Name: Un modello ortotopico di carcinoma ovarico sieroso in topi immunocompetenti per In vivo Tumore Imaging e monitoraggio del tumore Risposte immunitarie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-28T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 35 s
Description: Scopri un modello ortotopico di carcinoma ovarico sieroso in topi immunocompetenti per imaging in vivo e analisi del microambiente tumorale. Questo metodo consente di monitorare la progressione tumorale in tempo reale.

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Questo lavoro è stato finanziato dalla sovvenzione NIH P01 AI 068730 (SNC, NS), il NIH concedere CA016520 / TAPITMAT (NS), il finanziamento privato da parte della Fondazione Claneil (NS), e il ovarico SPORE concedere FCCC e la University of Pennsylvania ( P50 CA83638) e il Fox Chase Cancer Center core Grant (P30 CA06927) (DCC). Gli autori ringraziano l&#39;ottima assistenza tecnica dello strumento ottico Core / bioluminescenza diretto dal Dr. EJ Delikatny presso la University of Pennsylvania, Anthony Secreto dalle cellule staminali e Core dello xenotrapianto diretto dal Dott. G. Danet-Desnoyers presso la University of Pennsylvania Cancer Centro per la SNC formazione tecnica di iniezione ortotopica e Denada Dangaj presso l&#39;Università della Pennsylvania / OCRC per assistere sulla chirurgia.

