci) per ratto</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>MED-008-CT-B1</td><td></td></tr><tr><td>Sorgente e rilevatore a infrarossi (fotocellule)</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>ENV-253SD ENV-253</td><td></td></tr><tr><td>Software Med PC</td><td><a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Med Associates, Inc.</a></td><td>SOF-735</td><td></td></tr><tr><td>Pompa per siringa a velocità singola</td><td>Razel Scientific Instruments</td><td>Model R-E</td><td></td></tr><tr><td>Pellet di saccarosio da 45 mg</td><td>Bio-Serv</td><td>F0042</td><td></td></tr><tr><td>Cannula per catetere</td><td>Plastics One</td><td>C313G-5UP</td><td></td></tr><tr><td>Avisoft-UltraSoundGate 416H</td><td>Avisoft BioAcoustics</td><td>Part #34163</td><td></td></tr><tr><td>Microfoni ultrasonici</td><td>Avisoft BioAcoustics</td><td>Part #40011</td><td></td></tr><tr><td>Software Avisoft-RECORDER</td><td>Avisoft BioAcoustics</td><td>Part #10302</td><td></td></tr><tr><td>Software Avisoft-SASLab</td><td>Avisoft BioAcoustics</td><td>Part #10101</td><td></td></tr><tr><td>Computer PC per registrazione USV</td><td>Dell</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Computer PC per analisi dati USV</td><td>Dell</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cocaina</td><td>RTI International</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

valutazione di vocalizzazioni ultrasoniche durante drug autosomministrazione in topi

Assessment of Ultrasonic Vocalizations During Drug Self-administration in Rats

Farmaci auto-somministrazione procedure sono comunemente usati per studiare i cambiamenti comportamentali e neurochimici associati umano l&#39;abuso di droga, la dipendenza e la ricaduta. Vari tipi di attività comportamentali sono comunemente utilizzati come misure di motivazione farmaco negli animali. Tuttavia, una componente fondamentale di ricaduta abuso di droga in consumatori di cocaina astinenti è &quot;craving&quot;, che è difficile da modello negli animali, come avviene spesso in assenza di comportamenti palesi. Tuttavia, è possibile che una classe di vocalizzazioni ultrasoniche (USV) nei ratti possono essere un indicatore utile per le risposte affettive alla somministrazione del farmaco, l&#39;anticipazione della droga e anche craving. Ratti vocalizzare in frequenze ultrasoniche che servono come una funzione comunicativo e di esprimere stati d&#39;animo soggettivi. Diversi studi hanno dimostrato che diverse gamme di frequenza di chiamata sono associati a stati emotivi negativi e positivi. Per esempio, le chiamate ad alta frequenza (&quot;50-kHz&quot;) sono associati a emozioni positive, mentre le chiamate a bassa frequenza (&quot;22-kHz&quot;) rappresentano uno stato emotivo negativo. Questo articolo descrive una procedura per valutare USV ratto associati a cocaina ogni giorno auto-somministrazione. Per questa procedura, abbiamo utilizzato di serie monocomando camere operante ospitato all&#39;interno del suono attenuando scatole per la cocaina auto-somministrazione sessioni e microfoni utilizzati ultrasuoni, multi-canale hardware di registrazione e programmi software specializzati per rilevare e analizzare USV. Misure USV riflettere emotività dei ratti, prima, durante e dopo la disponibilità di droga e può essere correlata con farmaci comunemente valutata auto-somministrazione dati comportamentali risposte leva quali, inter-risposta e intervalli di attività locomotoria. Dal USV può essere valutato durante gli intervalli prima della disponibilità di droghe (per esempio, USV anticipatorio) e durante le prove di estinzione della droga, i cambiamenti influiscono associati con anticipazione di droga e l&#39;astinenza farmaco può anche essere determinato. Inoltre, determinare cambiamenti USV nel corso del breve e lungo termine, l&#39;esposizione al farmaco in grado di fornire una interpretazione più dettagliata degli effetti del farmaco esposizione sul funzionamento affettivo.

Farmaci auto-amministrazione e vocalizzazioni ultrasoniche (USV) sono usati come valutazioni comportamentali in ricerca su animali, ma raramente in associazione. Lo scopo di questo articolo è quello di descrivere i vantaggi della registrazione durante USV droga auto-somministrazione procedure per valutare le risposte affettive di esperienza con la droga.

Valutazione di vocalizzazioni ultrasoniche Durante Drug autosomministrazione in topi

Le procedure di autosomministrazione di farmaci sono comunemente utilizzate per studiare i cambiamenti comportamentali e neurochimici associati all'abuso di sostanze, alla dipendenza e...

