Imaging bioluminescente della progressione del tumore al seno in un modello murino femmina

Inizia con una femmina di topo iniettata con cellule tumorali al seno che esprimono luciferasi.

Le cellule tumorali proliferano nel sito di iniezione e si sviluppano in un tumore primario.

Posizionare il topo in una camera di imaging con un flusso di anestetico per anestetizzare il topo.

Quindi, iniettare la luciferina, un substrato per la luciferasi, nel topo anestetizzato.

La luciferina circola ed entra nelle cellule tumorali, reagendo con la luciferasi per emettere bioluminescenza.

Utilizzando il sistema di imaging, catturare il segnale di bioluminescenza dal mouse.

Nel tempo, il tumore progredisce nel sito primario e metastatizza ai polmoni.

Acquisisci l'immagine del mouse a intervalli regolari e definisci le regioni di interesse.

Sulla base delle intensità di bioluminescenza, costruire la cinetica di crescita del tumore per entrambi i siti.

Nel tempo, un aumento costante del segnale nel sito del tumore primario indica una continua proliferazione tumorale.

Tuttavia, un forte aumento della bioluminescenza polmonare in punti temporali successivi suggerisce metastasi delle cellule tumorali.

Per iniziare, mantenere la linea cellulare 4T1 nel Dulbecco's Modified Eagle Medium o DMEM integrato. Incubare le cellule a 37 gradi Celsius in un'atmosfera umidificata contenente il 5% di anidride carbonica.

Trasfettare la linea cellulare 4T1 con il gene Luc2 per esprimere la luciferasi, un enzima bioluminescente prodotto costitutivamente. Incubare le cellule per tenerle pronte per l'iniezione nel topo.

Cinque minuti dopo l'anestetizzazione e la preparazione di un topo femmina Balb-C, iniettare 2 volte 10 alla potenza cinque cellule 4T1 che esprimono luciferasi per via sottocutanea nel dorso sinistro utilizzando una siringa da insulina da 1 millilitro. Alloggiare l'animale per 4 settimane dopo l'iniezione.

Per l'imaging, posizionare il topo anestetizzato in posizione sdraiata dorsale all'interno dell'area designata dell'apparecchiatura di imaging bioluminescente. Iniettare nel topo per via intraperitoneale 100 microlitri di soluzione di D-luciferina a una concentrazione di 15 milligrammi per millilitro.

Per regolare i parametri di imaging, impostare il filtro di emissione aperto senza eccitazione, il binning su 8, F-Stop su 2 e il tipo di campo visivo su D. Acquisisci 20 immagini bioluminescenti nell'arco di 20 minuti per ciascun animale a ciascun punto finale di imaging, assicurandoti che le immagini rappresentino un'integrazione del segnale di 60 secondi.

Utilizzando il software dell'apparecchiatura, è possibile definire specifiche regioni di interesse per distinguere tra il tumore primario e i segnali di metastasi polmonare. Identificare i segnali bioluminescenti nel sito di iniezione e nella regione toracica in cui si verificano le metastasi. Calcola la progressione del tumore in base all'intensità del segnale bioluminescente.

Utilizzando le immagini raccolte settimanalmente, costruire un profilo cinetico di crescita per rappresentare le variazioni di intensità del segnale nel tempo sia nei siti del tumore primario che in quelli metastatici. Confronta le tendenze dell'intensità del segnale per analizzare la progressione del tumore e le metastasi.