Name: Completa dei costi e monitoraggio di laboratorio efficace di HIV / AIDS: un modello di ruolo africano (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-31T17:00:00.000+00:00
Duration: 23 min 56 s
Description: Scopri la citometria a flusso per il monitoraggio dell'HIV in Sudafrica. Questo metodo integra saggi CD4, CD45 e carica virale per migliorare l'efficienza diagnostica in contesti con risorse limitate e supportare la terapia antiretrovirale.

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Un ringraziamento particolare a causa del National Health Laboratory Service (NHL), della Repubblica del Sud Africa per l&#39;organizzazione nazionale dei servizi connessi flusso di diagnostica HIV (http: \ \ www.nhls.ac.za e http://www.plgcd4 . netto). Gli studi presenti sono stati condotti presso il Dipartimento di Ematologia e Medicina Molecolare, Università di Witwatersrand (Johannesburg, Sud Africa, supportata da Capo Dipartimento, il professor Wendy Stevens). Gli autori non hanno ricevuto sovvenzioni per la pubblicazione da società commerciali o enti finanziatori. Le opinioni espresse sono quelle degli autori senza necessariamente riflettono il punto di vista delle Istituzioni dell&#39;Università di Witwatersrand o la NHL sudafricano.

<ol><li>UNAIDS Report on the global HIV/AIDS epidemic. , Available from:
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<li>Mugyenyi, P. DART Trial Team. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Routine+versus+clinically+driven+laboratory+monitoring+of+HIV+antiretroviral+therapy+in+Africa+%28DART%29%3A+a+randomized+non-inferiority+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Routine versus clinically driven laboratory monitoring of HIV antiretroviral therapy in Africa (DART): a randomized non-inferiority trial.</a> Lancet. 375, 123-131 (2009).</li>
<li>Donnell, D., Kiarie, J., Thomas, K., Baeten, J., Lingappa, J., Cohen, C., Celum, C. ART and risk of heterosexual HIV-1 transmission in HIV-1 serodiscordant African couples: A Multinational Prospective Study. 17th Conference on Retroviruses and Opportunistic Infections, , (2010).</li>
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<li>Petti, C. A., Polage, C. R., Quinn, T. C., Ronald, A. R., Sande, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+medicine+in+Africa%3A+a+barrier+to+effective+health+care%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Laboratory medicine in Africa: a barrier to effective health care.</a> Clin Infect Dis. 42, 377-382 (2006).</li>
<li>Brown, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+health%3A+Great+expectations%5BTitle%5D)+AND+%22BMJ%22%5BJournal%5D)">Global health: Great expectations.</a> BMJ. 334, 874-876 (2007).</li>
<li>Crisp, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Turning+the+World+Upside+Down%5BTitle%5D)+AND+%22Royal+Society+of+Medicine+Press%22%5BJournal%5D)">Turning the World Upside Down.</a> Royal Society of Medicine Press. , (2009).</li>
<li>Hecht, R., Bollinger, L., Stover, J., McGreevey, W., Muhib, F., Madavo, C. E., de Ferranti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+choices+in+financing+the+response+to+the+global+HIV%2FAIDS+pandemic%5BTitle%5D)+AND+%22Health+Aff%22%5BJournal%5D)">Critical choices in financing the response to the global HIV/AIDS pandemic.</a> Health Aff. 28, 1591-1605 (2009).</li>
<li>Lawrie, D., Coetzee, L. M., Glencross, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+continuous+quality+control+incorporating+sample-to+sample+assessment+of+optical+alignment%2C+fluorescence+sensitivity+and+volumetric+operation+fo+flow+cytometers%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">A model for continuous quality control incorporating sample-to sample assessment of optical alignment, fluorescence sensitivity and volumetric operation fo flow cytometers.</a> Cytometry B Clin Cytom. 78, 201-208 (2010).</li>
<li>Loken, M. R., Brosnan, J. M., Bach, B. A., Ault, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+optimal+lymphocyte+gates+for+immunophenotyping+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry%22%5BJournal%5D)">Establishing optimal lymphocyte gates for immunophenotyping by flow cytometry.</a> Cytometry. 11, 453-459 (1990).</li>
<li>Glencross, D., Scott, L. E., Jani, I. V., Barnett, D., Janossy, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD45-assisted+PanLeucogating+for+accurate%2C+cost-effective+dual-platform+CD4%2B+T-cell+enumeration%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry%22%5BJournal%5D)">CD45-assisted PanLeucogating for accurate, cost-effective dual-platform CD4+ T-cell enumeration.</a> Cytometry. 50, 69-77 (2002).</li>
<li>Glencross, D. K., Janossy, G., Coetzee, L. M., Lawrie, D., Aggett, H. M., Scott, L. E., Sanne, I., McIntyre, J. A., Stevens, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+affordable+PanLeucogated+CD4%2B+testing+with+proactive+internal+and+external+quality+assessment%3A+in+support+of+the+South+African+national+comprehensive+care%2C+treatment+and+management+programme+for+HIV+and+AIDS%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">Large-scale affordable PanLeucogated CD4+ testing with proactive internal and external quality assessment: in support of the South African national comprehensive care, treatment and management programme for HIV and AIDS.</a> Cytometry B Clin Cytom. 74, Suppl 1. S40-S51 (2008).</li>
