Espressione genica tramite elettroporazione di una singola cellula in colture di fette di ippocampo di topo

Inizia con una fetta di ippocampo da un cervello di topo coltivato su un inserto di coltura in un piatto.

Tagliare l'inserto contenente la fetta e fissarlo al microscopio in una camera di elettroporazione.

Perfondere la camera con un tampone contenente un bloccante dei canali del sodio voltaggio-dipendente per inibire la sovraeccitazione e prevenire la tossicità cellulare.

Posizionare una pipetta contenente plasmidi con il gene di interesse vicino alla fetta.

Mantenere una pressione positiva per evitare l'intasamento della pipetta mentre ci si avvicina a un neurone dell'ippocampo bersaglio fino a quando non si forma una fossetta sulla membrana.

Passare alla pressione negativa per creare una tenuta con la membrana.

Alternare pressione positiva e negativa per ridurre al minimo il danno cellulare.

Applicare un impulso di elettroporazione per permeabilizzare transitoriamente la membrana, facilitando l'ingresso del plasmide.

Estrarre la pipetta mantenendo una pressione positiva e ripetere l'elettroporazione per i neuroni bersaglio vicini.

Trasferire la fetta elettroporata in un inserto fresco e incubarla per consentire l'espressione del gene di interesse.

Per preparare le colture a fette per l'el