Name: Oligo Profiling di massa (OLIMP) di polisaccaridi extracellulari (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-20T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Scopri il metodo OLIMP per analizzare rapidamente i glicostrutturi delle pareti cellulari vegetali mediante digestione enzimatica e spettrometria di massa MALDI-TOF. Questa tecnica sensibile richiede pochissimo campione.

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Questo lavoro è stato finanziato dalla Energy Biosciences Institute concedere OO0G01.

Il metodo OLIMP è esemplificata sulla emicellulosa più importanti presenti nelle pareti cellulari delle piante dicot, xyloglucan, utilizzando un endoglucanase come glycosylhydrolase. Il metodo è dimostrato con tutta piantine di Arabidopsis come fonte di tessuto vegetale. Materiale della matrice extracellulare di enzimi e può essere sostituito in base all'analisi desiderato utilizzando la stessa procedura. 1. Isolamento della parete cellulare <ol><li> Harvest cinque 5 giorni di età le piante intere Arabidopsis o l'equivalente del materiale desiderato e trasferirli in una provetta di reazione 1,5 ml. Assicurarsi che il materiale si trova nel fondo della provetta. </li><li> Aggiungere due sfere di metallo tre millimetri al tubo di reazione sulla parte superiore del campione e snap-congelare in azoto liquido. </li><li> Frantumare il campione congelato utilizzando un mulini a palle (2:30 min, 25 Hz). </li><li> Aggiungere 1 ml di etanolo al 70% acquosa al campione. Rimuovere le sfere di metallo con un magnete. Vortex accuratamente. </li><li> Centrifugare campione a 14.000 rpm per 10 minuti per far sedimentare il residuo insolubile alcool contenente il materiale della parete cellulare. </li><li> Rimuovere con cautela il surnatante tramite aspirazione. Fare attenzione a non disturbare il pellet. </li><li> Aggiungere 1 ml di cloroformio / metanolo (1:1 v / v). Vortex a fondo per risospendere il pellet. </li><li> Centrifugare campione a 14.000 rpm per 10 minuti e rimuovere con attenzione il surnatante tramite aspirazione. Fare attenzione a non disturbare il pellet. </li><li> Secco il campione con un concentratore. </li></ol> 2. Solubilizzazione di oligosaccaridi <ol><li> Per la solubilizzazione del polisaccaride particolare forma dei suoi oligosaccaridi risospendere il pellet in secco 25μl di un buffer adeguato. Per la formiato endoglucanase ammonio 50 mM, pH4.5, viene utilizzato. Aggiungi 0.2U di endoglucanase. Vortex la sospensione e liquido spin down. </li><li> Incubare il campione per 16h a 37 ° C in un incubatore, agitazione a 300rpm. </li><li> Togliere il solvente del digest (acqua) con un concentratore. </li></ol> 3. MALDI-TOF analisi del oligosaccaridi rilasciato <ol><li> BioRex MSZ 501 perle di resina a scambio cationico sono utilizzati per eliminare i sali ed enzimi dal campione digerito. Condizione le perle inserendo una aliquota in una colonna vuota e lavare le perline con abbondante acqua. </li><li> Aggiungi 5-10 perline BioRex al campione digerito e asciugato. Quindi aggiungere acqua 10μl, per piccole quantità di materiale 5μl di acqua può essere utilizzata. Immergere le perline nella soluzione con una breve rotazione del tubo. Incubare per almeno 10 minuti a temperatura ambiente. </li><li> Spot 2μl matrice (2,5-dihydroxybenzoic acido (DHB), 10mg/ml in acqua) su una piastra MALDI. Far evaporare il solvente sotto vuoto matrice porta a cristalli omogenea matrice chimica. </li><li> 2μl posto della soluzione del campione dissalati in cima alla matrice di cristalli sulla piastra bersaglio. Se si vuole individuare un gran numero di campioni solo continuare a spotting per un massimo di 3 minuti. Questo lasso di tempo assicura che il primo campione individuato non è ancora asciutto. Aspettare un 2min aggiuntivo per assicurare una miscelazione di ri-dissolto matrice e le molecole del campione oligosaccaridi nel campione ultimi maculato. Poi asciugare la piastra bersaglio sotto vuoto. Il campione / matrice mix dovrebbe cristallizzare in meno di 1 minuto per permettere cristallizzazione omogenea. </li><li> Mettere in una piastra segnale MALDI-TOF spettrometro di massa. La macchina deve essere impostata in modalità positiva reflectron con una tensione di accelerazione di 20000V e un ritardo di 350 nm, il range di massa selezionato dovrebbe essere 500-3000 Da (può cambiare dipende dalla oligomeri previsto). Iniziare a sparare il laser e raccogliere 100-200 spettri per campione, che sono compilati per generare uno spettro rappresentativo medio (Figura 2A). Ioni che rappresentano oligosaccaridi specifici possono essere identificati mediante il loro peso su carica (m / z) rapporto. Le intensità di ioni (altezza di picco) di tutti gli ioni di interesse deve essere aggiunto fino al 100% con conseguente abbondanza relativa di ogni oligosaccaridi del campione (Figura 2B). </li></ol> 4. Nell'analisi OLIMP situ OLIMP può essere utilizzato anche direttamente sul tessuto tralasciando alcuna iniziativa preparazione muro. Come esempio eziolata hypocotyls di Arabidopsis