<li>Dalgleish, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CD4+%28T4%29+antigen+is+an+essential+component+of+the+receptor+for+the+AIDS+retrovirus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The CD4 (T4) antigen is an essential component of the receptor for the AIDS retrovirus.</a> Nature. 312, 763-767 (1984).</li>
<li>Liu, Z., Cumberland, W. G., Hultin, L. E., Prince, H. E., Detels, R., Giorgi, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+CD38+antigen+expression+on+CD8%2B+T+cells+is+a+stronger+marker+for+the+risk+of+chronic+HIV+disease+progression+to+AIDS+and+death+in+the+Multicenter+AIDS+Cohort+Study+than+CD4%2B+cell+count%5BTitle%5D)+AND+%22J+Acquir+Immune+Defic+Syndr+Hum+Retrovirol%22%5BJournal%5D)">Elevated CD38 antigen expression on CD8+ T cells is a stronger marker for the risk of chronic HIV disease progression to AIDS and death in the Multicenter AIDS Cohort Study than CD4+ cell count.</a> J Acquir Immune Defic Syndr Hum Retrovirol. 16, 83-92 (1997).</li>
<li>Glencross, D. K., Janossy, G., Coetzee, L. M., Lawrie, D., Scott, L. E., Sanne, I., McIntyre, J. A., Stevens, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD8%2FCD38+activation+yields+important+clinical+information+of+effective+antiretroviral+therapy%3A+findings+from+the+first+year+of+the+CIPRA-SA+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">CD8/CD38 activation yields important clinical information of effective antiretroviral therapy: findings from the first year of the CIPRA-SA cohort.</a> Cytometry B Clin Cytom. 74, Suppl 1. S131-S140 (2008).</li>
<li>Coetzee, L. M., Tay, S. S., Lawrie, D., Janossy, G., Glencross, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+research+tool+to+routine+test%3A+CD38+monitoring+in+HIV+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">From research tool to routine test: CD38 monitoring in HIV patients.</a> Cytometry B Clin Cytom. 76, 375-384 (2009).</li>
<li>Larsen, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fragile+environments+of+inexpensive+CD4%2B+T-cell+enumeration+in+the+least+developed+countries%3A+strategies+for+accessible+support%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">The fragile environments of inexpensive CD4+ T-cell enumeration in the least developed countries: strategies for accessible support.</a> Cytometry B Clin Cytom. 74, Suppl 1. S107-S116 (2008).</li>
<li>Glencross, D. K., Coetzee, L. M., Lawrie, D., Sanne, I., McIntyre, J. A., Janossy, G., Stevens, W. Longitudinal monitoring of CD38 activation can obviate costly viral load testing in 60% of patients on ART. 11th IUSTI World Congress, , (2009).</li>
<li>Bergeron, M., Lustyik, G., Phaneuf, S., Ding, T., Nicholson, J. K., Janossy, G., Shapiro, H., Barnett, D., Mandy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stability+of+currently+used+cytometers+facilitates+the+identification+of+pipetting+errors+and+their+volumetric+operation%3A+%22time%22+can+tell+all%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">Stability of currently used cytometers facilitates the identification of pipetting errors and their volumetric operation: "time" can tell all.</a> Cytometry B Clin Cytom. 52, 37-39 (2003).</li>
<li>Coulter, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCoulter%2C+B+%22Flow+Cytometer+Alignment+Verification+Package+insert+of+Flow-CheckTM+Fluorospheres.+Volume+PN+4276179-LA%22">Flow Cytometer Alignment Verification Package insert of Flow-CheckTM Fluorospheres. Volume PN 4276179-LA</a>. , Beckman Coulter USA. Galway. (2008).</li>
<li>Coulter, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCoulter%2C+B+%22Flow-SetTM+Fluorospheres+%28Flow+Cytometer+Standardization+Fluorospheres%29.+Package+insert+of+Flow-SetTM+Fluorospheres.+Volume+PN+6607007%22">Flow-SetTM Fluorospheres (Flow Cytometer Standardization Fluorospheres). Package insert of Flow-SetTM Fluorospheres. Volume PN 6607007</a>. , Beckman Coulter USA. Galway. (2007).</li>
<li>Coulter, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCoulter%2C+B+%22Immuno-TrolTM+Cells.+Package+insert+of+Immuno-TrolTM+Cells.+Volume+PN+6607077%22">Immuno-TrolTM Cells. Package insert of Immuno-TrolTM Cells. Volume PN 6607077</a>. , Beckman Coulter USA. Galway. (2007).</li>
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<li>Storie, I., Sawle, A., Goodfellow, K., Whitby, L., Granger, V., Reilly, J. T., Barnett, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+rate+calibration%3A+a+new+approach+for+performing+absolute+cell+counts%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">Flow rate calibration: a new approach for performing absolute cell counts.</a> Cytometry B Clin Cytom. 55, 1-7 (2003).</li>
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</ol>

I diritti di brevetto internazionale per il metodo di CD4 qui descritte sono detenute dalla NHL Sud Africa e attualmente in licenza a BCI, Miami, Fl, USA.

