Name: In vivo micro-circolazione di misura nel muscolo scheletrico da Intra-vitale Microscopia (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Impara a misurare la microcircolazione in vivo nel muscolo scheletrico utilizzando la microscopia intra-vitale. Questa tecnica consente osservazioni quantitative del flusso ematico a livello capillare.

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Ringraziamo JW Lichtman per i suoi consigli in osservazione nel vivo dei muscoli.

RBC membrana colorazione <ol><li> Topo globuli rossi sono stati corretti dal ceppo di topi con lo stesso eparinizzazione. </li><li> Topo RBC sono state colorate con PKH26 colorante (551/567 nm; Rosso fluorescente kit linker cellulari, Sigma, USA). </li><li> RBC sono state lavate in PBS e incubate con una soluzione di 2μM PKH26 colorante per 5 minuti a temperatura ambiente. La reazione è stata bloccata con l&#39;aggiunta di plasma (inattivato con il calore per 1 ora a 65 ° C in anticipo) e incubate per 1 minuto. </li><li> Il macchiato RBC sono state lavate 5 volte con PBS. </li></ol> Preparazione del mouse <ol><li> Da tre a sei mesi di sesso maschile C57BL/10 topi sono stati utilizzati in questo studio. Siamo topi anestetizzati mediante iniezione intraperitoneale di pentobarbital (50mg/kgBW). </li><li> I topi sono poi stati intubati con un 20-gage tubo in polietilene, ventilati meccanicamente, e riscaldato a 37 ° C su un foglio di Kapton riscaldamento collegato a un sensore di temperatura termocoppia e sistema di feedback del controller. </li><li> Il lato ventrale del collo è stata rasata. I muscoli sternocleidomastoideo destro e sinistro sono stati esposti. I muscoli sono stati sostenuti da un supporto in acciaio inox e superfused con soluzione sterile Krebs Ringer. </li></ol> Iniezione <ol><li> Globuli rossi colorati sono stati riscaldati a 37 ° C, diluito con Krebs Ringer. 50ul macchiato di globuli rossi (ematocrito 12%) è stato iniettato in un mouse dalla vena del pene. </li></ol> In vivo osservazione microscopica dei muscoli scheletrici Abbiamo seguito il metodo di Jeff W. Lichtman &#39;s con modifica 1: <ol><li> Gli animali sono stati posti su una piastra elettrica in cima ad una mano di ferro di una fase di Eclipse-800 microscopio Nikon. Acqua-immersione obiettivi obiettivi sono stati utilizzati per vivere epi-fluorescenza osservazione. Abbiamo osservato PKH26 all&#39;interno macchiato RBC scorrere del vascolari sotto la luce di una lampada fluorescente Mercurio. Abbiamo identificato arteriole primaria, secondaria arteriole, capillari e delle vene dalle loro direzioni di flusso globuli rossi e le architetture. </li><li> Una telecamera intensificata SIT (Hamamatsu Photonics, C2400, Giappone) e video-frame grabber sono stati installati per catturare il segnale di bassa intensità al tempo reale tasso di video (30 fotogrammi al secondo). Le immagini sono state registrate su DVD come file video. </li></ol> Stimolazione muscolare <ol><li> Un impulso elettrico è stata generata utilizzando uno stimolatore del nervo periferico (Innervator 252, Fisher &amp; Paykel Healthcare, Nuova Zelanda), e consegnato alla superficie dei muscoli attraverso una sonda rivestita in acciaio. Una fine meno sonda è stata posta sulla parte prossimale del muscolo e una fine più è stato posto sulla parte distale del muscolo. Stimolazioni tetano sono stati dati alla velocità di 50 Hz per 5 secondi. Gli stimoli elettrici non ha causato danni diretti miofibre in prossimità della zona di contatto. </li></ol> RBC flusso di analisi <ol><li> Registrato immagini video DVD Video sono stati trasferiti i file di immagine Savant tramite il software di frame grabber (Video Savant, USA). Le immagini video sono state riviste in velocità regolata in modo da visualizzare i singoli macchiato RBC. RBC flusso è stata misurata mediante conteggio dei globuli rossi, che ha volato attraverso un arteriola focalizzato primario al minuto. </li></ol>

<ol><li>Lichtman, J. W., Magrassi, L., Purves, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+neuromuscular+junctions+over+periods+of+several+months+in+living+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Visualization of neuromuscular junctions over periods of several months in living mice.</a> J Neurosci. 7, 1215-1222 (1987).</li>
</ol>

Tutte le procedure relative agli esperimenti sugli animali sono stati esaminati e approvati dalla sottocommissione per i prodotti per animali di ricerca del Massachusetts General Hospital.