come fonte tessuto vegetale sono utilizzati. Ancora una volta, un endoglucanase viene utilizzato per determinare la struttura del xyloglucan emicellulose. Enzima e il materiale del tessuto possono essere sostituiti in base all'analisi desiderato utilizzando la stessa procedura. <ol><li> Harvest uno pianticella eziolata e collocarla su una piastra MALDI vuoto e lasciare che la piantina secca. </li><li> Aggiungi 0.5μl endoglucanase (0.4U/μl, disciolto in formiato di ammonio 50 mM, pH4.5) sulla piantina essiccata nella posizione desiderata. Assicurarsi che la goccia enzima tocca in parte la piastra bersaglio. </li><li> Posizionare la piastra segnale MALDI in un contenitore chiuso con umidità saturazione per evitare che la caduta di enzima si asciuga. Incubare la piastra nella camera per 16h a 37 ° C. </li><li> Asciugare la piastra MALDI con il tessuto della pianta e la caduta di enzima sotto vuoto. </li><li> Aggiungi 0.5μl matrice (DHB; 10 mg / l) in cima ad ogni punto enzima secca. Lasciate riposare per 2 minuti. </li><li> Asciugare la piastra segnale MALDI sotto vuoto. </li><li> Analizzare campioni con il MALDI-TOF. Luogo piastra con il tessuto e l'enzima / matrice spot (s) in un MALDI-TOF spettrometro di massa. La macchina deve essere impostata in modalità positiva reflectron con una tensione di accelerazione di 20000V e un ritardo di 350 nm, il range di massa selezionato dovrebbe essere 500-3000 Da (può cambiare dipende dalla oligomeri previsto). </li><li> Iniziare a sparare il laser sulla matrice / campione cristalli NEXT per il tessuto. Assicuratevi di non colpire il tessuto stesso, come in questo caso il tempo di volo delle molecole sarà spento. Raccogliere intorno 20-50 spettri per punto, che sono compilati per generare uno spettro rappresentativo medio (Figura 3). Ioni che rappresentano oligosaccaridi specifici possono essere identificati mediante il loro peso su carica (m / z) rapporto. Le intensità di ioni (ioni di altezza) possono essere riportati e tutti gli ioni di interesse deve essere aggiunto fino al 100% con conseguente abbondanza relativa di ogni oligosaccaridi nel campione. </li></ol> 5. Rappresentante Risultati Un esempio di analisi OLIMP del xyloglucan emicellulose presenti in piantine di Arabidopsis è illustrato nella figura 2. A causa delle differenze di massa degli ioni e l'enzima noto ben caratterizzato (endoglucanase) specificità gli ioni possono essere assegnati a specifiche strutture oligosaccaridi (Figura 2A). Ovviamente, isomeri strutturali non possono essere distinte. L'assunto di base per la determinazione della relativa abbondanza dei vari oligosaccaridi (Figura 2B) è che la loro spec fattore di risposta di massa è molto simile per quelli oligosaccaridi. Come mostrato qui, la quantificazione OLIMP è altamente riproducibile. Tuttavia, si ricorda che la robustezza del metodo dipende in larga misura il segnale ai rapporti rumore dei vari ioni oligosaccaridi. Ad esempio la contaminazione con sali o minori quantità di oligosaccaridi può diminuire tale rapporto. L'analisi OLIMP sullo stesso tessuto (analisi in situ) consente lo studio di aree molto piccole e definito e prevede la preparazione del campione molto poco. Nell'esempio qui presentato (Figura 3) non qualitativa (ioni stesso), ma differenze quantitative (variazione di intensità di ioni) sono state osservate tra le riprese e la radice dei tessuti della piantina Arabidopsis. Permutazioni della OLIMP-metodo potrebbe causare così il tessuto "imaging". <img src="/files/ftp_upload/2046/2046fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Diagramma di flusso della procedura OLIMP utilizzando piantine di Arabidopsis tutto come fonte vegetale. In primo luogo, il tessuto è macerata e pareti di materiale cellulare è preparato (immagine modificata da Fujino et al. 10). Poi oligosaccaridi di un polisaccaride muro particolare vengono rilasciati utilizzando una idrolasi specifica. Infine, le abbondanze relative delle oligosaccaridi solubili sono determinati utilizzando MALDI-TOF spettrometria di massa. <img src="/files/ftp_upload/2046/2046fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Abbondanza relativa di oligosaccaridi xyloglucan in piantine di Arabidopsis eziolata come determinato dal OLIMP. A) Rappresentante spettro di massa oligosaccaride xyloglucan; ogni ione rappresenta una struttura specifica oligosaccaridi, isomeri strutturali non possono essere distinte. B) diagramma a barre corrispondenti per la determinazione della relativa abbondanza oligosaccaridi. <img src="/files/ftp_upload/2046/2046fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Nell'analisi OLIMP situ utilizzando piantine di Arabidopsis eziolata come esempio. Ogni enzima / digestione goccia (cerchi colorati) possono essere analizzati in modo indipendente e spettri di massa corrispondente possono essere ottenuti e analizzati. <img src="/files/ftp_upload/2046/2046fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Spettro OLIMP del xilano emicellulosa ottenuto da digerire materiale fogliare Miscanthus con un xilanasi (Megazyme).