Negli ultimi anni i programmi di carità-driven e sovvenzioni assegnate hanno contribuito alla creazione di alcune pratiche eccellenti in aree cliniche delle risorse limitate del globo con alto carico HIV. I programmi di ART hanno avuto successo nel ridurre la mortalità e sono ora in fase di avvio a più alto CD4 2,3. Ci sono già indicazioni che queste nuove misure si riduce la diffusione dell&#39;infezione da HIV 4,5, nonostante la mancanza di un vaccino contro l&#39;HIV-specifica. Nel nostro video abbiamo documento che, quando il monitoraggio di pazienti in ART, queste tecniche possono essere più mirata e sempre più conveniente rispetto a quella osservata nella pratica di routine nella zona occidentale di laboratori (Lista 1). Tale guida africana approccio potrebbe essere essenziale per sostenere il potenziamento dei servizi di laboratorio in un momento in cui l&#39;infezione da HIV, trattati con ART, sta diventando una malattia cronica. Tale monitoraggio di ART richiede preciso conteggio CD4 e viral-load della relativa tecnologia, un compito più impegnativo per eseguire semplicemente una conta CD4 per l&#39;immissione dei pazienti in gruppi arbitrari per assistere una decisione di iniziare ART 16. Con l&#39;aiuto di questi diagnostica, cioè utilizzando il CD8/CD38 test, è possibile ridurre la VL-relativi costi di monitoraggio in&gt; 60% dei pazienti trattati con ART 16,19. E &#39;anche importante sottolineare che si tratta della CD8/CD38 test 16,17, e non il conteggio dei CD4 37, che rischia di raccogliere i primi segni di rimbalzi VL e / o la mancanza di compliance del paziente a prendere il farmaco. Un elemento essenziale di un coordinamento efficiente servizio centrale è la disponibilità di una grande rete nazionale o regionale, supportata da esperti e consulenti accademici che hanno familiarità con gli aspetti tecnici e medici del funzionamento. Questo è dimostrato dalle attività della rete del Sud Africa e la NHL CD4-PLG.net programmi di formazione 33, 36 che di incoraggiamento, l&#39;istruzione e la valutazione della qualità per i centri più piccoli e queste possono anche includere &#39;point-of-care&#39; servizi. È importante sottolineare che le operazioni di laboratori centrali e point-of-care sono complementari. Mentre il primo ha il doppio ruolo di providing una soluzione economica su larga scala il funzionamento del servizio così come formazione di base / avanzato per la periferica laboratori 33,38, il secondo contribuisce a controllare la diffusione dell&#39;arte attraverso l&#39;assunzione di pazienti HIV + che sono eleggibili per ARTE da una base più ampia, comprese le cliniche rurali. Qui una certa cautela è necessaria perché il punto-of-care diagnostica può essere molto più costoso e non garantisce automaticamente la precisione 38. E &#39;pertanto opportuno mantenere il sistema a due livelli e per facilitare il coordinamento tra i due livelli, senza consentire sia il braccio a diminuire. In conclusione, nel campo del monitoraggio diagnostico della gestione clinica delle malattie infettive una necessaria riduzione dei costi può essere raggiunta dai servizi che utilizzano apt meno costoso e meglio coordinata la tecnologia moderna con una qualità notevolmente migliorata 13,39. Ben organizzata nazionali (e regionali) le disposizioni di servizio diagnostico dovrebbe essere meglio supportato 6-8, evitando uno scenario in cui praticamente tutte le sovvenzioni è sprecato sui metodi costosi e / o imputati, non appena questi vengono importati da paesi ricchi senza un accurato pre- preventiva controllo costruttivo. Allo stesso modo, un design più flessibile di studi clinici terapeutici con il pieno coinvolgimento dei medici locali e il personale sanitario dovrebbe portare alla riduzione dei inutilmente frequenti e / o troppo ambiziosi test di laboratorio 3. Questa politica avrebbe dato più possibilità di una più piena utilizzazione dei risultati accurati disponibili diagnostici in una valutazione coordinata clinica / laboratorio dei pazienti trattati con ART. Queste diagnostica intelligente potrebbe anche essere introdotto per l&#39;paesi poveri di risorse 8 nel campo della tubercolosi e leucemie utilizzando una piattaforma esistente citometria a flusso familiare 40.

