Name: Induzione e punteggio clinico dellepatite cronica-recidivante encefalomielite autoimmune sperimentale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 26 min 48 s
Description: Impara a indurre e valutare clinicamente l'encefalomielite autoimmune sperimentale cronico-recidivante nei ratti DA, un modello animale per la sclerosi multipla. Questo metodo standardizzato consente di studiare la progressione della malattia e testare nuove terapie.

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Induzione e monitoraggio delle patologie cronico-recidivante EAE L&#39;emulsione è una miscela 1:1 di antigene in soluzione acquosa aggiunto integrato adiuvante completo di Freund. E &#39;molto importante aggiungere l&#39;antigene per l&#39;adiuvante e non viceversa! Ci sono un sacco di rifiuti quando si effettua l&#39;iniezione e una emulsione. Sempre preparare 1,5 o 2 volte più di quello che vi serve. Usa mortaio in autoclave, pestello, siringhe di vetro, e ponti. Tutte le plastiche devono essere sterili. La preparazione può essere fatta su un banco di laboratorio regolare. 1. Preparazione del coadiuvante integrato Pesare 30 mg di Mycobacterium tuberculosis (catalogo Difco # 231141) e posto in un mortaio. Fai in polvere sottile senza premere troppo per evitare di rompere i batteri. Aggiungere 10 ml di adiuvante completo di Freund H37Ra (Difco catalogo # 231131) e mescolare. Questo adiuvante integrato ora contiene 4 mg / ml di Mycobacterium tuberculosis. Trasferire in un tubo. 2. Preparazione del midollo spinale omogenato Raccogliere midollo spinale di DA ratti (età / sesso indifferente) e conservare congelati a -80 ° C. Pesare i cavi congelato spinale di avere abbastanza da mix 1:1 (peso: volume) con l&#39;adiuvante completati. Tritare il midollo spinale il più finemente possibile con una lama di rasoio, trasferimento in malta utilizzata nella sezione 1, e fare una pasta con il pestello. 3. Preparazione della emulsione <ol><li> Luogo integrato adiuvante completo di Freund in un tubo. Vortice ad alta velocità. Aggiungere il calo del midollo spinale omogenato a goccia, mentre vortex. Quando tutti i omogenato midollo spinale è aggiunto, vortex per 5 minuti. La miscela dovrebbe diventare rosa chiaro. </li><li> Mettere l&#39;emulsione in una siringa da 5 ml in vetro e collegarlo ad un altro siringa di vetro da 5 ml con un ponte di 18G (catalogo Fisher # 14-825-17L). Invia l&#39;emulsione da una siringa all&#39;altra fino a quando diventa difficile (5-10 minuti). Se più di 5 ml di emulsione è preparato, utilizzare diversi ml 5 siringhe NON usare più grandi siringhe. </li><li> L&#39;emulsione può essere memorizzato in siringhe a 4 ° C per 3 settimane. Raccomando prepararla almeno 12 ore in anticipo per verificare che non si rompe. Dovrebbe rimanere spessa e non separati in 2 fasi. Il colore cambia durante la notte per una luce gialla o beige. </li></ol> 4. Immunizzazione dei topi <ol><li> Mescolare l&#39;emulsione nelle siringhe per qualche minuto e il trasferimento alla siringa usata per l&#39;iniezione. Iniettare 200 ul per via sottocutanea alla base stessa della coda con aghi 23G e 3 ml siringhe Luer-Lock in breve anestesia. </li><li> I destinatari sono 7-9 settimane di età ratti femmina DA. Riceviamo dal nostro Harlan ratti Sprague-Dawley. </li><li> I ratti devono essere osservati due volte al giorno e pesati tutti i giorni. I segni clinici sono attesi 7-15 giorni dopo l&#39;iniezione di emulsione. </li></ol> Punteggio clinico: 0: nessuna malattia 0.5: distale coda zoppicare 1: coda zoppicare 2: paraparesi mite, atassia 3: paraparesi moderato, i viaggi ratti di volta in volta 3.5: un arto posteriore è paralizzato, l&#39;altra si muove 4: completa paralisi degli arti posteriori 5: completa paralisi degli arti posteriori e incontinenza 6: moribondo, difficoltà a respirare, non mangiare o bere. Eutanasia immediatamente.

CB e KGC sono co-fondatori e consulenti per Airmid Inc.

Ci sono alcune considerazioni importanti per questo protocollo. La genetica dei topi DA varierà leggermente a seconda di quale allevatore sono acquistato. Queste differenze possono aumentare o diminuire la suscettibilità dei topi EAE a induzione. Se il vostro ratti sono più suscettibili alle EAE si vuole ridurre la forza della vaccinazione utilizzando non integrato completo di Freund adiuvante o adiuvante incompleto di Freund. È anche possibile ridurre la quantità di emulsione iniettati o diluire l&#39;omogeneizzato midollo spinale ...