Questo video illustra una procedura per valutare gli effetti della cocaina sulle vocalizzazioni ultrasoniche o USB nei ratti. Durante l'auto-somministrazione della droga, ratti addestrati vengono posizionati in una camera di auto-somministrazione dove premono una leva per ricevere una ricompensa di cocaina e le USB vengono registrate in tempo reale. Il file audio creato viene convertito in uno spettrogramma, che permette agli sperimentatori umani di vedere e ascoltare le USB registrate.I segnali ultrasonici del ratto (USB) vengono quindi differenziati dal rumore di fondo e i singoli parametri degli USB confermati vengono esportati in un file di Excel. In questo modo, gli USB possono essere utilizzati come misure in tempo reale della risposta emotiva del ratto durante l'auto-somministrazione di farmaci. Ciao, sono Esta Meyer del laboratorio della dottoressa Christine Hel, divisione di farmacologia e tossicologia del College of Pharmacy dell'Università del Texas ad Austin.Oggi vi mostreremo la procedura per valutare le vocalizzazioni ultrasonore nei ratti durante l'auto-somministrazione di farmaci. Utilizziamo questa procedura in laboratorio per studiare gli effetti della cocaina sulle vocalizzazioni dei ratti. Cominciamo dunque.Il primo passo preparatorio per eseguire esperimenti combinati di auto-somministrazione di farmaci e vocalizzazioni ultrasoniche o USV consiste nell'addestrare i ratti a premere una leva per ottenere una ricompensa alimentare. Una volta addestrati, i ratti vengono sottoposti a un intervento chirurgico di cateterizzazione giugulare per consentire l'auto-somministrazione del farmaco. L'apparato utilizzato per l'auto-somministrazione del farmaco è costituito da una camera operante con singola leva, dotata di luci ambientali e stimolo, e tre serie di fotocellule.La camera operante è collocata all'interno di una camera più grande fonoassorbente, progettata per limitare il rumore e la luce esterni. Microfoni ultrasonici USPS sono montati saldamente al centro delle camere operanti per rilevare e registrare i segnali. I microfoni sono collegati a un'hardware di acquisizione dati posizionata all'esterno della camera operante, e le registrazioni vengono raccolte su un sistema informatico PC mediante un software di registrazione multicanale. Le risposte comportamentali dell'animale sono registrate utilizzando un computer Med Pentium dotato del software Med PC; i programmi Med PC e il registratore AVA Soft devono essere caricati e pronti prima che gli animali vengano posizionati all'interno delle camere operanti.Nel menu di Med PC, caricare la procedura sperimentale per i ratti nei loro box operanti assegnati per avviare il programma. Contemporaneamente alla registrazione degli USV, il comando stark deve essere pronto per essere emesso. Ora i microfoni devono essere abbinati ai ratti nei rispettivi box operanti sul computer di registrazione, nelle impostazioni di configurazione del software registratore AVA, etichettando il canale in base agli animali, impostando i collegamenti degli intervalli di registrazione e definendo il tasto della tastiera per avviare o interrompere la registrazione per il singolo canale.Una volta predisposto tutto, vediamo come condurre una sessione di registrazione. Per iniziare una sessione di registrazione, rimuovere delicatamente l'animale dalla sua gabbia di mantenimento e sciacquare il catetere endovenoso con 0,05 millilitri di soluzione salina eparinizzata per rilevare eventuali malfunzionamenti del catetere. Successivamente, collegare l'animale a un giunto rotante montato sulla camera operante, che permette la somministrazione di farmaco o di veicolo durante le sessioni di auto-somministrazione.Ora posizionare delicatamente l'animale nell'opera e nella camera e chiudere silenziosamente le porte. Una volta chiuse le porte, iniziare la registrazione. Poiché il programma di autoamministrazione del farmaco e il software di registrazione USB si trovano su due sistemi informatici separati, devono essere avviati contemporaneamente.Se i sistemi informatici sono collegati tra loro, questa operazione può essere eseguita da un singolo sperimentatore. I singoli USPS vengono registrati e contrassegnati con un timestamp in modo continuo per tutta la durata della sessione. Il programma Med PC che controlla e registra gli eventi all'interno della camera operante può essere configurato secondo qualsiasi specifica per i primi 10 minuti di ogni sessione.I ratti occupano una camera oscurata senza accesso alla leva. Dopo esattamente 10 minuti, la luce ambiente si accende e la leva viene estesa nella camera, indicando la disponibilità di cocaina o di veicolo. Dopo ogni risposta alla leva, questa si ritrae mentre viene somministrato il farmaco o il veicolo e la luce stimolo sopra la leva si illumina per tutta la durata dell'infusione del farmaco.Dopo 20 secondi, la leva si estende nuovamente nella