completa dei costi e monitoraggio di laboratorio efficace di hiv / aids: un modello di ruolo africano

Comprehensive &amp; Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model

Vi presentiamo il video di assistere la terapia antiretrovirale (ART) da un servizio di laboratorio apt - rappresenta un sud-africano modello economico per analisi su larga scala diagnostica. In paesi a basso reddito ART poco costoso sono trasformato le prospettive per la sopravvivenza dei pazienti HIV sieropositivi ma non ci sono dubbi sul fatto che vi sia una necessità per il monitoraggio di laboratorio di Arte e quale costo - in situazioni in cui la qualità complessiva dei servizi patologia può ancora essere molto basso. La risposta appropriata è quella di istituire servizi economicamente sana, con un migliore coordinamento e più rigorosa valutazione della qualità interna di quella osservata nei paesi occidentali. Questo video, fotografato nel luogo nei Servizi Laboratorio Nazionale di Salute (NHL-SA) presso l&#39;Università di Witwatersrand, Johannesburg, Sud Africa, fornisce un tale sistema coordinato ampliando l&#39;originale a 2 colori CD4-CD45 strategia PanLeucoGating (PLG). Così i sei moduli di presentazione video rivelano la semplicità di un 4-colori saggio di citometria di flusso di combinare le prove ematologiche, immunologiche e virologia legati in un unico tubo. Questi moduli video sono: (i) la messa a punto di strumenti, (ii) le preparazioni del campione, (iii) verifica i conteggi assoluti e di monitoraggio della qualità di ciascun campione da tallone-count-rate, (iv) la heamatological CD45 test per globuli bianchi conta e differenziali, (v) il numero di CD4, e (vi) l&#39;attivazione di cellule T CD8 + CD38 misurata da visualizzare, un parametro di carica virale correlati. Il potenziale di risparmi sono notevoli. Questo accordo è un primo esempio per la possibilità di effettuare&gt; 800-1000 test al giorno con un controllo di qualità più severe di quella applicata nei laboratori occidentali, e anche con un trasferimento di tecnologia ad altri laboratori all&#39;interno di una NHL-SA rete. Consulenti esperti, responsabili di laboratorio e responsabili delle politiche che portano il dovere di prendere decisioni circa l&#39;introduzione di moderne tecnologie mediche spesso non sono in grado di vedere gli ultimi dettagli tecnici, effettuato nei laboratori regionale di grandi dimensioni con carichi enormi di carico di lavoro. Quindi questo video mostra i dettagli di questi nuovi sviluppi.

Terapia antiretrovirale per il trattamento di HIV / AIDS è monitorato in Sud Africa su larga scala. Citometria a flusso è combinato per ematologia (CD45), immunologia (CD4) e virali a carico collegato CD38 test. Registrato al NHL-SA laboratori, Johannesburg, questi metodi moderni sono costo-efficaci con accresciuto controllo locale di qualità interno, che servono come modelli per le risorse limitate diagnostica.

Completa dei costi e monitoraggio di laboratorio efficace di HIV / AIDS: un modello di ruolo africano

Presentiamo il video relativo al supporto alla terapia antiretrovirale (ART) tramite un servizio di laboratorio idoneo, che rappresenta un modello sudafricano per l'economicità...

