Name: Utilizzando Imaging Bioluminescent per Indagare il sinergismo tra Streptococcus pneumoniae E Influenza A virus in topi neonati (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-14T11:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 47 s
Description: Scopri l'imaging bioluminescente in vivo per studiare il sinergismo tra Streptococcus pneumoniae e virus Influenza A in topi neonati. Questo metodo consente di monitorare la disseminazione batterica nel tempo nello stesso animale.

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Gli autori desiderano ringraziare la consulenza tecnica da David Briles (University of Alabama a Birmingham, Alabama, USA). Vorremmo ringraziare Yvette Chen, il Responsabile del Benessere Animale della Università di Melbourne, e David Taylor, il Facility Manager degli animali, per utili suggerimenti e discussioni sul benessere degli animali e l&#39;etica e lo sviluppo di criteri di intervento e punti finali umana per gli esperimenti descritti in questo manoscritto. Odilia Wijburg e Patrick lettura sono supportati da un RD NHMRC Wright Fellowship, Kirsty corto è sostenuto da una borsa post-laurea Supporto GSK e una borsa di studio Puzey.

<ol><li>Brundage, J. F., Shanks, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deaths+from+bacterial+pneumonia+during+1918-19+influenza+pandemic%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Deaths from bacterial pneumonia during 1918-19 influenza pandemic.</a> Emerg Infect Dis. 14, 1193-1199 (2008).</li>
<li>Petersdorf, R. G., Fusco, J. J., Harter, D. H., Albrink, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+infections+complicating+Asian+influenza%5BTitle%5D)+AND+%22AMA+Arch+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">Pulmonary infections complicating Asian influenza.</a> AMA Arch Intern Med. 103, 262-272 (1959).</li>
<li>Diavatopoulos, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+A+virus+facilitates+Streptococcus+pneumoniae+transmission+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Faseb+J%22%5BJournal%5D)">Influenza A virus facilitates Streptococcus pneumoniae transmission and disease.</a> Faseb J. , (2010).</li>
<li>Orihuela, C. J., Gao, G., Francis, K. P., Yu, J., Tuomanen, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+contributions+of+pneumococcal+virulence+factors+to+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific contributions of pneumococcal virulence factors to pathogenesis.</a> J Infect Dis. 190, 1661-1669 (2004).</li>
<li>Kadurugamuwa, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+monitoring+of+pneumococcal+meningitis+and+evaluation+of+treatment+efficacy+in+an+experimental+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Noninvasive monitoring of pneumococcal meningitis and evaluation of treatment efficacy in an experimental mouse model.</a> Mol Imaging. 4, 137-142 (2005).</li>
<li>Smith, M. W., Schmidt, J. E., Rehg, J. E., Orihuela, C. J., McCullers, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+pro-+and+anti-inflammatory+molecules+in+a+mouse+model+of+pneumococcal+pneumonia+after+influenza%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Induction of pro- and anti-inflammatory molecules in a mouse model of pneumococcal pneumonia after influenza.</a> Comp Med. 57, 82-89 (2007).</li>
<li>Owen, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal-associated+lymphoid+tissue+and+olfactory+epithelium+as+portals+of+entry+for+Burkholderia+pseudomallei+in+murine+melioidosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Nasal-associated lymphoid tissue and olfactory epithelium as portals of entry for Burkholderia pseudomallei in murine melioidosis.</a> J Infect Dis. 199, 1761-1770 (2009).</li>
<li>Luker, G. D., Leib, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luciferase+real-time+bioluminescence+imaging+for+the+study+of+viral+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Luciferase real-time bioluminescence imaging for the study of viral pathogenesis.</a> Methods Mol Biol. 292, 285-296 (2005).</li>
<li>Hutchens, M., Luker, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+bioluminescence+imaging+to+the+study+of+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Applications of bioluminescence imaging to the study of infectious diseases.</a> Cell Microbiol. 9, 2315-2322 (2007).</li>
</ol>

La produzione di questo video-articolo è stato sponsorizzato da Caliper Life Sciences.