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</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Il metodo OLIMP qui presentata consente una analisi molto sensibile e rapida dei polimeri presenti nelle matrici extracellulari. OLIMP combina il rilascio enzimatico di oligomeri con successiva analisi MALDI-TOF. La generazione di un MALDI-TOF spettro richiede meno di un minuto, quindi OLIMP è adatto per una vasta gamma di applicazioni, tra high-throughput studi come schermi mutante. OLIMP non si limita ai polisaccaridi vegetali, ma può potenzialmente essere applicato a una vasta gamma di polimeri, limitato solo dalla disponibilità di specifici enzimi idrolitici. Tuttavia, una limitazione di OLIMP è che l&#39;abbondanza assoluta del polimero non può essere ottenuto. Come accennato prima OLIMP può essere usato per studiare la struttura di una varietà di polisaccaridi presenti nella matrice extracellulare di una diversità di specie. A titolo di esempio, la Figura 4 rappresenta uno spettro OLIMP della emicellulosa principali specie di erba, xilano. Qui, parete materiale cellulari derivate da l&#39;erba Miscanthus temperato è stato digerito con un nasi.

<table><tbody><tr><td>acido 2,5-diidrossibenzoico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>37550</td><td>10 mg/mL in acqua</td></tr><tr><td>Resina BioRex MSZ 501(D)</td><td>Bio-Rad</td><td>142-7425</td><td></td></tr><tr><td>Endoglucanasi</td><td>Megazyme</td><td>E-CELTR</td><td></td></tr><tr><td>Xilanasi M6</td><td>Megazyme</td><td>E-XYRU6</td><td></td></tr><tr><td>sferette metalliche da 3 mm</td><td>Retsch</td><td>22.455.0011</td><td></td></tr><tr><td>macinatore a percussione</td><td>Retsch</td><td>Mixer Mill MM400</td><td></td></tr><tr><td>MALDI-TOF</td><td>Shimadzu Corporation</td><td>Axima Performance</td><td></td></tr><tr><td>piatto bersaglio MALDI</td><td>Kratos Analytical</td><td>DE4555TA</td><td></td></tr><tr><td>SpeedVac</td><td>Eppendorf</td><td>Vacufuge 5301</td><td></td></tr><tr><td>colonna sotto vuoto</td><td>EMD Millipore</td><td>MSVMHTS00</td><td></td></tr><tr><td>pompa a vuoto</td><td>Welch Allyn</td><td>DryFast Ultra 2032</td><td></td></tr></tbody></table>