L'anticorpo monoclonale utilizzato in questi saggi è indicato come CD4. Questo è il reagente fondamentale per visualizzare i linfociti T. Serve per misurare il numero di linfociti positivi per CD4 nel sangue, che vengono progressivamente distrutti dall'HIV.Pertanto, il numero di cellule CD4 è correlato al grado di immunodeficienza del paziente. Un altro reagente, CD45, viene utilizzato per contare tutti i globuli bianchi, il che rappresenta anche un saggio di routine utile. Un test aggiuntivo per i cosiddetti marcatori di attivazione riduce il costo degli assay del carico virale, che può essere molto elevato.Questi studi sono stati condotti presso la Whit Waters Rand University di Johannesburg, in Sudafrica, sotto la guida della Professoressa Deborah Glen Cross e del Professore Wendy Stevens. L'obiettivo di questo filmato è duplice. Nella prima parte, verrà mostrato come un laboratorio ben attrezzato esegue un'analisi relativa a CD4, CD45 e carica virale.Questo è suddiviso in sei moduli. Questi passaggi tecnici vengono poi implementati in 70 laboratori in tutta l'Africa del Sud. Nella seconda parte, viene discussa la relazione tra un grande laboratorio centrale che esegue migliaia di test ogni giorno e i laboratori più periferici, che si trovano vicino al punto di cura dei pazienti.La discussione si concentra su come facilitare il supporto per il trattamento di un numero maggiore di pazienti infetti da HIV con farmaci antiretrovirali. Mi chiamo Neil Ney. Lavoro, sono un sec.Sono un tecnologo della citometria a flusso. Lavoro presso l'Ospedale Generale di Johannesburg, in Sudafrica. Questo è il ciclo di flusso.In questo caso, utilizziamo la citometria a flusso. Beckman ha installato lo scarico. Fondamentalmente, ciò che accade è che la libreria funziona in sincronia con lo smaltimento dei rifiuti.Noi eseguiamo somme che facciamo quotidianamente, come il conteggio cellulare e i controlli dello strumento di flusso. Ci sono attività che svolgiamo settimanalmente, come l'archiviazione dei risultati. E alcune attività che svolgiamo mensilmente, come la manutenzione.Al termine del ciclo di pulizia, inizializziamo la macchina. Premiamo il pulsante di avvio. Eseguiamo due strisce per il terreno, due tubi della lama oppure si possono eseguire due tubi principali e due tubi con acqua distillata.Dopo aver completato tutte le operazioni di pulizia, eseguiamo innanzitutto il controllo del fondo per verificare l'allineamento del laser e monitorare la tensione, in modo da assicurarsi che la tensione rimanga costante. Se si esegue il controllo del fondo al mattino e questo fallisce, è necessario riprovare. Se il problema persiste, dobbiamo chiamare il personale principale di emissioni FA affinché venga a controllare l'apparecchiatura.poiché potrebbe esserci un problema con l'allineamento del laser o con le tensioni. Eseguiamo prove immunitarie, quella normale e quella ad alta intensità ogni mattina. Possono essere eseguite almeno durante un turno di otto ore.Ora stiamo eseguendo l'immunocho ad alta intensità. Verificherò se i nostri conteggi cellulari rientrano nei range previsti. Mi chiamo Denise Dory.Sono il responsabile del laboratorio della struttura ospedaliera di Johannesburg. Ricopro anche un ruolo a livello nazionale in questo ambito. Sono stato coinvolto nell'istituzione di procedure di assicurazione della qualità per garantire l'accuratezza e l'affidabilità dei conteggi di CD4, non solo nel nostro laboratorio, ma a livello nazionale in Sudafrica.La preparazione dei campioni di CD4 è molto semplice. Utilizziamo due anticorpi monoclonali di colori diversi, CD4 e CD45. Questi normalmente sono già pre-mescolati in un unico flacone scuro che contiene entrambi gli anticorpi.Per iniziare, prepareremmo 10 microlitri dell'anticorpo CD45 CD4 sul fondo di una provetta pulita. Successivamente, il passaggio successivo consisterebbe nell'aggiungere il sangue. Per questo metodo stiamo utilizzando cento microlitri di sangue.Deve essere preparato con precisione. Successivamente, sangue e anticorpo verrebbero mescolati insieme. L'ultima fase di questa preparazione prevederebbe quindi l'aggiunta del reagente eising.Il, e come potete vedere, una volta aggiunto il reagente LY, il sangue cambia da una soluzione opaca a una soluzione emolizzata attraverso la quale è effettivamente possibile vedere attraverso il tubo. Si tratta di un metodo molto semplice, che può essere eseguito manualmente, ma se si devono analizzare grandi volumi di campioni, come accade nella maggior parte dei laboratori, si utilizzerebbe un sistema automatizzato come questo, che prepara le provette al posto