<table><tbody><tr><td>Freund completo&amp;rsquo;s Adiuvante</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF 311-360-5</td><td>Prodotto da Difco</td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis H37Ra</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF3114-33-8</td><td>Prodotto da Difco</td></tr><tr><td>ratto DA</td><td>Animale</td><td>Harlan Laboratories</td><td></td><td>Femmine, 7-9 settimane di età.</td></tr><tr><td>Siringhe di vetro - 5 ml</td><td>Strumento</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-823-10 B</td><td></td></tr><tr><td>Ponte metallico - 18G</td><td>Strumento</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-825-17L</td><td></td></tr><tr><td>Siringhe di plastica Luer Lok - 3 ml</td><td>Strumento</td><td>BD Biosciences</td><td>309585</td><td></td></tr><tr><td>Aghi - 20G 1 1/2</td><td>Strumento</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-5C</td><td></td></tr></tbody></table>

induzione e punteggio clinico dell&#39;epatite cronica-recidivante encefalomielite autoimmune sperimentale

Induction and Clinical Scoring of Chronic-Relapsing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

La sclerosi multipla (SM) è una malattia infiammatoria cronica del sistema nervoso centrale (SNC) che colpisce generalmente i giovani adulti. E &#39;caratterizzato da demielinizzazione e spaventando gliali nelle aree disseminate nel cervello e nel midollo spinale. Queste lesioni alterano la conduzione nervosa e indurre i deficit neurologici invalidanti che variano con la posizione delle placche demielinizzati nel sistema nervoso centrale (es. paraparesi, paralisi, cecità, incontinenza). Encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) è un modello per la SM. EAE è stato indotto accidentalmente negli esseri umani durante la vaccinazione contro la rabbia, con virus coltivati ​​su coniglio midollo spinale. Residui di iniezione spinale con il virus inattivato indotta la malattia SNC. A seguito di queste osservazioni, un primo modello di EAE è stata descritta nel primati non umani immunizzati con un sistema nervoso centrale omogenato da fiumi e Schwenther nel 1935. EAE da allora è stato generato in una varietà di specie e possono seguire corsi diversi a seconda della specie / ceppo e immunizzante antigene utilizzato. Per esempio, immunizzando topi Lewis con proteina basica della mielina in emulsione con adiuvante induce un modello di EAE acuta, mentre lo stesso antigene induce una malattia cronica nelle cavie. Il modello di EAE qui descritto è indotta da immunizzando topi DA contro il midollo spinale nel ratto DA emulsione in adiuvante completo di Freund. Ratti sviluppare una paralisi flaccida ascendente entro 7-14 giorni post-vaccinazione. Segni clinici seguono una sclerosi multipla recidivante-remittente per diverse settimane. Patologia grandi spettacoli infiltrati immunitario del sistema nervoso centrale e placche demielinizzazione. Considerazioni speciali per prendersi cura di animali con EAE sono descritte alla fine del video.

Questo video dimostra il punteggio di induzione e clinica di un modello animale di sclerosi multipla: cronico-recidivante encefalomielite autoimmune sperimentale nei ratti DA. La malattia, indotta da immunizzando topi con una emulsione che contiene tutto midollo spinale di ratto e adiuvante completo di Freund, presenta segni clinici simile alla malattia umana.

Induzione e punteggio clinico dell&#39;epatite cronica-recidivante encefalomielite autoimmune sperimentale

La sclerosi multipla (SM) è una malattia infiammatoria cronica del sistema nervoso centrale (SNC) che colpisce comunemente i giovani adulti. È caratterizzata da...

Sono Christine Beaton. Sono un ricercatore assistente nel laboratorio di George Chen presso il Dipartimento di Fisiologia e Biofisica dell'Università della California a Irvine. E quello che vi mostrerò nei prossimi giorni è come indurre e monitorare l'EAE cronico recidivante, ovvero l'encefalomielite autoimmune sperimentale nei ratti DA.Questo è un modello animale per la sclerosi multipla, o dovrei dire, uno dei modelli animali per la sclerosi multipla. È caratterizzato da una paralisi flaccida ascendente negli animali e da caratteristiche istologiche che ricordano la malattia umana. Pertanto, questa procedura richiederà diversi giorni.Quindi, nel primo giorno, vi mostrerò come preparare l'emulsione genica con un omogeneato di midollo spinale rosso naive in adiuvante completo di Freund. Nel secondo giorno, vi mostrerò come immunizzare i ratti contro l'EAE, dopodiché attenderemo tra sette e quindici giorni per osservare i primi segni clinici in questi animali, momento in cui vi illustrerò le diverse fasi di progressione dell'EAE in animali diversi. Per prima cosa, vi mostrerò tutti i reagenti e i materiali necessari per preparare l'emulsione.Quello che sto usando è l'adjuvante compl

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In questo video ci mostrano come isolare le cellule mononucleate del sistema nervoso centrale di topi con encefalomielite autoimmune sperimentale.

