Name: Induzione e Monitoraggio di Active ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) in ratti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 26 s
Description: Impara a indurre e monitorare l'ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) nei ratti Lewis utilizzando l'antigene KLH in adiuvante di Freund. Questo metodo permette di misurare la risposta infiammatoria attraverso il gonfiore.

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1. Preparazione della emulsione <ol><li> L&#39;emulsione è una miscela 1:1 di antigene (DTH può essere indotto a vari antigeni: ovoalbumina, tossoide tetanico, buco della serratura patelle hemocyanin ....) in soluzione acquosa aggiunto per completare adiuvante di Freund. E &#39;molto importante aggiungere l&#39;antigene per l&#39;adiuvante e non viceversa! </li><li> Ci sono un sacco di rifiuti al momento e iniettando una emulsione, in modo sempre preparare 1,5 o 2 volte più di quello che vi serve. </li><li> Sciogliere l&#39;antigene in soluzione fisiologica per preparare un 2 mg / ml soluzione. Non filtrare, come non si vuole perdere la aggregati! </li><li> Mettete adiuvante completo di Freund H37Ra (Difco, catalogo # 231131) in una provetta e miscelare ad alta velocità. Aggiungere la goccia a goccia, mentre l&#39;antigene vortex. Quando tutti l&#39;antigene è aggiunto, vortex per 5 minuti. La miscela dovrebbe diventare bianco. </li><li> Mettere l&#39;emulsione in una siringa di vetro e collegarlo ad un altro siringa in vetro con un ponte 18G (catalogo Fisher # 14-825-17L). Invia l&#39;emulsione da una siringa all&#39;altra fino a quando diventa difficile (5-10 minuti). E &#39;meglio utilizzare due siringhe da 5 ml. Se più di 5 ml di emulsione sono necessari, usano vari gruppi di 5 siringhe ml. </li><li> L&#39;emulsione può essere memorizzato in siringhe a 4 ° C per 3 settimane. </li></ol> 2. Immunizzazione dei topi <ol><li> Mescolare l&#39;emulsione nelle siringhe per qualche minuto e il trasferimento alla siringa usata per l&#39;iniezione. Iniettare 200 ml per via sottocutanea in 1-2 siti alla base della coda con aghi 23G e una Luer-Lok tip siringa da 3 ml. </li></ol> 3. Sfida con l&#39;antigene nella parte posteriore <ol><li> Sette giorni dopo l&#39;immunizzazione, barba 2 spot sul dorso dei topi e intradermica iniettare 20 ml di una mg / ml soluzione 1 antigene in un punto e soluzione salina (o antigene irrilevante) nel punto altri. Non filtrare la soluzione antigene, come si può perdere aggregati che aumentare la reazione infiammatoria. </li><li> I ratti devono essere anesthesized per evitare movimenti. Iniettare la soluzione intradermica con 27G ½ aghi e siringhe da 1 ml. Cambia aghi tra le iniezioni. Nota: la sfida può essere fatto nel padiglione delle orecchie al posto della schiena per misure più precise. Guarda il video a <a href="/index/Details.stp?ID=325">https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=325</a> </li></ol> 4. Misura della DTH <ol><li> Il sito di iniezione inizierà a girare rosso e gonfiore in segno di infiammazione. Misurare il diametro della zona infiammata con un righello o, meglio ancora, una pinza. Il gonfiore massimo dovrebbe avvenire tra il 24 e 72 ore. </li></ol>

<ol>
	<li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+monitoring+of+adoptive+delayed-type+hypersensitivity+in+rats.">Induction and monitoring of adoptive delayed-type hypersensitivity in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).</li></ol>

Gli autori sono co-fondatori e consulenti per Airmid Inc.

Per una misurazione più precisa della reazione DTH si consiglia sfida i topi con l&#39;antigene nel padiglione dell&#39;orecchio. La reazione può essere misurata come differenza all&#39;orecchio gonfiore tra le pertinenti antigene-sfidato l&#39;orecchio e l&#39;orecchio sfidato sia con soluzione salina da solo o con l&#39;antigene irrilevante. Una dimostrazione della sfida a livello dell&#39;orecchio mostrato in 1.