vostro. Tuttavia, la preparazione non deve necessariamente avvenire tramite un sistema automatizzato se si utilizza il conteggio dei globuli rossi, poiché i globuli rossi, che aggiungiamo, ci indicheranno se qualcuno ha preparato correttamente il campione.L'ultima fase prima di posizionare questo campione su un analizzatore consiste nell'aggiungere cento microlitri delle perle contenute in un tubo come questo. Il campione sarà quindi pronto per essere caricato sul citometro a flusso. Mi chiamo Sit MoFA e sono l'ufficiale di controllo qualità di questo laboratorio di citometria a flusso e adoro la citometria a flusso.Abbiamo macchine molto sofisticate qui, che sono le EPICS Excels e sono molto stabili. In effetti, aggiungiamo i nostri dati, che ci indicano anche la stabilità degli strumenti. Dunque, come monitoriamo il tasso di conteggio del flusso?Il tasso di conteggio basso riguarda interamente il team. Più di recente abbiamo avviato la preparazione automatizzata dei nostri strumenti e dei nostri campioni, ma il monitoraggio del tasso di conteggio in flusso rimane il controllo di qualità rilevante. Il nostro conteggio in flusso mostrerà questa linea retta, che indica quanto sia perfetto il tasso di conteggio in flusso, ma ciò nonostante permangono delle differenze.Ci sono ancora alcuni valori anomali, quindi questi valori anomali possono essere causati da un errore di pipettaggio; tuttavia, se escludiamo la possibilità di un errore di pipettaggio, possiamo verificare se lo strumento funziona correttamente e quindi chiamare gli ingegneri perché vengano a ripararlo, in modo che possa proseguire con il supporto. Questo è Zo ly di Beckman Ter. È il nostro tecnico.Vengo in qualunque momento ci sia un problema e, sì, vengo anche ogni sei mesi per effettuare la manutenzione, poiché i nostri campioni vengono analizzati attraverso gli strumenti. In qualità di responsabile del controllo qualità, il mio compito è controllare sempre questo schermo, che monitora il nostro tasso di flusso. Quindi, immediatamente, noto un valore anomalo.Sono in grado di vedere che c'è un valore anomalo. In realtà ci sono cinque strumenti in funzione al momento, poiché il nostro carico di lavoro è estremamente elevato e questi due qui mostrano semplicemente che non si tratta dei campioni acquisiti, ma delle analisi che eseguiamo alla fine di ogni carousel; tuttavia, osserviamo comunque alcuni valori anomali.Ad esempio, questo su questo strumento, che è Epic Excel quattro. Questo dovrà sicuramente essere riparato immediatamente prima che i risultati vengano inviati dall'intero carosello e, dopo il ripristino, dovrà essere eseguito immediatamente prima della finalizzazione. Per riassumere, abbiamo stabilito che le nostre macchine stanno funzionando in modo ottimale.Abbiamo verificato la riproducibilità del conteggio delle perline per assicurare che i conteggi di CD4, che seguiranno, siano accurati. Abbiamo controllato che i laser siano correttamente allineati sui nostri strumenti e abbiamo verificato l'accuratezza dei conteggi eseguendo due livelli di controlli. Questo campione, senza contenuto, di CD4 e CD45, e devo spiegarvi perché CD45 è così importante nella nostra analisi.CD 45 è un marcatore cellulare che identifica tutti i globuli bianchi in un campione. Questo è importante per noi in questo contesto perché ci permette di confrontare il conteggio dei globuli bianchi ottenuto mediante l'uso di CD 45 con il conteggio dei globuli bianchi proveniente da un analizzatore di emocromo completo. Se osservate questi esempi qui, si tratta di una stampa di un emocromo completo proveniente da un analizzatore Beckman Coter LH 750 e possiamo vedere che abbiamo un conteggio di globuli bianchi di 7,1 sul citofluorimetro utilizzando CD 45, con cui coloriamo tutti i globuli bianchi.Abbiamo un conteggio di cellule per peso di CD molto simile, pari a 7.175. Accetteremmo un valore con una differenza nel peso dei coni cellulari inferiore al 5%. Un altro vantaggio aggiuntivo dell'inclusione di CD45 è la colorazione differenziale di CD45 sui globuli bianchi. Nel citofluorimetro, possiamo utilizzare tre parametri: scatter, scatter in avanti e CD45.Se osserviamo questo istogramma qui, i linfociti sono chiaramente definiti. Tendono ad essere le cellule più intensamente colorate con CD45 e presentano la minore complessità, sono cioè le cellule più semplici e quelle con la maggiore espressione di CD45. Il successivo gruppo cellulare è costituito dai monociti.I nostri monociti esprimono leggermente meno CD45, ma sono più complessi dei linfociti. Successivamente, il successivo gruppo principale di cellule, che in un campione normale sarebbe il gruppo più numeroso, è costituito dalle nostre cellule granulocitiche. Queste popolazioni sono le cellule del sangue più comuni osservate nel sangue periferico.Il vantaggio dell'utilizzo della colorazione CD45 su un citometro a flusso è che possiamo eseguire un conteggio CD4, un conteggio assoluto di globuli bianchi e un conteggio differenziale automatizzato sul citometro a flusso. La colorazione CD45 ci permette di effettuare conteggi differenziali per periodi di tempo più lunghi.