Importanti punti TECNICHE sono i seguenti: (1) mantenimento dello stato fisiologico dell&#39;animale (ventilazione, perfusative pH della soluzione, la temperatura corporea), (2) volume di iniezione del macchiato RBC, e (3) condizioni per l&#39;osservazione (lente ottimale selezione, intensità di fluorescenza). Potenziali applicazioni future sono i seguenti: (a) combinazione con interventi biologici pharmacophysiological e / o molecolari, (b) osservazione a lungo termine di arterio / arteriolo-sclerosi e neovascolarizzazione.

<table><tbody><tr><td>Tinta PKH26 </td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>551/567 nm; Kit per marcatura cellulare fluorescente rossa</td></tr><tr><td>Topi C57BL/10 </td><td>Animale</td><td></td><td></td><td>Maschi di età compresa tra tre e sei mesi</td></tr><tr><td>Pentobarbital </td><td></td><td></td><td></td><td>Anestetico, 50 mg/kg di peso corporeo, i.p.</td></tr></tbody></table>

in vivo micro-circolazione di misura nel muscolo scheletrico da intra-vitale microscopia

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

BACKGROUND: fattori di regolamentazione e la fisiologia dettagliata del microcircolo in vivo sono rimasti non del tutto chiarita, dopo molti differenti modalità di imaging aveva inventato. Mentre molti parametri macroscopici del flusso di sangue riflettono velocità di flusso, i cambiamenti nella velocità del flusso sanguigno e di globuli rossi (RBC) flusso non regge relazione lineare nelle osservazioni microscopiche. Ci sono rapporti di discrepanza tra RBC velocità e flusso di RBC, RBC flusso e il volume di flusso di plasma e di eterogeneità spaziale e temporale di regolazione del flusso nei tessuti periferici nelle osservazioni microscopiche, una base scientifica per la necessità di studi più dettagliati nella regolazione del microcircolo con microscopia intravitale. METODI: Abbiamo modificato il metodo di Jeff Lichtman di osservazione microscopica in vivo dei muscoli sternocleidomastoideo mouse. I topi sono anestetizzati, ventilato, e iniettati con PKH26L-fluorescente GR etichettati per l&#39;osservazione microscopica. RISULTATO &amp; CONCLUSIONI: globuli rossi fluorescente vengono individuati e distinti anche da un ampio campo ottico. Contrazione muscolare evocata da aumentare la stimolazione elettrica indotta nel flusso di RBC. Quantificazione di altri parametri tra cui la velocità dei globuli rossi e la densità dei capillari erano fattibili. I topi ben tollerato la chirurgia, l&#39;iniezione di globuli rossi macchiato, osservazione al microscopio, e la stimolazione elettrica. Nessun danno muscolare o vaso sanguigno è stato osservato, suggerendo che il nostro metodo è relativamente meno invasivo e adatto per osservazioni a lungo termine.

Un nuovo metodo versatile per l&#39;osservazione del microcircolo è presentato. E &#39;considerato adatto per osservazione a lungo termine, e per la combinazione con interventi biologici pharmacophysiological o molecolare.

In vivo micro-circolazione di misura nel muscolo scheletrico da Intra-vitale Microscopia

CONTESTO: I fattori regolatori e la fisiologia dettagliata della microcircolazione in vivo non sono ancora stati completamente chiariti nonostante le molteplici modalità di...