1. Colture Cellulari <ol><li> Prima dell'iniezione ortotopico, cultura MOV1 cellule Kat, derivate da tumori DR26, in un pallone T175 fino a quando non sono al 90% confluenti. Prevede di utilizzare 1-5.000.000 cellule per iniezione, che richiede 1 o 2 T175 fiaschi. </li><li> Il giorno della iniezione, raccogliere le cellule e determinare il numero delle cellule utilizzando un emocitometro. </li><li> Una volta che la concentrazione cellulare è stata determinata, agglomerare le cellule per centrifugazione per 5 minuti a 300 g X a temperatura ambiente. </li><li> Dopo la rotazione, risospendere le cellule di avere 1 milione in 10 microlitri di PBS sterile con EDTA 0,002 M </li></ol> 2. Pre-Surgery <ol><li> Prima dell'intervento, riempire una siringa da insulina 3/10cc con 1 milione di MOV1-Kat cellule in 10 microlitri di PBS EDTA. </li><li> Trasferimento di un mouse isofluorane anestetizzati per una piastra elettrica. Aggiungi unguento oculare per prevenire la disidratazione dell'occhio. Poi, subito inserire la testa dell'animale in un sistema di cono collegato ad un vaporizzatore isoflurano per fornire anestesia durante l'intervento chirurgico. </li><li> Dopo la disinfezione del sito di iniezione con tamponi imbevuti di alcool, iniettare per via sottocutanea 5 mg / kg di ketoprofene, un pre-chirurgica analgesico, con una siringa da insulina 3/10cc. </li><li> Utilizzando Clippers, radersi la porzione caudale sinistra del dorso dalla giunzione toraco-lombare alla base della coda dell'animale. Applicare la crema di rimozione dei capelli per rimuovere completamente i capelli. Quindi, rimuovere l'eccesso con un tovagliolo di carta bagnato. </li><li> Una volta che il pelo è stato rimosso, sterilizzare l'area rasata con povidone-iodio e tamponi imbevuti di alcool. Poi, posto un drappo chirurgico intorno alla zona di incisione. </li></ol> 3. Chirurgia <ol><li> Poco prima dell'intervento, regolare i livelli vaporizzatore isoflurano al 1,5%. </li><li> Verificare che l'animale è completamente anestetizzato pizzicando la zampe. </li><li> Quindi, individuare la milza sotto la pelle. Quindi, utilizzando forbici chirurgiche, fare una incisione dorsolaterale 1-2 cm di lunghezza in alto a destra della milza. </li><li> Sezionare il retroperitoneo. Il cuscinetto che circonda l'ovaio del mouse verrà osservato. Utilizzare pinze curve di cogliere e di esporre il cuscinetto adiposo che circonda l'ovaio mouse. </li><li> Idratare l'organo con qualche goccia di PBS sterile. </li><li> Utilizzare pinze curve di cogliere, ritrattare ... posizione ... e poi sicuro l'ovaio per l'iniezione </li><li> Ferma cogliere il ovario con le pinze, iniettare 10 microlitri di MOV1 cellule tumorali Kat in dell'ovaio. Una solida conoscenza impedisce il rigurgito dei fluidi o perdite. </li><li> Subito dopo l'iniezione, allentare la tensione esercitata dal forcipe. La perforazione nell'ovaio dovrebbe spontaneamente ritrattare e chiudere. </li><li> Utilizzando una sutura assorbibile acido poliglicolico attaccato ad un ago, chiudere il retro-peritoneo ferita. </li><li> Rilasciare l'animale dal cono naso. </li><li> Tendere la pelle e sigillare i lembi della ferita dorsolaterale con qualche goccia di adesivo tissutale. </li><li> Infine, somministrare per via orale 100 microlitri di antibiotici per l'animale. Poi metterlo di nuovo nella sua gabbia e monitor per il recupero. Tenere l'animale sotto antibiotici nell'acqua da bere per una settimana. </li></ol> 4. Imaging in vivo <ol><li> Una settimana dopo l'iniezione ortotopico di MOV1 cellule tumorali Kat, eseguire imaging in vivo. Iniziare con il trasferimento di un mouse isofluorane anestetizzato alla camera di imaging. </li><li> Girare il livello isoflurano vaporizzatore fino al 2%. </li><li> Eseguire imaging in vivo secondo le istruzioni del produttore del sistema di imaging è. In questo video, il sistema Lumina verrà utilizzato. </li><li> Per l'immagine, clicca l'immagine vivente icona del software desktop. Poi, sul pannello di controllo acquisizione IVIS, selezionare "Initialize". Le impostazioni dello strumento sono analoghi ad una le impostazioni della fotocamera </li><li> Sul pannello di controllo acquisizione impostare i parametri di acquisizione dello strumento. Per fluorescenza, selezionare "fluorescente". Fare clic sulla casella Fotografia di acquisire una fotografia con ogni immagine. </li><li> Successivamente, impostare il tempo di esposizione come Auto. In "pixel binning o CCD risoluzione", selezionare "Medio". Poi sotto F / stop o diaframma, controllare il valore di 2. Avanti, selezionare il filtro di eccitazione 535 e il filtro per le emissioni DsRed. </li><li> In campo di vista, fare clic su View B per l'immagine di un mouse. </li><li> Quindi, fare clic su acquisire per iniziare l'acquisizione di immagini. </li><li> Una volta che l'acquisizione delle immagini è completa, utilizzare la regione di interesse, o ROI, strumento per la misura del segnale. Fare clic sull'icona di misura per liberare i valori del segnale e la zona. </li><li> Infine, fare clic su "salva" per salvare l'immagine nella cartella utente </li><li> Dopo le immagini sono state salvate, interrompere la somministrazione di isoflurano e restituire il mouse per la sua gabbia. Il mouse deve svegliarsi immediatamente. </li></ol> 5. Rappresentante Risultati -Usando questo protocollo, La crescita in vivo di un cancro ovarico ortotopico possono essere monitorati per almeno 3 settimane su una procedura non invasiva. <img src="/files/ftp_upload/2146/2146fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. MOV1 cellule Kat, o PBS come controllo negativo, sono stati iniettati nel ortotopicamente ovaie di topi soggetti non tumorali (animali e animali a destra e sinistra, rispettivamente). Imaging in vivo è stato effettuato 2 settimane più tardi. L'emissione di fluorescenza generata da MOV1 Kat cellule trapiantate nelle ovaie è stata misurata e confrontata con quella di topo di controllo negativo. <img src="/files/ftp_upload/2146/2146fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Sezioni congelate di MOV1 tumori ovarici Kat sono state colorate con biotinilato anti-CD4 mAb seguito da substrato DAB (marrone scuro) per rilevare tumore dei linfociti infiltranti (freccia nera). Le cellule sono state di contrasto con metil-verde per visualizzare nuclei cellulari (blu). Cellule tumorali (frecce rosse) sono stati morfologicamente distinte dalle cellule T. La diapositiva appare ingrandita 40x.