Isolamento di cellule mononucleate dal Sistema Nervoso Centrale di ratti con EAE

Il video dimostra l'induzione dell'encefalomielite autoimmune sperimentale in un modello murino iniettando una combinazione di glicoproteine oligodendrocitarie mieliniche e Mycobacterium tuberculosis inattivato. Il modello consente ai ricercatori di studiare i meccanismi della malattia e testare gli interventi terapeutici.

Induzione di encefalomielite autoimmune sperimentale in un modello murino

In questo video, un modello murino di sclerosi multipla viene stabilito utilizzando l'encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE). Al topo viene iniettata un'emulsione contenente un peptide neuronale e un adiuvante, innescando una risposta immunitaria che attiva le cellule T autoreattive. Questo è seguito da un'iniezione di tossina della pertosse (PTX) per aumentare la permeabilità della barriera emato-encefalica, consentendo alle cellule T autoreattive di infiltrarsi nel cervello. Questa...

Questo manoscritto descrive i metodi per l'induzione e il punteggio del modello sperimentale di encefalomielite autoimmune (EAE), insieme alla valutazione della distribuzione delle cellule immunitarie e dei livelli di citochine mRNA nei linfonodi, nella milza, nel sangue e nel midollo spinale utilizzando la citometria a flusso e la PCR quantitativa, rispettivamente, in varie fasi della malattia.

Induzione di encefalomielite autoimmune sperimentale nei topi e valutazione della distribuzione delle malattie-dipendente delle cellule immunitarie in vari tessuti

Qui, presentiamo protocolli per studiare danno dell'unità neurovascolare durante l'encefalomielite autoimmune sperimentale in vivo. Ci rivolgiamo in particolare come determinare la permeabilità della barriera emato - encefalica e attività della gelatinasi coinvolti nella migrazione dei leucociti attraverso la limitans glia.

Visualizzazione di danno delle barriere endoteliali e gliali dell'unità neurovascolare durante l'encefalomielite Autoimmune Sperimentale In Vivo

Questo manoscritto presenta un protocollo per indurre l'encefalomielite autoimmune sperimentale attiva (EAE) nei topi. Viene inoltre presentato un metodo per l'isolamento e la caratterizzazione dei linfociti infiltrati nel sistema nervoso centrale (CNS) per mostrare come i linfociti siano coinvolti nello sviluppo della malattia autoimmune del SNC.

Analisi citometrica del flusso dell'infiltrazione di linfociti nel sistema nervoso centrale durante l'encefalomielite autoimmune sperimentale

Il presente protocollo descrive l'induzione dell'encefalomielite autoimmune sperimentale in un modello murino utilizzando glicoproteina oligodendrocitaria mielinica e monitorando il processo della malattia utilizzando un sistema di punteggio clinico. I sintomi sperimentali correlati all'encefalomielite autoimmune vengono analizzati utilizzando l'analisi della tomografia microcomputerizzata del femore di topo e il test in campo aperto per valutare il processo della malattia in modo completo.

Induzione e diversi indicatori di valutazione dell'encefalomielite autoimmune sperimentale

L'encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) funge da modello animale di sclerosi multipla. Questo articolo descrive un approccio per valutare l'infiammazione del midollo spinale, la demielinizzazione e la lesione assonale nell'EAE. Inoltre, viene presentato un metodo per quantificare i livelli di luce solubile dei neurofilamenti nel siero dei topi, facilitando la valutazione del danno assonale nei topi vivi.

Punteggio dell'infiammazione del sistema nervoso centrale, della demielinizzazione e della lesione assonale nell'encefalomielite autoimmune sperimentale

L'encefalomielite autoimmune sperimentale è uno dei modelli murini più utilizzati di sclerosi multipla. Nel protocollo attuale, i topi C57BL/6J di entrambi i sessi sono immunizzati con il peptide glicoproteico oligodendrocitario della mielina, con conseguente paresi ascendente della coda e degli arti. Qui discutiamo il protocollo di induzione e valutazione dell'EAE.

Modellazione della sclerosi multipla nei due sessi: encefalomielite autoimmune sperimentale indotta da MOG35-55

L'encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) è un modello animale di sclerosi multipla (SM), che condivide con la malattia umana una robusta risposta autoimmune umorale. Qui, riportiamo un protocollo ELISA semplice e flessibile per quantificare gli autoanticorpi nel siero di topi immunizzati con EAE.

Quantificazione degli anticorpi autoreattivi nei topi dopo encefalomielite autoimmune sperimentale

Impara a indurre e valutare clinicamente l'encefalomielite autoimmune sperimentale cronico-recidivante nei ratti DA, un modello animale per la sclerosi multipla. Questo metodo standardizzato consente di studiare la progressione della malattia e testare nuove terapie.

Induzione e punteggio clinico dell'epatite cronica-recidivante encefalomielite autoimmune sperimentale

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