Ciao, mi chiamo Aki, sono un ricercatore presso la Harvard Medical School, Massachusetts General Hospital. In questo video journal, mostrerò un nuovo metodo di microscopia in vivo. Con questa tecnica, possiamo misurare il flusso sanguigno quantitativo nella microsecrezione.Lo scopo del nostro esperimento è quello di stabilire un sistema per la misurazione continua della microsecrezione in vivo. Abbiamo progettato questo studio per visualizzare il flusso sanguigno a livello dei capillari e anteriormente nei muscoli di un animale vivo al microscopio; rispetto al metodo convenzionale per la misurazione ionica in vivo, come l'ecografia del sangue o la tensione di ossigeno, il nostro approccio permetterà la misurazione di più parametri del flusso ematico, ovvero il flusso degli eritrociti, la velocità dell'obesità e il flusso del plasma. La misurazione di questi parametri rivelerà in dettaglio le variazioni della microcircolazione.Successivamente, il nostro metodo viene applicato per rilevare le variazioni del flusso sanguigno in risposta a stimolazione fisiologica in tessuti muscolari vivi. Il nostro metodo è più semplice e meno invasivo rispetto alla microscopia convenzionale in vivo,

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Microscopia intravitale di seguire gli eventi emodinamici infiammatori e temporale e spaziale del microcircolo piale.

Microscopia intravitale della microcircolazione cervello di topo usando una finestra chiusa del cranio

Il glicocalice endoteliale / endoteliale strato superficiale è perfettamente studiata usando la microscopia intravitale. Microscopia intravitale è tecnicamente difficile in un organo in movimento come il polmone. Si dimostra come brightfield simultanea e microscopia a fluorescenza possono essere utilizzate per stimare endoteliale spessore dello strato di superficie in un movimento...

Nella misura in vivo della superficie polmonare strato endoteliale mouse

In questo articolo, vi presentiamo un metodo per analizzare microvasi tumorali in vivo utilizzando dinamico con mdc fluorescenza videomicroscopia. Due parametri quantitativi sono stati acquisiti: densità capillare funzionale che riflette la vascolarizzazione del tumore, e perdite indice che riflette la permeabilità della parete endoteliale.

In vivo imaging dell&#39;angiogenesi tumorale mediante fluorescenza confocale Videomicroscopy

Microscopia intravitale del microcircolo cremastere topo M. offre un unico e ben standardizzato-modello in vivo per l'analisi del midollo osseo migrazione di cellule staminali periferiche.

Microscopia intravitale del microcircolo nel muscolo mouse Cremaster per l&#39;analisi di migrazione delle cellule staminali periferiche

Questo articolo riporta un metodo dettagliato per la misurazione dinamica e la quantificazione della velocità del flusso sanguigno all'interno dei singoli vasi sanguigni del sistema vascolare epatico di topo utilizzando l'imaging al microscopio intravitale in combinazione con una metodologia specifica per l'acquisizione e l'analisi delle immagini.

Intravitale Microscopia Imaging del Fegato seguente<em&gt; Leishmania</em&gt; Infezione: Valutazione della epatiche Emodinamica

Questo metodo delinea l'uso della tomografia micro-computerizzata quantistica (MicroCT) per valutare la morfologia cardiaca, la funzione, la perfusione, il metabolismo e la vitalità con l'agente di contrasto iodato nei topi con ischemia miocardica indotta sperimentalmente. La tecnica può essere applicata per l'imaging longitudinale in vivo non distruttivo ad alto rendimento di vari modelli animali di cardiopatia umana.

In Vivo quantitativa valutazione della struttura del miocardio, la funzione, la perfusione e sostenibilità Utilizzando cardiaca micro-tomografia computerizzata

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Combinato di microscopia Intravital e l'ecografia contrapporre-aumentata del Hindlimb Mouse per studiare la perfusione del muscolo e la vasodilatazione indotta da insulina

Videomicroscopia sistemi sono utilizzati per esaminare le proprietà funzionali delle arteriole del tessuto adiposo isolato in risposta a stimoli fisiologici e farmacologici. Questa tecnica può essere utilizzata per esaminare microvascolari fenotipi in domini differenti del tessuto adiposo in esseri umani obesi.

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Microscopia a fluorescenza intravitale a campo largo della microcircolazione polmonare polmonare polmonare acuta sperimentale utilizzando un sistema di imaging stabilizzato sotto vuoto

Impara a misurare la microcircolazione in vivo nel muscolo scheletrico utilizzando la microscopia intra-vitale. Questa tecnica consente osservazioni quantitative del flusso ematico a livello capillare.

In vivo micro-circolazione di misura nel muscolo scheletrico da Intra-vitale Microscopia

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