Multispettrali in tempo reale immagini a fluorescenza per il rilevamento intraoperatoria del linfonodo sentinella in Oncologia Ginecologica

L'obiettivo generale del seguente esperimento è il rilevamento intraoperatorio del linfonodo sentinella nel cancro cervicale o vulvare. Il linfonodo sentinella è il primo linfonodo drenante di un tumore. In questa procedura, un agente fluorescente, incy e green o ICG viene iniettato insieme al colorante blu standard attorno al tumore primario.

La soluzione verrà spinta al primo linfonodo drenante. Un sistema di telecamere a fluorescenza multispettrale intraoperatoria su misura, installato in sala operatoria prima dell'intervento chirurgico, registra in tempo reale gli eventi del flusso linfatico in vivo basati sul segnale fluorescente, sulla base di risultati in vivo, nonché i risultati ex vivo che indicano l'intensità del segnale fluorescente e il classico metodo di rilevamento della discromia blu. Il chirurgo è guidato nell'escissione del linfonodo sentinella.

Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti è che si tratta di una procedura in un'unica fase durante la quale la visualizzazione e l'escissione dei linfonodi avviene durante l'intervento chirurgico. Questa tecnologia di piattaforma può migliorare i concetti attuali in oncologia chirurgica, non solo fornendo al chirurgo informazioni anatomiche, ma allo stesso tempo fornendo un tracciamento dinamico della fluorescenza in tempo reale in vivo. Per eseguire questo protocollo, configurare la telecamera a fluorescenza multispettrale intraoperatoria, che in genere è personalizzata.

Il sistema qui mostrato è stato sviluppato presso l'Istituto per l'imaging biologico e medico di Monaco. In stretta collaborazione con SEARCHs, viene utilizzato un laser per l'eccitazione della sonda fluorescente. I filtri della fotocamera sono regolati sulla fluorescenza nel vicino infrarosso con una lunghezza d'onda di eccitazione a 750 nanometri e una lunghezza d'onda di emissione di 800 più o meno 20 nanometri dopo che la luce di emissione passa attraverso il sistema ottico dove si separerà in luce visibile, fluorescenza intrinseca e fluorescenza nel vicino infrarosso.

Le telecamere CCD sono allineate per rilevare i fasci di luce separati in modo che i segnali multispettrali provenienti da tutte le telecamere vengano elaborati per produrre una vera biodistribuzione quantitativa del fluoro quattro. L'impostazione corregge anche gli artefatti. I monitor dei computer sulla consolle di controllo e all'interno della sala operatoria possono visualizzare segnali a colori e fluorescenti come immagini separate e sovrapposti in un'unica immagine in condizioni sterili.

Preparare il mezzo di contrasto fluorescente verde indocianina a una concentrazione di 0,5 milligrammi per millilitro in acqua distillata sterile. Non utilizzare soluzione salina in quanto ciò precipita il reagente, conservare immediatamente la soluzione in un luogo buio e fresco per evitare lo sbiancamento e preservare l'integrità del reagente ICG al fine di ridurre al minimo l'interferenza con la posizione standard della procedura chirurgica e avviare il sistema di telecamere in sala operatoria prima dell'intervento chirurgico e controllare i collegamenti agli schermi ad alta definizione per l'uso durante l'intervento chirurgico. Copri la telecamera con teli sterili standard utilizzando procedure e condizioni sterili, come mostrato nel video.

Prima di iniettare l'agente fluorescente. Posizionare la telecamera sopra il paziente ed esporre il campo di interesse. Regolare lo zoom per mettere a fuoco la telecamera e spegnere le luci in sala operatoria per un migliore rilevamento del segnale fluorescente.

Siringa Lotus con un millilitro di 0,5 milligrammi per millilitro, ICG e uguale volume di colorante blu standard. Iniettare con cautela l'agente fluorescente in quattro quadranti attorno al tumore primario e cercare di evitare fuoriuscite in caso di fuoriuscita di ICG sui guanti chirurgici. Basta cambiare i guanti durante la procedura.

Manovrare la telecamera per garantire una registrazione continua dell'area di interesse. Acquisisci immagini fisse o video in tempo reale del flusso linfatico e dell'aspetto del linfonodo sentinella fluorescente. Un tempo di esposizione compreso tra 180 e 200 millisecondi produrrà buoni video.

Salvare tutti i dati sul computer per analisi future. L'ispezione visiva per lo scolorimento del blu causato dall'iniezione di blu pervio viene eseguita come parte standard della procedura utilizzando le immagini a fluorescenza registrate simultaneamente come guida. Viene eseguita l'escissione in tempo reale del linfonodo sentinella.

L'imaging in tempo reale aiuta a rilevare i linfonodi fluorescenti in localizzazioni impreviste, acquisire immagini ex vivo di tutti i linfonodi di assalita in modo sequenziale per la presenza di fluorescenza. È possibile utilizzare tempi di esposizione più lunghi durante l'acquisizione di immagini fisse. Il linfonodo sentinella viene inviato per l'analisi istopatologica per rilevare la presenza o l'assenza di cellule tumorali.

La potenza del rilevamento intraoperatorio di un linfonodo sentinella con questo protocollo di imaging a fluorescenza multispettrale è dimostrata in questo esempio di un'immagine a fluorescenza multispettrale in vivo di un linfonodo nel cancro vulvare. Il linfonodo fluorescente nella regione inguinale prima dell'escissione è chiaramente visualizzato. In questo breve filmato, mostriamo il rilevamento in tempo reale del linfonodo sentinella basato sulla fluorescenza in una paziente con carcinoma cervicale.

Qui rappresentiamo un'immagine ex vivo di un linfonodo nel cancro cervicale. L'immagine a colori del linfonodo è stata sovrapposta all'immagine a fluorescenza dello stesso linfonodo utilizzando una pseudo scala di colori per produrre un'immagine chiara con un alto rapporto segnale/sfondo. Questa tecnica non solo ha aperto la strada ai ricercatori nel campo dell'oncologia chirurgica della resezione guidata da immagini del linfonodo sentinella, ma offre anche possibilità di imaging mirato al tumore specifico per la valutazione del margine tumorale e interventi su misura per il paziente in pazienti con tumori solidi e possibili metastasi regionali locali.

Quindi, dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona impressione dell'imaging a fluorescenza intraoperatoria in tempo reale dei linfonodi sentinella nel cancro ginecologico.