camera, indicando la disponibilità della sostanza. La sessione prosegue in questo modo per la durata desiderata. Per questo esperimento, l'autoamministrazione della sostanza è stata programmata per una durata di 60 minuti.Al termine della sessione, le luci all'interno della camera si spengono. La leva viene ritratta e la droga non è più disponibile al termine della sessione di auto-somministrazione della droga. Il programma di registrazione USB deve essere terminato manualmente sul sistema informatico dedicato alla registrazione USB.Dopo aver terminato le sessioni di autoamministrazione del farmaco e di registrazione USB, rimuovere delicatamente l'animale dalla camera operante, scollegarlo dal congegno girevole e lavare il catetere somministratore con 0,05 millilitri di soluzione salina eparinizzata per rimuovere eventuali residui di farmaco dal catetere. Il passo successivo consiste nell'iniziare l'analisi dei dati. L'analisi USB deve essere eseguita con attenzione per garantire l'accuratezza.Il software di analisi SaaS lab pro converte il file audio dot wave in un sonogramma che permette ai sperimentatori umani di vedere e ascoltare le vocalizzazioni ultrasoniche (US) registrate. Il sonogramma risultante può essere modificato secondo le preferenze individuali utilizzando le impostazioni di configurazione disponibili. I suoni registrati vengono visualizzati nell'intervallo da zero a 100 chilohertz, inclusi le US dei ratti.E il rumore di fondo generato dal ventilatore nella camera fonoassorbente. Per eliminare questo rumore di fondo, impostare il filtro passa-alto dello spettrogramma a 10 chilohertz o superiore, poiché la maggior parte di esso si trova nell'intervallo compreso tra zero e 10 chilohertz. Abilitare ora le misurazioni automatiche: tutti i suoni al di sopra della frequenza di taglio verranno rilevati automaticamente dal software AVA Soft.Utilizzando lo strumento, rimuovere gli intervalli tra gli elementi rilevati nel file audio. Tutte le parti del file dot way originale senza suono possono essere eliminate. Il file dot way abbreviato può ora essere salvato e un nuovo spettrogramma più breve può essere utilizzato per un'analisi più rapida.Poiché sia il rumore di fondo che gli ultrasuoni dei ratti vengono rilevati dal software, è necessario ascoltare i suoni rilevati durante la valutazione. Per verificare e distinguere gli ultrasuoni dei ratti dal rumore di fondo, il rumore di fondo identificato deve essere eliminato manualmente dallo spettrogramma. La finestra di misurazione automatica dei parametri offre una selezione di misure.Ad esempio, durata temporale, larghezza di banda, frequenza e ampiezza. Per il singolo USV che può essere trasferito in un file Excel dopo l'analisi, al fine di esportare solo gli USV confermati del ratto in un file Excel, è necessario aggiornare l'elenco dei suoni rilevati creato dalla finestra di misurazione automatica dei parametri. Dopo la valutazione, l'elenco creato può essere esportato in un file Excel tramite lo strumento di esportazione selezionando "copia intestazioni misurazione parametri" e "copia valori misurazione parametri" per l'intero file.Il file Excel creato contiene informazioni sulle proprietà degli USB e, soprattutto per questo esperimento, i tempi esatti di emissione degli USB. Questo permette di correlare gli USB al momento preciso prima e dopo l'amministrazione autonoma del farmaco. In questo modo, gli USB possono essere utilizzati come misurazioni in tempo reale della risposta emotiva del ratto in istanti specifici durante la procedura sperimentale.Qui è mostrato un sonogramma di una USV di 22 chilohertz. Le chiamate prolungate a 22 chilohertz sono elicitate in concomitanza con stimoli avversivi e si ritiene che riflettano uno stato emotivo negativo. Questo sonogramma mostra USB a 50 chilohertz, brevi, piatte e modulate in frequenza, elicitate in previsione e durante l'assunzione autonoma di cocaina.Sono associati a un effetto positivo. Qui vengono mostrati USB reali a 50 chilohertz in tempo reale. Il grafico rappresenta gli USB elicitati prima e dopo iniezioni auto-somministrate di cocaina in un ratto rappresentativo.Al quinto giorno delle sessioni di somministrazione autonoma di cocaina, prima della disponibilità della cocaina, sono stati elicitati comportamenti USB anticipatori legati alla cocaina. E durante la somministrazione autonoma, sono stati emessi comportamenti USB indotti dalla cocaina. Vi abbiamo appena mostrato come registrare e valutare i comportamenti USB rossi rispetto a.Evocato durante le sessioni di somministrazione autonoma di cocaina. Quando si esegue questa procedura, è importante ricordare di configurare correttamente i programmi in modo che possano essere avviati contemporaneamente e funzionare senza errori. Questo è tutto.Grazie per aver guardato e buona fortuna con i vostri esperimenti.

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