<ol><li>Etzioni, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+case+for+early+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">The case for early detection.</a> Nat Rev Cancer. 3, 243-252 (2003).</li>
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<li>Connolly, D. C., Hensley, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenograft+and+Transgenic+Mouse+Models+of+Epithelial+Ovarian+Cancer+and+Non+Invasive+Imaging+Modalities+to+Monitor+Ovarian+Tumor+Growth+In+situ+-Applications+in+Evaluating+Novel+Therapeutic+Agents.+Current+Protocols+in+Pharmacology+45%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Xenograft and Transgenic Mouse Models of Epithelial Ovarian Cancer and Non Invasive Imaging Modalities to Monitor Ovarian Tumor Growth In situ -Applications in Evaluating Novel Therapeutic Agents. Current Protocols in Pharmacology 45.</a> , 1-36 Forthcoming.</li>
<li>Milne, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+analysis+of+immune+infiltrates+in+high-grade+serous+ovarian+cancer+reveals+CD20%2C+FoxP3+and+TIA-1+as+positive+prognostic+factors%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Systematic analysis of immune infiltrates in high-grade serous ovarian cancer reveals CD20, FoxP3 and TIA-1 as positive prognostic factors.</a> , (2009).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Chirurgia e iniezioni ortotopico Iniezione ortotopico in borsa ovarica esigenze di formazione e di precisione. Così <ol><li> In caso di scarsa esperienza chirurgica, la pratica di cadaveri per primo. </li><li> Usare preferibilmente donne multipare (uno o due cucciolate), come si sviluppano più grandi ovaie nel tempo che facilita l&#39;iniezione e la sopravvivenza aumentano confrontare con le femmine nullipare. </li><li> A causa delle piccole dimensioni della borsa ovarica del mouse, l&#39;...

<table><tbody><tr><td>DMEM-GLUTAMAX</td><td>Invitrogen</td><td>10564-011</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14040</td><td></td></tr><tr><td>Versene</td><td>Lonza Inc.</td><td>17-711E</td><td></td></tr><tr><td>Piastra riscaldante</td><td>Deltaphase</td><td>39 DP</td><td></td></tr><tr><td>Dischetti di povidone</td><td>Dynarex</td><td>1108</td><td></td></tr><tr><td>Dischetti alcolici</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-669-62</td><td></td></tr><tr><td>Unguento artificiale per lacrime</td><td>Phoenix Pharmaceuticals, Inc.</td><td>17845-153</td><td></td></tr><tr><td>Chetoprofene</td><td>Fort Dodge Animal Health</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Siringa da 3 cc/insulina</td><td>BD Biosciences</td><td>309301</td><td></td></tr><tr><td>Sutura/ago in poliglicolato (3/8 19 mm)</td><td>Syneture</td><td>9612-31</td><td></td></tr><tr><td>Adesivo tissutale</td><td>Vetbond</td><td>3M</td><td></td></tr><tr><td>Vet Bactrim/sospensione orale</td><td>Hi-tech Pharmacal</td><td>840823</td><td></td></tr><tr><td>IVIS-Lumina</td><td>Caliper Life Sciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isofluorano</td><td>Phoenix Pharmaceuticals, Inc.</td><td>J108013</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino, qualificato</td><td>Invitrogen</td><td>10437036</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina/streptomicina</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15140</td><td></td></tr><tr><td>Vettore mammifero TurboFP635</td><td>Evrogen</td><td>FP721</td><td></td></tr><tr><td>Flaconi T175</td><td>cellstar</td><td>660-190</td><td></td></tr></tbody></table>

un modello ortotopico di carcinoma ovarico sieroso in topi immunocompetenti per in vivo tumore imaging e monitoraggio del tumore risposte immunitarie

