Name: In Utero iniezione intraventricolare e Elettroporazione di embrioni di ratto E16 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 19 min 4 s
Description: Impara l'iniezione intraventricolare in utero e l'elettroporazione in embrioni di ratto E16 per manipolazioni genetiche. Questa tecnica avanzata facilita studi di neuroscienza dello sviluppo in vivo.

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in utero iniezione intraventricolare e elettroporazione di embrioni di ratto e16

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E16 Rat Embryos

In utero in vivo iniezione ed elettroporazione della neocorteccia ratto embrionale fornisce un potente strumento per la manipolazione di singoli progenitori che ricoprono le pareti del ventricolo laterale. Questa tecnica è ormai ampiamente utilizzata per studiare i processi coinvolti nella corticogenesis da sovra-espressione o abbattere i geni e osservando gli effetti sulla proliferazione cellulare, la migrazione e differenziazione. Rispetto alle tradizionali strategie di eliminazione diretta, in utero elettroporazione fornisce un mezzo rapido per manipolare una popolazione di cellule durante una specifica finestra temporale. In questo protocollo video, descritta la metodologia sperimentale per la preparazione di topi per la chirurgia, esponendo le corna uterine attraverso laporatomy, iniettando il DNA nei ventricoli laterali dell&#39;embrione in via di sviluppo electroporating DNA nel progenitori rivestimento della parete laterale, e la cura per gli animali post- l&#39;intervento chirurgico. Il nostro laboratorio utilizza questo protocollo per interventi chirurgici sulla E15-E21 ratti, tuttavia è più comunemente eseguita a E16, come mostrato in questo video.

In Utero iniezione intraventricolare e Elettroporazione di embrioni di ratto E16

L'iniezione in vivo in utero e l'elettroporazione della neocorteccia embrionale di ratto forniscono uno strumento potente per la manipolazione di singoli progenitori...

Ciao, mi chiamo William Ti. Sono del laboratorio Arnold Creek Stein. Oggi, io e gli altri vi mostreremo l'iniezione intrauterina di embrioni di ratto E16. Ciao, mi chiamo Laura Elias.Oggi vi mostrerò come preparare le pipette per microiniezione e come caricarle per le iniezioni intraventricolari e l'elettroporazione che eseguiremo oggi. Vi mostrerò inoltre come effettuare le iniezioni intraventricolari e l'elettroporazione in embrioni di ratto E16. Le iniezioni e l'elettroporazione in utero sono particolarmente utili nel ratto perché questo sistema non consente facilmente manipolazioni genetiche.Ok, quindi esiste una serie di strumenti chirurgici che utilizziamo per questa procedura. Utilizziamo un freer, un paio di pinze adiniche, un paio con superficie zigrinata e un altro paio con un piccolo dente all'estremità. Utilizziamo anche un paio di emostatici.Questo è un paio di forbici, e poi utilizziamo questi due sparachiodi. Questo è quello più grande, che usiamo per i ratti. Questo è quello più piccolo che usiamo per i topi, che impiega chiodi di misura sette, e questo utilizza chiodi di misura nove ed è semplicemente a molla.Alcune delle cose che utilizziamo qui per assistere dura

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In Utero iniezione intraventricolare e Elettroporazione di E15 embrioni di topo

Elettroporazione in utero è un metodo prezioso per trasfezione delle cellule progenitrici neuronali in vivo. A seconda del posizionamento degli elettrodi e la timepoint sviluppo di elettroporazione, alcuni sottoinsiemi di cellule corticali può essere mirati. Cellule bersaglio può quindi essere analizzato in vivo o in vitro per gli effetti di alterazione genetica.

In utero Elettroporazione seguita da primaria Cultura neuronale per studiare la funzione dei geni in sottoinsieme di neuroni corticali

Elettroporazione in utero permette per la consegna rapida in un gene-spazialmente e temporalmente modo controllato nello sviluppo del sistema nervoso centrale (SNC). Qui descriviamo altamente adattabile a protocollo di elettroporazione utero che possono essere usati per fornire costruisce espressione in più domini embrionale del SNC, tra cui il diencefalo telencefalo, e della retina.

Gene consegna efficiente in più territori SNC utilizzo In Utero Elettroporazione

In Elettroporazione vitro del labbro inferiore Rombico di embrioni di topo Midgestation

Controllare l'espansione delle cellule staminali somatiche è un freno notevole loro studio e l'uso in terapia. Qui si descrive un sistema per controllare temporalmente neurale espansione delle cellule staminali durante lo sviluppo e adulta, che può essere utilizzato per aumentare il numero di neuroni generati nel cervello di topo.

Ampliamento della embrionali e cellule staminali neurali adulte per<em&gt; In Utero</em&gt; Elettroporazione o Viral iniezione stereotassica

Fonte: Koza, P., et al. Generazione di Ratti Transgenici mediante un Approccio con Vettore Lentivirale. J. Vis. Exp. (2020)Questo video illustra la somministrazione assistita da microiniezione di vettori lentivirali in embrioni di ratto fecondati, al fine di ottenere un'integrazione stabile del transgene per la generazione di ratti transgenici.

Trasduzione di embrioni di ratto fecondati basata su vettori lentivirali

Questo video dimostra la consegna di DNA plasmidico nelle cellule neuronali cerebellari di embrioni murini utilizzando l'elettroporazione in utero. Questo metodo è utile per comprendere la funzione in vivo dei geni nel normale sviluppo cerebrale e i cambiamenti nell'espressione genica delle cellule neuronali durante la progressione tumorale.

Consegna genica basata sull'elettroporazione in utero: una tecnica per iniettare DNA plasmidico nelle cellule cerebellari embrionali di embrioni murini

I geni possono essere manipolati durante lo sviluppo della corteccia o nell'ippocampo di ratto mediante elettroporazione in utero (IUE) a E16, per permettere modifiche rapide e mirate in termini di connettività neuronale per gli studi successivi di comportamento o neuropatologia negli animali adulti. Postnatale imaging in vivo per il controllo di successo IUE è eseguita da bioluminescenza di attivare luciferasi co-trasfettate.

Generazione di topi transgenici per uso topico<em&gt; In utero</em&gt; Elettroporazione e<em&gt; In vivo</em&gt; Screening bioluminescenza

Questo protocollo descrive in dettaglio come trasfettare in modo specifico diverse regioni del sistema nervoso centrale C57BL/6 tramite elettroporazione in utero. Incluso in questo protocollo ci sono istruzioni dettagliate per le trasfezioni delle regioni che si sviluppano nella corteccia, nell'ippocampo, nel talamo, nell'ipotalamo, nel nucleo del setto laterale e nello striato.

Cortex, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, laterale del setto Nucleus- e Striatum specifici<em&gt; In Utero</em&gt; Elettroporazione in C57BL / 6 del mouse

Eterotopia nodulare periventricolare (PNH) è la forma più comune di malformazione dello sviluppo corticale (MCD) nell'età adulta, ma la base genetica rimane sconosciuta nei casi più sporadici. Recentemente abbiamo sviluppato una strategia per identificare nuovi geni candidati per MCDs e confermare direttamente loro ruolo causativo in vivo.

Una nuova strategia che unisce Array-CGH, sequenziamento dell'intero-esoma e nell'Utero elettroporazione in roditori per identificare geni causativi per le malformazioni del cervello

Impara l'iniezione intraventricolare in utero e l'elettroporazione in embrioni di ratto E16 per manipolazioni genetiche. Questa tecnica avanzata facilita studi di neuroscienza dello sviluppo in vivo.

In Utero iniezione intraventricolare e Elettroporazione di embrioni di ratto E16

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