oligo profiling di massa (olimp) di polisaccaridi extracellulari

OLIgo Mass Profiling (OLIMP) of Extracellular Polysaccharides

Il contatto diretto delle cellule con l&#39;ambiente è mediato in molti organismi da una matrice extracellulare. Un aspetto comune delle matrici extracellulari è che essi contengono frazioni di zuccheri complessi in forma di glicoproteine, proteoglicani, e / o polisaccaridi. Alcuni esempi sono la matrice extracellulare degli esseri umani e cellule animali che consistono principalmente di proteine ​​fibrillari e proteoglicani o la base di polisaccaridi pareti delle cellule delle piante e funghi, e il proteoglicani / glicolipide pareti cellulari a base di batteri. Tutti questi glycostructures giocano un ruolo fondamentale nella cellula-cellula e comunicazione cellula-ambiente e di segnalazione. Un esempio straordinario complesso di una matrice extracellulare è presente nelle pareti delle cellule delle piante superiori. Il loro muro è fatto quasi interamente di zuccheri, fino al 75% del peso secco, e consiste nella più abbondanti biopolimeri presenti su questo pianeta. Pertanto, la ricerca è condotta come utilizzare questi materiali migliori come carbon-neutral delle risorse rinnovabili in sostituzione di prodotti petrolchimici derivati ​​da combustibili fossili. La sfida principale per la conversione del carburante rimane la riluttanza dei muri per degradazione enzimatica o chimica a causa della glycostructures unici presenti in questo biocomposite unico. Qui, vi presentiamo un metodo per l&#39;analisi rapida e sensibile di glycostructures cellula vegetale muro. Questo metodo di analisi di massa oligo (OLIMP) si basa il rilascio enzimatica di oligosaccaridi da facilitare glycosylhydrolases Pareti di materiali specifici e successiva analisi delle miscele solubilizzato oligosaccaridi utilizzando matrice laser assistita desorbimento / ionizzazione tempo di volo spettrometria di massa (MALDI-TOF/MS ) 1 (Figura 1). OLIMP richiede pareti delle celle solo 5000 per una analisi completa, può essere effettuata sul tessuto stesso 2, ed è suscettibile di high-throughput analisi 3. Mentre la quantità assoluta dei oligosaccaridi solubilizzato non può essere determinata da OLIMP l&#39;abbondanza relativa degli ioni vari oligosaccaridi possono essere delineate dagli spettri di massa dando intuizioni circa la sostituzione-pattern del polisaccaride nativo presente nel muro. OLIMP può essere utilizzato per analizzare una vasta gamma di polimeri muro, limitato solo dalla disponibilità di enzimi specifici 4. Ad esempio, per l&#39;analisi dei polimeri presenti nei enzimi vegetali della parete cellulare sono disponibili per analizzare i xyloglucan emicellulose utilizzando un xyloglucanase 5, 11, 12, 13, xilano utilizzando un endo-β-(1-4) xilanasi 6,7 , o per polisaccaridi pectiche utilizzando una combinazione di una poligalatturonasi e un methylesterase 8. Inoltre, utilizzando gli stessi principi di OLIMP glycosylhydrolase e anche attività glicosiltransferasi possono essere monitorati e determinato 9.

Un modo rapido per guadagnare è descritto lo studio della struttura di polisaccaridi in una matrice extracellulare. Il metodo sfrutta la specificità del glycosylhydrolases e la sensibilità della spettrometria di massa permette piccole quantità di materiale da analizzare. Questa tecnica è adattabile per essere utilizzato direttamente sul tessuto stesso.

Oligo Profiling di massa (OLIMP) di polisaccaridi extracellulari

Il contatto diretto delle cellule con l'ambiente è mediato in molti organismi da una matrice extracellulare. Un aspetto comune delle matrici extracellulari è...

