Somministrazione di farmaci oftalmici per la neuromodulazione non invasiva in un modello murino

Inizia con un topo geneticamente modificato i cui neuroni ippocampali esprimono recettori progettati attivati esclusivamente da farmaci sintetiche o DREADDs.

Questi recettori ingegnerizzati rispondono selettivamente ai farmaci di prova sintetici pur rimanendo insensibili alle molecole endogene.

Strofina regolarmente il mouse per ridurre al minimo lo stress e acclimatarlo alla procedura.

Quindi, pesare il mouse per calcolare il dosaggio corretto del farmaco.

Durante la manipolazione del mouse, utilizzare una luce rossa fioca per evitare interruzioni circadiane.

Posiziona delicatamente il mouse per immobilizzarlo.

Usando una pipetta, prendi la soluzione del farmaco in esame e forma una gocciolina sulla punta. Ora, avvicinati all'occhio

e rilascia la gocciolina sulla sua superficie.

Rimetti il topo nella sua gabbia di casa. Ripetere più volte l'erogazione del farmaco.

Il farmaco viene assorbito attraverso l'occhio ed entra nel cervello.

Quindi attraversa la barriera emato-encefalica e raggiunge la regione dell'ippocampo. Successivamente, si lega ai recettori DREADD e attiva i neuroni, consentendo una neuromodulazione precisa e non invasiva.

Per la somministrazione ripetitiva di CNO, a partire da quattro settimane dopo l'iniezione, acclimatare gli animali alla manipolazione strofinando ogni topo tre minuti al giorno per tre o quattro giorni prima della somministrazione del collirio. Quando i topi si sono abituati alla manipolazione, pesare ciascun topo per determinare la quantità appropriata di CNO da somministrare per ottenere un milligrammo di CNO per chilogrammo di concentrazione di peso corporeo.

Due ore prima dello spegnimento delle luci durante la fase di inattività, caricare da uno a tre microlitri della soluzione CNO preparata in una micropipetta P10 e immobilizzare il topo mediante scruffing. Espellere lentamente la soluzione fino a formare una gocciolina stabile sulla punta della pipetta e avvicinare con cautela la gocciolina alla cornea fino a quando la soluzione non viene erogata senza toccare la punta della pipetta con l'occhio del topo. Quindi riporta il topo nella sua gabbia di casa prima di applicare il collirio CNO sull'occhio dell'animale successivo.

Nei casi in cui è necessario erogare CNO durante la fase attiva del topo, assicurarsi della presenza di una luce rossa fioca per una corretta manipolazione degli animali e l'erogazione di CNO.