Imaging in vivo con la macchina IVIS è una metodologia unica che permette la visualizzazione in tempo reale della patogenesi microbica 4, 6-9. Qui si mostra l&#39;applicazione di questa tecnologia per comprendere la sinergia tra S. pneumoniae e virus dell&#39;influenza nei topi neonati. A causa della natura non invasiva di questa tecnica, siamo stati in grado di monitorare la progressione della infezione in ogni mouse individuo nel tempo. Questo ci ha permesso di documentare la cinetica di trasmissione da pneumococco tra i co-ospitato topi neonati 3. La natura non invasiva di questa tecnica consente ai ricercatori di utilizzare un minor numero di animali per sperimentare e, quindi, ridurre l&#39;utilizzo di animali. E &#39;anche possibile utilizzare la macchina IVIS di visualizzare la diffusione dell&#39;infezione ad altri siti precedentemente sconosciuti di infezione nel corpo, così come siti non facilmente campionato da dissezione (come l&#39;orecchio medio). Prima di iniziare gli esperimenti di imaging, abbiamo confermato che i livelli di colonizzazione della bioluminescente EF3030 ceppo erano paragonabili ai livelli di colonizzazione del ceppo EF3030 enumerando numero di organismi vitali in omogenati di tessuto. Inoltre, per prima cosa ha confermato che l&#39;infezione da virus dell&#39;influenza portato a un aumento del carico di bioluminescenti EF3030 nel nasofaringe del colonizzato animali come dimostrato con il ceppo EF3030 (risultati non mostrati). Mentre la tecnologia IVIS è facile da usare e genera riproducibile e di facile comprensione dei dati, la sperimentazione deve essere attentamente progettato in modo che la sensibilità e l&#39;utilità della tecnologia è massimizzato. Per esempio, la sensibilità della telecamera IVIS è influenzata dalla profondità e l&#39;opacità del tessuto 8, che nella nostra esperienza, aumenta il limite di rilevamento per i segnali bioluminescenti proveniente dai polmoni. Inoltre, la pelliccia scura e la pelle pigmentata riduce la trasmissione della luce di ben 10 volte (rispetto ai topi glabri) 8. Mentre lo sviluppo di questo metodo, abbiamo ottimizzato questo protocollo per l&#39;uso con 5-14 giorno di vita C57BL / 6 topi e hanno dimostrato che dopo IVIS può essere utilizzato per rilevare la colonizzazione di 20 giorni C57BL vecchio / 6 topi con bioluminescenti S. pneumoniae EF3030. Tuttavia, il rilevamento del segnale può essere aumentato quando questi esperimenti vengono eseguiti in topi nudi o BALB / c. Ciononostante, la fotocamera IVIS rappresenta un nuovo approccio per il monitoraggio, la caratterizzazione e, infine, capire il vivo nello sviluppo della malattia pneumococcica dopo l&#39;infezione da virus influenzale.

utilizzando imaging bioluminescent per indagare il sinergismo tra streptococcus pneumoniae e influenza a virus in topi neonati

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Durante la pandemia del virus influenzale del 1918, che uccise circa 50 milioni di persone in tutto il mondo, la maggior parte dei decessi non sono il risultato di infezione con virus dell&#39;influenza da solo. Invece, la maggior parte le persone sono accusate di aver ceduto a una infezione batterica secondaria, prevalentemente causata dal batterio Streptococcus pneumoniae (pneumococco). Il rapporto sinergico tra le infezioni causate da virus influenzale e il pneumococco è stato successivamente osservato durante la pandemia del 1957 asiatici virus dell&#39;influenza, così come durante le epidemie stagionali di virus (recensione a 1, 2). Qui, descriviamo un protocollo utilizzato per studiare il meccanismo (s) che possono essere coinvolti in un aumento della morbilità a causa di un virus influenzale concorrenti e S. pneumoniae infezione. Abbiamo sviluppato un modello murino di neonato in modo affidabile e riproducibile dimostrare gli effetti di infezione da virus influenzale di topi colonizzati con S. pneumoniae. Usando questo protocollo, abbiamo fornito il primo quadro della cinetica di trasmissione pneumococco tra co-ospitato, topo neonato utilizzando imaging in vivo 3.

Un concomitante infezione da virus dell&#39;influenza A è uno dei fattori implicati nella induzione di malattie invasive da pneumococco durante asintomatica<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Trasporto. Qui si descrive un metodo misto infezione usando topi neonati per indagare la sinergia tra questi due patogeni respiratori.

Utilizzando Imaging Bioluminescent per Indagare il sinergismo tra Streptococcus pneumoniae E Influenza A virus in topi neonati

Durante la pandemia di virus influenzale del 1918, che causò la morte di circa 50 milioni di persone in tutto il mondo, la maggior parte dei decessi non fu il risultato di...

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Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Metodi per l'imaging bioluminescenza delle infezioni batteriche in animali viventi sono descritti. Gli agenti patogeni sono stati modificati per esprimere la luciferasi che permette l'imaging ottico intero corpo di infezioni negli animali vivi. I modelli animali possono essere infettati da agenti patogeni che esprimono luciferasi e il decorso della malattia conseguente visualizzati in tempo reale da parte di imaging bioluminescenza.

Utilizzando luciferasi di infezioni batteriche immagine in topi

Fonte: de Vries, C. R., et al., Un modello di inoculazione ritardata dell'infezione cronica da ferita da Pseudomonas aeruginosa . J. Vis. Esp. (2020).Questo video mostra una tecnica di imaging bioluminescente per monitorare la progressione dell'infezione batterica in un modello murino vivo. I batteri patogeni ingegnerizzati con il sistema di segnalazione luxABCDE emettono luce nel sito di infezione, permettendo la visualizzazione dei batteri metabolicamente attivi. Attraverso l'imaging del topo...