Utilizzare i reagenti sterili soluzioni e siringhe. Le siringhe di vetro e ponti 18G possono essere sterilizzati in autoclave. Leggi materiale scheda prima di maneggiare un reagente per la prima volta e indossare equipaggiamento protettivo.

induzione e monitoraggio di active ipersensibilità di tipo ritardato (dth) in ratti

Induction and Monitoring of Active Delayed Type Hypersensitivity (DTH) in Rats

Ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) è una reazione infiammatoria mediata dai linfociti memoria CCR7-T effettrici che si infiltrano nel sito di iniezione di un antigene contro il quale il sistema immunitario è stato innescato. La reazione infiammatoria è caratterizzata da arrossamento e gonfiore nel sito di uno stimolo antigenico. Si tratta di un modello pratico per determinare l&#39;efficacia in vivo di immunosoppressori. DTH cutanea può essere indotta in seguito a trasferimenti adottivo di antigene-specifica dei linfociti T o per l&#39;immunizzazione attiva con un antigene, e la successiva sfida intradermica con l&#39;antigene per indurre la reazione infiammatoria della pelle in una zona determinata. Risposte DTH può essere indotto a vari antigeni, per esempio ovalbumina, tubercolina, tossoide tetanico, o buco della serratura patelle hemocyanin (KLH). Qui mostriamo come per indurre una reazione attiva DTH nei ratti Lewis. Per prima cosa preparare un acqua in emulsione di olio KLH, antigene di nostro interesse, in adiuvante completo di Freund e questa emulsione iniettare per via sottocutanea nei ratti. Questo sarà il primo sistema immunitario di sviluppare cellule T di memoria diretta a KLH. Sette giorni dopo ci sarà una sfida per i ratti intradermica sul retro con KLH da un lato e con ovalbumina, un antigene irrilevante, sul lato opposto. La reazione infiammatoria sarà visibile 16-72 ore più tardi e la zona rossa e gonfia sarà misurata come indice di gravità DTH.

Ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) è una reazione infiammatoria mediata dai linfociti memoria CCR7-T effettrici. Qui mostriamo come per indurre DTH attivo nei ratti Lewis e monitorare la risposta infiammatoria.

Induzione e Monitoraggio di Active ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) in ratti

L'ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) è una reazione infiammatoria mediata da linfociti T di memoria effettori CCR7+ che infiltrano il sito di iniezione di...

Ciao, sono Christine Beaton. Lavoro nel laboratorio di George Chandy presso il Dipartimento di Fisiologia e Biofisica dell'UCI. Oggi vi mostrerò come indurre una risposta DTH attiva nei ratti.Per questo preparerò un'emulsione di KLH, che è il mio antigene, in adiuvante France. Poi inietterò questa emulsione alla base della coda di ratti Lewis. Questo indurrà l'immunizzazione dei ratti contro il KLH. E dopo una settimana sfiderò i ratti con KLH e misurerò la reazione di ipersensibilità ritardata (DTH) mediante la misurazione del gonfiore.Questo è il sito di sfida e lo stiamo utilizzando in laboratorio per osservare l'effetto degli inibitori dei canali PO sulle reazioni infiammatorie come la DTH. Ecco l'adjuvante trans incompleto che userò per preparare l'emulsione. Potrei anche utilizzare l'adjuvante trans completo.Ecco del quarzo di KLH, che è il mio antigene oggi, e ho una soluzione qui a due milligrammi per ml. In PBS, userò questa siringa da cinque ml per prelevare l'adjuvante incompleto e trasferirlo in un tubo da 15 ml. Poi metterò un tubo sul vortex e, mentre agito, aggiungerò l'antigene goccia a goccia all'adjuvante.Poi agiterò al vortex per altri cinque minuti. Una volta te

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Ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) è una reazione infiammatoria mediata da CCR7-memoria T effettrici (TEM) linfociti. Qui mostriamo come attivare antigene-specifiche cellule TEM, inducono DTH adottivi nei ratti Lewis e monitorare la risposta infiammatoria.