È possibile eseguirle fino a 48 ore. Se utilizziamo l'espressione di CD45. I conteggi differenziali effettuati con questo metodo sono meno oggettivi rispetto ad altri metodi.Ad esempio, lo standard aureo per effettuare un conteggio differenziale manuale ci permette di identificare popolazioni leucemiche e costituisce inoltre la base per il cd pan citometrico, mostrato qui sullo schermo. Finora, il vantaggio dell'espressione del CD45 sui globuli bianchi non è stato realmente sfruttato appieno nei laboratori di ematologia. Disponiamo di una varietà di diversi analizzatori dell'emocromo completo che utilizzano tecniche differenti per ottenere i conteggi differenziali delle cellule bianche.Utilizzare il CD45 su un campione. Il citometro rappresenterebbe un metodo eccellente per standardizzare i coni differenziali tra diversi analizzatori ematologici, poiché fornirebbe un unico metodo di riferimento a cui tutti gli altri analizzatori ematologici potrebbero essere confrontati. Salve, mi chiamo Dott.ssa Linda Sier.Sono attivamente coinvolto nella ricerca sull'HIV che comprende sia test CD quattro che CD otto. I linfociti T possono essere suddivisi in cellule positive per CD quattro e cellule positive per CD otto, e le cellule positive per CD quattro vengono utilizzate per monitorare l'HIV nei pazienti in trattamento. Il problema, tuttavia, relativo al CD quattro è che non viene espresso esclusivamente sui linfociti, ma anche su altre cellule che esprimono CD quattro.Nel protocollo PLG, esaminiamo tre aspetti diversi per discriminare efficacemente tra i monociti e i linfociti. In primo luogo, utilizziamo la complessità o granulosità, dove si può osservare che, osservando la complessità, è possibile separare i linfociti dai monociti a tale scopo. Utilizziamo inoltre il marcatore CD45C, grazie al quale è possibile distinguere la popolazione di linfociti da quella di monociti.L'espressione di CD4 è intensa sui linfociti e intermedia sui monociti, utilizzata insieme alla complessità. È piuttosto semplice distinguere tra i linfociti CD4 intensi e i monociti CD4 deboli, e vi mostrerò un esempio di un campione di paziente normale in cui si possono osservare i linfociti e i monociti; questo paziente aveva un conteggio di CD4 superiore a 700. Se osserviamo un paziente con un conteggio di CD4 pari a 53, si può notare che, nonostante il basso valore, la discriminazione tra linfociti positivi e monociti positivi per CD4 rimane comunque molto chiara.Utilizzando il metodo PLG, siamo in grado di effettuare un elevato numero di analisi al giorno. Nel nostro laboratorio, attualmente elaboriamo circa mille campioni al giorno, pari a 5.000 campioni alla settimana. Due settimane di lavoro corrispondono approssimativamente all'attività svolta in un intero anno.In un ospedale di Londra in Sudafrica, abbiamo 70 laboratori NNRS e, nell'arco di un anno, questi laboratori eseguono circa 1,98 milioni di test CD4 all'anno. Ciao, sono Kni. Sono attualmente in pausa tè, ma una volta finito ti parlerò di CD38 e carica virale.Quindi, in pratica, sappiamo tutti che i citofluorimetri possono contare le cellule, ma possono anche quantificare le molecole di superficie presenti sulla membrana cellulare. Questo viene effettuato misurando l'intensità della fluorescenza. In condizioni standard, precedentemente menzionate, utilizziamo CD4 e 45, noto come metodo PLG.Stiamo andando un passo oltre combinando due test in un unico tubo. Il metodo del test CD4 45 PLG. Combineremo questo con un test a due colori per un marcatore di attivazione o un altro parametro associato al carico virale, ovvero CD38.Gli americani utilizzano l'immunofluorescenza a quattro colori. Usano CD4, CD45, CD8 e CD3. Noi usiamo CD4, CD45, CD8 e sostituiamo il CD3 utilizzando CD38.Prima di tutto, è importante notare che è necessario determinare un valore basale di CD38 per ogni paziente, poiché questo valore basale funge da controllo specifico per quel determinato paziente. E questo si verifica quando la carica virale è elevata, giusto? Sì. È proprio in questa fase che un paziente presenta una carica virale