Il profilo di massa degli oligomeri o l'esperimento Olympic qui mostrato permette di ottenere informazioni rapide sulla struttura dei polimeri nella matrice extracellulare o nella parete cellulare di un organismo. Nel caso in esame, le pareti cellulari vengono preparate da piantine mediante la rimozione iniziale dei componenti cellulari con etanolo al 70%. Il polimero della parete bersaglio viene quindi digerito con un'idrolasi specifica, solubilizzando particolari componenti della parete sotto forma di oligomeri.Un approccio alternativo consiste nel digerire la parete cellulare con l'enzima in C due direttamente sul tessuto. L'abbondanza relativa dei legamenti rilasciati viene determinata mediante MALDI spettrometria di massa e analisi statistica. Ciao, sono Marcus Polly dell'Istituto di Bioscienze Energetiche qui all'Università della California a Berkeley.Ciao, sono Marcus Re. E io sono Asha Giller. Entrambi dell'Istituto di Bioscienze Energetiche. Gli organismi sono circondati da matrici extracellulari che, a seconda dell'organismo, consistono in reti polimeriche complesse.Un modo rapido e sensibile per valutare la matrice extracellulare è un metodo che chiamiamo profilo di massa oli, abbreviato oleum, che vi mostreremo oggi. Questa procedura può essere eseguita anche direttamente sul tessuto vegetale. Cominciamo dunque. Iniziare questa procedura isolando la matrice extracellulare o la parete cellulare dei tessuti vegetali. Raccogliere cinque piantine di arabidopsis o la quantità equivalente di altro materiale vegetale e trasferirle in una provetta da reazione da 1,5 millilitri. Assicurarsi che il materiale sia posizionato sul fondo della provetta.Aggiungere due sfere metalliche di tre millimetri al tubo di reazione e congelare rapidamente in azoto liquido. Quindi macinare il campione congelato utilizzando un mulino a sfere per 2,5 minuti a 25 hertz. Dopo la macinazione del materiale, aggiungere un millilitro di etanolo acquoso al 70% al campione.Rimuovere le sfere di metallo utilizzando un magnete e vortexare accuratamente. Questo trattamento solubilizza la maggior parte delle proteine e degli organelli cellulari; centrifugare il campione a 14.000 giri/min per 10 minuti per ottenere un pellet del residuo insolubile nell'alcol. Rappresentando il materiale della parete cellulare, aspirare con attenzione il soprannatante, assicurandosi di non disturbare il pellet.Aggiungere un millilitro di soluzione di cloroformio-metanolo al pellet rimasto nel tubo e vortexare accuratamente per risospendere il pellet. Centrifugare per estrarre con cloroformio-metanolo i composti idrofobici come i lipidi. Dopo la centrifugazione, rimuovere il soprannatante ed essiccare completamente il pellet utilizzando un centrifugo sotto vuoto. Questo completa l'isolamento del materiale della parete cellulare, che ora può essere trattato per ottenere ligandi specifici.L'esempio qui dimostrato è la solubilizzazione dello xiloglucano, l'emice1lulosa principale presente nelle pareti cellulari delle piante dicotiledoni come Arabidopsis. Lo xiloglucano è un polimero costituito da un backbone di glucano fortemente sostituito con altri residui zuccherini, per la solubilizzazione di questo polimero si utilizza una endoglucanasi fungina. Ri-sospendere il pellet di pareti cellulari isolate e secche in 25 microlitri di formiato di ammonio 50 millimolare a pH 4,5 e aggiungere 0,2 unità di endoglucanasi. Vortexare la sospensione e centrifugare il liquido verso il basso.Posizionare il tubo in un agitatore e lasciare digerire le pareti cellulari per 16 ore a 37 gradi Celsius con agitazione, a 300 giri al minuto. Al termine della digestione della parete cellulare isolata, rimuovere il solvente mediante centrifuga sotto vuoto e procedere all'analisi degli oligosaccaridi rilasciati mediante spettrometria di massa; sali ed enzima vengono rimossi dal campione digerito utilizzando le perle di resina a scambio cationico Biox MSD 5 0 1.Le perle vengono innanzitutto condizionate posizionando la quantità necessaria in una colonna vuota e lavando le perle con abbondante acqua. Aggiungere da cinque a dieci perle cationiche biox condizionate al campione digerito e essiccato. Quindi aggiungere 10 microlitri di acqua per quantità minori di materiale.Possono essere utilizzati cinque microlitri di acqua. Immergere le perle nella soluzione centrifugando brevemente il tubo e incubare per almeno 10 minuti a temperatura ambiente mentre il digesto è in incubazione con le perle. Applicare due microlitri di matrice DHB su una piastra target mal D.Fare evaporare il solvente della matrice sotto vuoto, ottenendo cristalli chimici della matrice; quindi applicare due microlitri della soluzione del digest desalato sopra i cristalli della matrice sulla piastra bersaglio. Il solvente della goccia campione-matrice viene nuovamente evaporato sotto vuoto.