Induzione e Monitoraggio adottivi di ipersensibilità ritardata nei ratti

Qui mostriamo un metodo per indurre la registrazione e il progresso di una ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) reazione nell'orecchio ratto. Questa è seguita da una dimostrazione della preparazione di tessuto di ratto orecchio per l'imaging a due fotoni del effettrici / risposta delle cellule T memoria.

Imaging Effector cellule T di memoria nell&#39;orecchio dopo l&#39;induzione di DTH adottivi

Questo video mostra come per indurre ipofisite autoimmune in topi SJL e come valutare la sua gravità per via istopatologica.

Induzione di ipofisite autoimmune sperimentale nei topi SJL

Descriviamo un test diagnostico prezioso che potrebbe potenzialmente essere utilizzato per decidere il ritiro di immunosoppressione dopo trapianto senza elevato rischio di rigetto del trapianto. Il test utilizza i principi di ipersensibilità di tipo ritardato e fornisce una valutazione accurata del donatore risposte immunitarie effettrici e normativi specifici montati dai destinatari.

Trans-vivo Delayed Type Ipersensibilità Assay per Antigen regolamento specifico

Reazioni allergiche, caratterizzate da attivazione dei mastociti e dei basofili, sono guidati dal cross-linking delle IgE e il rilascio di mediatori proinfiammatori. Una valutazione quantitativa delle risposte allergiche può essere ottenuto utilizzando Evans colorante blu per monitorare i cambiamenti nella permeabilità vascolare dopo la sfida allergene.

Misurare Anafilassi locali nei topi

Qui vi presentiamo un nuovo metodo per misurare con precisione le differenze di temperatura del corpo in passivo anafilassi sistemica (PSA) e modelli di mouse allergia alimentare utilizzando un termometro a infrarossi. Questa procedura è stata duplicata con precisione nei precedenti risultati di PSA.

Misurazione della temperatura corpo del mouse utilizzando il termometro a infrarossi durante passiva anafilassi sistemica e la valutazione di allergia alimentare

Descriviamo un modello di epatite traslazionale di immunizzazione in vivo nei topi BALB / c che può essere utilizzato per studiare la patogenesi dell'epatite autoimmune indotta da farmaci, comprese le differenze di sesso osservate in questa malattia. Descriveremo come questo modello dimostra analisi riproducibili utilizzando tecniche sperimentali in vivo e in vitro.

Induzione dell'epatite autoimmune indotta da farmaci in topi BALB / c per lo studio dei suoi meccanismi patogenetici

L'ipersensibilità da contatto (CHS) è un modello sperimentale murino di dermatite allergica da contatto (ACD). ChS si basa sulla sensibilizzazione con hapten reattivo dipingendo la pelle rasata del torace e dell'addome, con una successiva sfida della pelle dell'orecchio con un hapten diluito, causando una reazione di gonfiore che viene valutata in vari modi.

Ipersensibilità da contatto come modello murino di dermatite allergica da contatto

Lo studio dimostra il ruolo della pelle nella modulazione delle risposte immunitarie nei topi attraverso l'immunizzazione epicutanea (EC). L'immunizzazione EC con un antigene proteico può sopprimere le risposte immunitarie nell'ipersensibilità da contatto o invertire la soppressione indotta dalla pelle se combinata con modelli molecolari associati a patogeni. L'immunizzazione EC si dimostra promettente come approccio efficace e senza ago all'immunoterapia.

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Gli sforzi per isolare la subunità catalitica della telomerasi, TERT, in quantità sufficienti per studi strutturali, sono stati accolti con scarso successo da oltre un decennio. Qui, vi presentiamo i metodi per l'isolamento dei ricombinanti Tribolium castaneum TERT...

Ricostituzione in vitro di Active T. castaneum telomerasi

Impara a indurre e monitorare l'ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) nei ratti Lewis utilizzando l'antigene KLH in adiuvante di Freund. Questo metodo permette di misurare la risposta infiammatoria attraverso il gonfiore.

Induzione e Monitoraggio di Active ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) in ratti

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