alta e un conteggio basso di CD4. Questa situazione si verifica all'inizio, prima della terapia.Dobbiamo inoltre prestare attenzione ai picchi di CD38, in cui si osserva un aumento del CD38. Questo è evidente in questo paziente, in cui si verifica un brusco aumento del MFI del CD38 e, osservando attentamente, si nota anche un corrispondente aumento della carica virale. È possibile che il paziente in quel momento non stesse assumendo i farmaci?A questo punto, sì, è possibile che il paziente abbia interrotto la terapia perché i livelli tornano alla normalità. Allora perché siamo così soddisfatti di questo test? Innanzitutto, perché combina due metodi di test in un unico tubo.In secondo luogo, è economicamente vantaggioso poiché fornisce un conteggio delle cellule bianche CD45, un conteggio CD4 e un marcatore di attivazione. Viene utilizzato sugli strumenti attualmente presenti nei nostri laboratori, pertanto non sarà necessario introdurre nuovi strumenti e il personale potrà essere facilmente addestrato su come effettuare il gating e come preparare questi campioni. Anche i costi del carico virale diminuiranno, poiché attualmente ogni volta che un paziente si presenta per un conteggio CD4 vengono eseguiti anche test del carico virale.Ma se monitoriamo il CD38 e notiamo un aumento dell'MFI 38, allora possiamo inviare i campioni del paziente per il test della carica virale. Sul rendimento del nostro programma nazionale sudafricano, ovvero il programma NHLE CD4 che utilizza PLG, dove sosteniamo molto i nostri laboratori. Disponiamo quindi di una struttura centrale, che coordina tutte le procedure standardizzate e tutti i controlli di qualità decentralizzati ai laboratori periferici.Fanno funzionare il loro sistema e inviano i risultati tramite EQA attraverso le nostre strutture africane, che risalgono, grazie al supporto del laboratorio centrale. Inoltre, con iniziative di formazione aggiuntive e in corso e servizi di supporto. E il nostro programma, come gruppo, ottiene risultati significativamente migliori rispetto ad altri programmi nazionali, in modo significativo, con una precisione superiore del 50%, non solo all'interno dei laboratori, ma anche tra laboratori.Questo significa che, ad esempio, un CD4 proveniente da un laboratorio di Berley sarà molto simile a un CD4 proveniente da un laboratorio di Durban, utilizzando la nostra superficie standardizzata. Quindi si prende questo concetto e lo si decentralizza portandolo presso il punto di cura. In secondo luogo, ciò implica che il punto di cura sarà facilitato attraverso un'unica unità di coordinamento.Era evidente che questi sforzi, dimostrati da queste persone dedite, rappresentassero avanzamenti concettuali, non semplicemente un citometro a flusso di fascia bassa, in grado di produrre tali risultati. Gli stessi concetti possono essere utilizzati con altri strumenti come macchine Ton Dickinson o macchine Partec o prodotte da Accur o da qualsiasi altra azienda. Di fatto, sviluppi recenti provenienti da altri paesi, ad esempio l'India, stanno mostrando che dovrebbero avviare la propria industria di citometria a flusso, che utilizzerebbe la stessa tecnologia.L'unico aspetto importante qui era la coordinazione eccezionale. Ora, coloro che pensano che i conteggi di CD4 siano gli unici obiettivi si sbagliano, perché in questo caso avevamo a che fare con emogrammi, numeri assoluti, formule leucocitarie. Stavamo lavorando con il CD4 e anche con marcatori di attivazione, il che rende i saggi più economici rispetto ai saggi del carico virale comparabili.Tuttavia, non si tratta di una competizione tra questi marcatori di attivazione e i carichi virali, bensì di un tipo di approccio complementare che consente di risparmiare sui saggi del carico virale. Si tratta di indagini scientificamente validate, e i clinici dovrebbero ricorrere a questi test quando sussistono dubbi sull'aderenza del paziente alla terapia, sull'efficacia del farmaco o sulla necessità di modificare il trattamento a causa dell'insorgenza di resistenza nel paziente. La conclusione fondamentale è rappresentata dall'attuale elevata qualità del controllo di qualità, che ci conduce all'ultimo punto: è molto preferibile disporre di eccellenti laboratori centrali, in grado di fornire citometria a flusso e garanzia di qualità per i laboratori periferici, i quali potranno così risultare efficaci nel coinvolgere un numero maggiore di persone nei regimi di terapia antiretrovirale.Pertanto, qui stiamo assistendo a nuovi sviluppi provenienti dal suolo africano. Grazie mille per la vostra attenzione.

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