È importante mantenere un tempo di mescolamento adeguato del liquido della matrice del campione prima della cristallizzazione, come descritto in dettaglio nel protocollo scritto allegato. Una volta che il campione si è asciugato, posizionare la piastra bersaglio in uno spettrometro di massa MALDI. Impostare lo strumento in modalità positiva con una tensione di accelerazione di 20.000 volt e un ritardo di 350 nanometri.L'intervallo di massa selezionato per questi legami di emicellulosa è compreso tra 500 e 3000 Dalton. L'intervallo di massa deve essere modificato in base alle dimensioni dei legami previsti. Iniziare a sparare il laser e raccogliere da 100 a 200 spettri per campione, che vengono compilati per generare uno spettro medio rappresentativo.Questo è lo spettro dell'emice llulosa. Il metodo oly mostrato in questo video può essere utilizzato direttamente anche sul tessuto vegetale, omettendo qualsiasi passaggio di preparazione della parete. Questa procedura di analisi in situ viene dimostrata su seedling di arabidopsis coltivati al buio.Il campione viene posizionato direttamente su una piastra bersaglio ed essiccato all'aria fino a ottenere un germoglio secco sulla piastra. Aggiungere 0,5 microlitri della miscela tampone enzimatica appropriata nelle posizioni desiderate. Assicurarsi che la goccia enzimatica tocchi parzialmente il tessuto e la piastra bersaglio.Posizionare la piastra MALDI in un contenitore chiuso con umidità satura per evitare l'essiccazione delle gocce di enzima. Incubare la piastra per 16 ore a 37 gradi Celsius. Al termine del periodo di incubazione, asciugare la macchia di enzima sotto vuoto e aggiungere 0,5 microlitri della matrice DHB liquida su ciascuna macchia di enzima essiccata.Quindi asciugare la piastra target MALDI sotto vuoto. Per analizzare le NC, utilizzare due campioni. Posizionare la piastra target, inclusi i punti di matrice enzimatica con il campione di tessuto, all'interno dello spettrometro di massa per registrare gli spettri di massa, utilizzando le stesse impostazioni adottate per il campione isolato di parete cellulare.Iniziare a sparare il laser sulla matrice. Campionare i cristalli accanto al tessuto. Assicurarsi di non colpire il tessuto stesso, poiché in tal caso il tempo di volo delle molecole risulterebbe alterato.Raccogliere circa da 20 a 50 spettri per punto e compilarli per generare uno spettro medio rappresentativo. Questo è uno spettro medio rappresentativo degli oligosaccaridi derivati dal glucano HemosIL presente nei POM. Le intensità ioniche o l'altezza ionica di tutti gli ioni di interesse vengono sommate al 100%, fornendo l'abbondanza relativa dei vari oligosaccaridi.Il risultato del metodo NC due OMP fornisce risultati simili. Ogni goccia enzimatica contrassegnata da un cerchio colorato può essere analizzata in modo indipendente e gli spettri di massa corrispondenti possono essere ottenuti e analizzati. Oola può essere eseguita anche su altri polimeri della matrice extracellulare, qualora sia disponibile un enzima idrolitico appropriato.Come esempio, questo è uno spettro oola della cellulosa emicellulosica presente nella coltura per bioenergia. Ms.Canus ha ottenuto i dati presentati mentre il materiale proveniente da una foglia di mecampus è stato digerito con la xin. Per l'assegnazione delle strutture agli ioni, si prega di fare riferimento al protocollo allegato.Vi abbiamo appena mostrato la procedura di profilatura della massa marziale degli oligonucleotidi su metriche extracellulari. Polimeri. Quando si esegue questa procedura, è importante ricordare che i migliori risultati si ottengono quando si raggiungono risultati di matrice omogenei per l'analisi OV MS. Questo è tutto.Grazie per aver guardato e buona fortuna con gli esperimenti.

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