Imaging bioluminescente delle infezioni batteriche nei topi

Fonte: Seman, B. G., et al. Un modello di imaging neonatale della sepsi batterica Gram-negativa. J. Vis. Esp. (2020)Il video mostra un modello neonatale di topo per studiare l'infezione sistemica utilizzando batteri bioluminescenti incapsulati. I cuccioli neonatali vengono iniettati con sospensioni batteriche ad alto o basso dosaggio e restituiti alla madre per le cure postnatali. I batteri incapsulati sfuggono alla rilevazione immunitaria precoce, si diffondono sistemicamente e vengono...

Modellazione dell'infezione nei topi neonatali utilizzando batteri bioluminescenti incapsulati

Fonte: Valentine, M. E., et al., Generazione di mutanti di delezione genica in-frame in Pseudomonas aeruginosa e test per l'attenuazione della virulenza in un semplice modello murino di infezione. J. Vis. Esp. (2020)Questo video dimostra l'uso di un approccio di imaging basato sulla bioluminescenza per monitorare l'infezione batterica in un modello topino vivo. L'imaging bioluminescente e a raggi X sequenziale consente la visualizzazione in tempo reale e la localizzazione anatomica...

Imaging in tempo reale dell'infezione batterica in un modello murino utilizzando la bioluminescenza

Fonte: Lenhard, A. et al. Un modello murino per la transizione di Streptococcus pneumoniae da colonizzatore a patogeno dopo la co-infezione virale riproduce la malattia aggravata dall'età. J. Vis. Esp. (2022)Questo video mostra un modello di co-infezione topina in cui il virus influenzale innesca la transizione di Streptococcus pneumoniae da colonizzatore a patogeno. Descrive le fasi coinvolte nella colonizzazione batterica, nelle infezioni virali e nella progressione della malattia.

Un modello murino per studiare la transizione patogena di Streptococcus pneumoniae dopo la co-infezione virale

Questo video dimostra un metodo per tracciare le infezioni virali in modelli murini utilizzando una luciferasi ricombinante e un virus dell'influenza A che esprime la proteina ricombinante e la proteina fluorescente. Questo metodo consente studi sia in vivo che ex vivo, consentendo ai ricercatori di ottenere informazioni sulle dinamiche virali e sugli effetti degli interventi.

Un virus dell'influenza reporter fluorescente luciferasi per tracciare le infezioni virali

Streptococcus pneumoniae è il patogeno principale che causa una grave polmonite acquisita in comunità e responsabile per oltre 2 milioni di decessi in tutto il mondo. L'impatto dei fattori batterici implicati in palestra o virulenza può essere monitorato in tempo reale in un mouse polmonite o batteriemia modello acuta con batteri bioluminescenti.

A seguito in tempo reale l&#39;impatto dei fattori di virulenza pneumococco in un acuto mouse Polmonite modello tramite batteri bioluminescenti

In questo studio, presentiamo un protocollo per eseguire due-fotone videomicroscopia imaging e cella analisi di interazione nella mucosa trachea murino dopo infezione con virus dell'influenza. Questo protocollo sarà rilevante per i ricercatori che studiano la dinamica delle cellule immuni durante le infezioni respiratorie.

La formazione immagine interazione cellula nella Mucosa trachea durante l'infezione da Virus influenzale usando la microscopia Intravital due-fotone

I virus dell'influenza A (IAV) sono patogeni respiratori contagiosi che causano epidemie annuali e pandemie occasionali. Qui, descriviamo un protocollo per monitorare le infezioni virali in vivo utilizzando una nuova luciferasi ricombinante e la fluorescenza-espressione bireporter IAV (BIRFLU). Questo approccio fornisce ai ricercatori un eccellente strumento per studiare IAV in vivo.

Un virus fluorescente di Luciferasi-fluorescente Reporter per l'imaging dal vivo e la quantificazione dell'infezione virale

L'infezione di topi neonatale con bioluminescente E. coli O1:K1:H7 provoca un'infezione settica con significativa infiammazione polmonare e patologia polmonare. Qui descriviamo le procedure per modellare e studiare ulteriormente la sepsi neonatale utilizzando l'imaging intravitale longitudinale in parallelo con l'enumerazione dei fardelli batterici sistemici, la profilazione infiammatoria e l'istopatologia polmonare.

Un modello di imaging neonatale di sepsi batterica gram-negativa

Questo articolo descrive un nuovo modello murino per la transizione dello pneumococco da colonizzatore asintomatico a patogeno che causa malattie durante l'infezione virale. Questo modello può essere facilmente adattato per studiare le interazioni polimicrobiche e ospite-patogeno durante le diverse fasi della progressione della malattia e tra vari ospiti.

Un modello murino per la transizione di Streptococcus pneumoniae da colonizzatore a patogeno in seguito a co-infezione virale ricapitola la malattia esacerbata dall'età

Scopri l'imaging bioluminescente in vivo per studiare il sinergismo tra Streptococcus pneumoniae e virus Influenza A in topi neonati. Questo metodo consente di monitorare la disseminazione batterica nel tempo nello stesso animale.

Utilizzando Imaging Bioluminescent per Indagare il sinergismo tra Streptococcus pneumoniae E Influenza A virus in topi neonati

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