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Background: Il cancro ovarico è generalmente diagnosticato in fase avanzata in cui il caso / rapporto di mortalità è alta e rimane quindi il più letale di tutte le neoplasie ginecologiche tra Stati Uniti le donne 1,2,3. Tumori sierosi sono le forme più diffuse di cancro ovarico e 4,5 il Tg-MISIIR-Tag transgenici rappresenta l&#39;unico modello del mouse che si sviluppa spontaneamente questo tipo di tumori. Tg-MISIIR-Tag topi esprimere SV40 regione trasformando sotto il controllo del Mulleriani inibitori della sostanza di tipo II Receptor (MISIIR) del gene promotore 6. Ulteriori linee transgeniche sono state identificate che esprimono il transgene TAG SV40, ma non sviluppano tumori ovarici. Topi inclini non tumorali mostrano tipica vita per C57BL / 6 topi e sono fertili. Questi topi possono essere utilizzate come riceventi trapianto allogenico di singenici per le cellule tumorali isolate dai Tg-MISIIR-Tag-DR26 topi. Obiettivo: Sebbene l&#39;imaging del tumore è possibile 7, la diagnosi precoce dei tumori in profondità è una sfida in animali che vivono di piccole dimensioni. Per abilitare studi preclinici in un modello animale immunologicamente intatta per il cancro ovarico sieroso, si descrive un modello di topo singenici per questo tipo di tumore ovarico che permette di imaging in vivo, gli studi del microambiente tumorale e tumore risposte immunitarie. Metodi: Per prima cosa deriva a + TAG cancro linea di topi cellule (MOV1) da un tumore ovarico spontanee raccolte in un 26 settimane di età DR26-Tg MISIIR-Tag femminile. Poi, abbiamo MOV1 cellule trasdotte stabilmente con TurboFP635 vettore Lentivirus mammiferi che codifica Katushka, un far-rosso mutante della proteina fluorescente rossa dal mare anemone Entacmaea quadricolor con eccitazione / emissione di massimi a 588/635 nm 8,9,10. Noi ortotopicamente impiantato MOV1 Kat nell&#39;ovaio 11,12,13,14 della non-tumorale inclini Tg-MISIIR-Tag topi femmina. Progressione del tumore è stata seguita da in vivo imaging ottico e microambiente tumorale è stata analizzata mediante immunoistochimica. Risultati: ortotopicamente MOV1 impiantato cellule Kat sviluppato tumori ovarici sierosi. MOV1 Kat tumori possono essere visualizzate da imaging in vivo fino a tre settimane dopo l&#39;impianto (fig. 1) e sono stati infiltrati con leucociti, come osservato nei tumori ovarici umani 15 (fig. 2). Conclusioni: descrivere un modello ortotopico di carcinoma ovarico adatto per imaging in vivo di tumori presto a causa della elevata pH stabilità e fotostabilità di Katushka nei tessuti profondi. Proponiamo l&#39;utilizzo di questo modello romanzo singenici del carcinoma ovarico sieroso per gli studi di imaging in vivo e il monitoraggio dei tumori risposte immunitarie e le immunoterapie.

Per studiare<em&gt; In vivo</em&gt; La crescita tumorale e microambiente tumorale, abbiamo utilizzato un modello murino singenici e ortotopico di carcinoma ovarico negli animali immunocompetenti. Noi trasdotte un tumore linea di topi cellule (MOV1) con una proteina fluorescente Katushka (MOV1<sup&gt; KAT</sup&gt;) E qui vi mostriamo il suo impianto ortotopico in ovaio e<em&gt; In vivo</em&gt; Immagini.

Un modello ortotopico di carcinoma ovarico sieroso in topi immunocompetenti per In vivo Tumore Imaging e monitoraggio del tumore Risposte immunitarie

Contesto: Il cancro ovarico viene generalmente diagnosticato in una fase avanzata, in cui il rapporto tra casi e decessi è elevato e, di conseguenza, rimane il più letale di tutti...

Il cancro ovarico viene generalmente diagnosticato in uno stadio avanzato, quando il rapporto tra casi e decessi è elevato. Pertanto, il cancro ovarico rimane la neoplasia ginecologica più letale tra le donne negli Stati Uniti. Descriviamo qui un modello murino sinnegenico di cancro ovarico sieroso che consente sia l'imaging in vivo che lo studio del microambiente tumorale.Abbiamo trasdotto stabilmente con la proteina fluorescente kaka derivata da C nmy una linea cellulare di carcinoma ovarico ottenuta da un topo transgenico DR 26 per il marcatore MIS due R. Queste cellule, denominate MOV uno cat, vengono iniettate nell'ovaio di un topo transgenico TG MIS due R non predisposto ai tumori, dove crescono e si sviluppano in un carcinoma ovarico sieroso fluorescente. Viene effettuata un'analisi di imaging in vivo per monitorare la progressione tumorale.Successivamente, l'ovaio viene dissezionato ed eseguita un'immunoidrochimica per studiare il microambiente tumorale. Questo modello animale presenta tre principali vantaggi rispetto ai modelli genetici esistenti. In primo luogo, i topi sviluppano tumori simili al carcinoma ovarico di tipo sieroso di alto grado dell'uomo, che è il tipo ist

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Ortotopico modelli animali di cancro ovarico meglio replicare la malattia umana e, pertanto, migliorare la nostra comprensione della progressione del cancro e la risposta del tumore alla terapia. Un modello di topo riceve una iniezione intrabursal della luciferasi che esprimono le cellule tumorali ovariche. Il trattamento è somministrato tramite sonda gastrica. La crescita tumorale è controllato...

