Name: Il mantenimento di Wolbachia in Cell-free medio (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 33 s
Description: Scopri il metodo per purificare Wolbachia pipientis da cellule di Anopheles gambiae e coltivarlo in mezzo privo di cellule. Questa tecnica include lisi con perle di vetro, centrifugazione differenziale e saggi di vitalità per confermare il successo della coltura batterica.

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il mantenimento di wolbachia in cell-free medio

Maintaining Wolbachia in Cell-free Medium

In questo protocollo video, le procedure sono dimostrati a (1) purificare simbionti Wolbachia fuori delle cellule in coltura zanzare, (2) usare un test di fluorescenza per verificare la fattibilità del Wolbachia purificata e (3) mantenere la Wolbachia ora extracellulare in cell-free medio . Purificata Wolbachia rimanere vivo nella fase extracellulare, ma non replicare fino a quando re-inoculati in cellule eucariotiche. Wolbachia extracellulari purificati in questo modo rimarrà valida per almeno una settimana a temperatura ambiente, e forse più a lungo. Purificato Wolbachia sono adatti per la microiniezione, estrazione del DNA e altre applicazioni.

Questo video descrive un metodo per purificare Wolbachia pipientis da una linea di cellule Anopheles gambiae e poi la coltura endosymbiont nella cella senza medium. Un test per la vitalità del batterio è dimostrata.

Il mantenimento di Wolbachia in Cell-free medio

In questo protocollo video, vengono illustrate le procedure per (1) purificare i simbionti Wolbachia da cellule di zanzara in coltura, (2) utilizzare un saggio a fluorescenza per ...

Il mio nome è Courtney Ston. Lavoro alla Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health, nel laboratorio del dottor Jason Rascon. Oggi eseguiremo la purificazione batterica da cellule di insetto coltivate.In realtà si tratta di una procedura molto semplice. Iniziamo raccogliendo le nostre cellule e quindi frammentando fisicamente le membrane delle cellule ospiti eucariotiche mediante lisi con perline di vetro. Successivamente utilizziamo la centrifugazione differenziale per separare i batteri dai detriti cellulari dell'ospite.E poi utilizziamo una serie di passaggi di filtrazione per rimuovere ulteriormente le particelle delle cellule ospiti, in modo da ottenere alla fine soltanto il pellet batterico purificato. Questo è effettivamente uno dei requisiti principali. È una cappa a flusso laminare utilizzata per mantenere sterile l'ambiente, poiché le colture cellulari si contaminano molto facilmente.Abbiamo anche bisogno di terreno di coltura cellulare, delle cellule stesse e le coltiviamo in flaconi di plastica. Abbiamo anche bisogno di microsfere di vetro da tre millimetri, di provette coniche da 50 ml e di una centrifuga in grado di eseguire una centrifugazione ad alta velocità,

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Wolbachia infezione batterica in Drosophila

Quantitative e automatica High-throughput Genome-wide Schermi RNAi in C. elegans</em

Isolamento del Vampiro di liquido extracellulare da<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Questo video introduce un metodo per isolare e coltivare sterili cellule embrionali di C. elegans  in vitro.

Digestione enzimatica e dissociazione manuale: un metodo per preparare gli embrioni di C. elegans per la coltura cellulare

C. elegans è di solito coltivate su piastre di agar solidi o liquidi in colture seminate con E. coli. Per evitare sottoprodotti batterici da confondere studi tossicologici e nutrizionali, abbiamo utilizzato un mezzo liquido axenic, CeHR, crescere e sincronizzare un gran numero di vermi per una gamma di applicazioni a valle.

Culturing Caenorhabditis elegans In axeniche Liquid Media e la creazione di transgeniche Worms da microparticelle Bombardamento

Le zanzare Aedes aegypti infettate con Wolbachia vengono rilasciate in popolazioni naturali di sopprimere la trasmissione dell'arbovirus. Descriviamo i metodi retro Ae. aegypti con Wolbachia infezioni in laboratorio per esperimenti e rilascio di campo, prendendo precauzioni per ridurre al minimo la selezione e l'adattamento di laboratorio.

Mantenimento di Aedes aegypti zanzare infettate con Wolbachia

Questo protocollo viene descritto come stabilire l'infezione virale in vivo in Drosophila melanogaster utilizzando il metodo di nano-iniezione e tecniche di base per analizzare l'interazione virus-ospite.

Istituzione dell'infezione virale e analisi dell'interazione ospite-Virus in Drosophila Melanogaster

Sono stati utilizzati quattro metodi per rilevare Wolbachia intracellulare, che si sono completati a vicenda e hanno migliorato l'accuratezza del rilevamento dell'infezione da Wolbachia di Aa23 derivato da Aedes albopictus e Aa23-T curato dall'infezione nativa di Wolbachia utilizzando antibiotici.

Rilevamento del ceppo Wolbachia wAlbB nelle linee cellulari Aedes albopictus

Qui viene presentato un protocollo ottimizzato per la coltura di singoli nematodi isolati su supporti solidi in dispositivi multipozzetto microfabbricati. Questo approccio consente ai singoli animali di essere monitorati per tutta la vita per una varietà di fenotipi legati all'invecchiamento e alla salute, tra cui attività, dimensioni e forma del corpo, geometria del movimento e sopravvivenza.

Coltura a lungo termine e monitoraggio di Caenorhabditis elegans isolati su terreni solidi in dispositivi multi-pozzetto

Qui, presentiamo un protocollo per la coltura di singoli nematodi isolati su terreni solidi per il monitoraggio dei parametri fisiologici permanenti e la quantificazione della fluorescenza. Questo sistema di coltura include una barriera di acido palmitico attorno ai pozzi a singolo verme per impedire agli animali di fuggire, consentendo l'uso di interventi avversivi, inclusi batteri patogeni e fattori di stress chimici.

Coltura a lungo termine di singoli Caenorhabditis elegans su terreni solidi per il monitoraggio longitudinale della fluorescenza e interventi avversivi

Le linee cellulari sono utili negli studi su organismi intracellulari che non possono essere coltivati al di fuori delle loro cellule ospiti. Sebbene le linee infettate da Wolbachia abbiano permesso molte scoperte, l'eterogeneità all'interno di queste linee può portare a risultati sperimentali variabili. Presentiamo un protocollo per la generazione di cloni di singole cellule e colture continue da cellule JW18 infettate da Wolbachia.

Generazione di colture monoclonali da linea cellulare JW18 di Drosophila melanogaster infettata da Wolbachia

Scopri il metodo per purificare Wolbachia pipientis da cellule di Anopheles gambiae e coltivarlo in mezzo privo di cellule. Questa tecnica include lisi con perle di vetro, centrifugazione differenziale e saggi di vitalità per confermare il successo della coltura batterica.

Il mantenimento di Wolbachia in Cell-free medio

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