Imaging in vivo e trattamenti terapeutici in un modello di mouse ortotopico di cancro ovarico

Questo video descrive il protocollo per la creazione di un modello sperimentale murino per studiare lo sviluppo del tumore e le metastasi peritoneali. Questo modello di carcinoma ovarico è generato dall'inoculazione ortotopica di cellule di carcinoma ovarico epiteliale umano nelle ovaie di un topo femmina.

Inoculazione ortotopica di cellule di cancro ovarico nell'ovaio murino: una procedura per stabilire un modello murino di cancro ovarico per studiare la disseminazione peritoneale delle cellule

Descriviamo una piattaforma di imaging animale non invasiva che consente il rilevamento, la quantificazione e il monitoraggio della crescita e della recidiva del cancro ovarico. Questo modello di xenotrapianto intraperitoneale imita il profilo clinico delle pazienti con carcinoma ovarico.

Modello murino per l&#39;imaging non invasivo per rilevare e monitorare Ovarian Cancer Ricorrenza

Le metastasi del cancro ovarico sono caratterizzate da numerose lesioni diffuse intra-peritoneali, tali da rendere difficile un'accurata quantificazione visiva del carico tumorale.  Qui descriviamo un metodo per la quantificazione in situ ed ex vivo del carico tumorale metastatico utilizzando cellule tumorali marcate con proteina fluorescente rossa (RFP) e imaging ottico.

La quantificazione di intra-peritoneale del cancro ovarico metastasi

Per chiarire il processo a più fasi di diffusione peritoneale del carcinoma ovarico, questo studio presenta un modello sperimentale murino di sviluppo del tumore originale e metastasi peritoneali tramite inoculazione ortotopico con queste cellule tumorali.

Modello murino sperimentale di sviluppo del tumore originale e peritoneale Metastasi<em&gt; via</em&gt; Ortotopico inoculazione con cellule dell&#39;ovaio Carcinoma

Questo protocollo descrive la generazione di tumori della vescica ortotopico murini in femmine C57BL 6J e il monitoraggio della crescita tumorale /.

Un tumore modello murino ortotopico della vescica e del tumore Detection System

Il presente protocollo descrive l'iniezione di cellule di osteosarcoma intratibia per generare modelli murini portatori di osteosarcoma ortotopico e lesioni da metastasi polmonari.

Iniezione di cellule di osteosarcoma intratibiale per generare modelli murini di osteosarcoma ortotopico e metastasi polmonari

Il manoscritto descrive una metodologia per l'instaurazione e il monitoraggio longitudinale della crescita delle metastasi polmonari spontanee da tumori mammari iniettati ortotopicamente, suscettibili di intervento in tutte le fasi della cascata metastatica.

In vivo Imaging per misurare le metastasi polmonari spontanee di cellule tumorali mammarie iniettate ortotopicamente

Questo protocollo descrive la creazione di un modello tridimensionale (3D) ex vivo dell'interazione cellula tumorale-omento. Il modello fornisce una piattaforma per chiarire i meccanismi pro-tumorali all'interno della nicchia adiposa e per testare nuove terapie.

Un modello ex vivo di metastasi peritoneali del carcinoma ovarico con omento umano

Qui presentiamo un protocollo passo dopo passo per stabilire i modelli tumorali intraperitoneali e intrabursali per studiare la progressione, la metasati e la risposta terapeutica del cancro ovarico. Inoltre, descriviamo come utilizzare l'imaging non invasivo a base di luciferasi in vivo in questi modelli per monitorare la progressione tumorale nel topo.

Modelli tumorali trapiantabili clinicamente rilevanti per lo studio del cancro ovarico metastatico e della risposta terapeutica nel topo

Scopri un modello ortotopico di carcinoma ovarico sieroso in topi immunocompetenti per imaging in vivo e analisi del microambiente tumorale. Questo metodo consente di monitorare la progressione tumorale in tempo reale.

Un modello ortotopico di carcinoma ovarico sieroso in topi immunocompetenti per In vivo Tumore Imaging e monitoraggio del tumore Risposte immunitarie (Video) | JoVE Journal

Un modello ortotopico di carcinoma ovarico sieroso in topi immunocompetenti per In vivo Tumore Imaging e monitoraggio del tumore Risposte immunitarie

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