Name: Organotipica Culture Slice ippocampale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-03T17:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Impara a coltivare fette ippocampali organotipiche preservando l'architettura neuronale per due settimane. Questo metodo consente di studiare la funzione ippocampale in vitro con elevata integrità tissutale.

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Questo lavoro è stato finanziato dal NINDS - NIH R01NS060756

1. Prima di avviare la preparazione di fettine di ippocampo. <ol><li> Preparare l&#39;affettatrice tessuto mettendo un pezzo di foglio di teflon e montare una nuova lama. </li><li> Pulire la coltura del tessuto (TC) cappuccio con il 70% di etanolo e impostare l&#39;interno microscopio da dissezione. Sterilizzare il cofano, microscopio, affettatrice tessuti e tutti gli strumenti di dissezione per 15 minuti con la luce UV. </li><li> Preparare sei piastre TC. Aggiungere 750 microlitri terreni di coltura slice (SCM) per bene e posto inserti in colture cellulari in ciascun pozzetto. Assicurarsi che le membrane sono completamente bagnato senza bolle sotto. Posizionare le piastre in incubatore a 35 ° C gasati con 5% CO 2 fino al momento dell&#39;uso. </li><li> Versare 50 ml basso Na + ACSF (dissezione soluzione) in un bicchiere da 100 ml e posizionarlo sul ghiaccio-sale mix. Bubble basso Na + ACSF con 5% di CO 2 / 95% O 2 fino ACSF cambia colore e forma un impasto impasto di soluzione congelata e liquidi (10-20 min). </li><li> Prendi un P5-P7 piccoli dei ratti. Fino a tre cuccioli possono essere utilizzati. </li></ol> 2. Dell&#39;ippocampo Fette Preparazione. <ol><li> Tagliare la testa dell&#39;animale con le forbici utilità taglienti. Tagliare la pelle ed esporre il cranio. Aprire il cranio, tagliando da un lato all&#39;altro lungo la linea interaurali e poi lungo la sutura sagittale con piccole forbici. Un taglio opzionale da un lato all&#39;altro nella parte anteriore può essere fatto per facilitare la rimozione delle ossa e l&#39;esposizione del cervello. Scoop fuori il cervello rapidamente con una spatola cucchiaio arrotondati micro e posizionarlo nel liquame di dissezione soluzione per raffreddare per circa 1 minuto. Versare circa 10 ml di soluzione ghiacciata dissezione su un piatto di 60 mm e trasferire il cervello dal bicchiere al piatto. Il cervello dovrebbe essere coperto con dissezione soluzione. </li><li> Sotto il microscopio dissezione: Posizionare il cervello e mantenerlo sulla linea mediana con il dissettore premuto fino in fondo del piatto 60 mm. Utilizzare lo strumento ippocampo dissezione per separare gli emisferi lasciando fuori il mesencefalo. Il dell&#39;ippocampo sono quindi esposti su ogni emisfero. Poi dolcemente scoop l&#39;ippocampo con l&#39;ippocampo dissezione strumento. Utilizzare l&#39;ago dissezione per isolare completamente l&#39;ippocampo e pulirlo il più possibile. </li><li> Utilizzando una punta tagliato di un filtro P1000 punta della pipetta, delicatamente aspirato l&#39;ippocampo e trasferirlo al foglio di Teflon per l&#39;affettatrice tessuto. Posizionare l&#39;ippocampo sul lato concavo. </li><li> Allineare la perpendicolare dell&#39;ippocampo alla lama di ottenere sezioni coronali e drenare l&#39;eccesso di liquido. </li><li> Tagliare il dell&#39;ippocampo ogni 400 micron. </li><li> Versare circa 10 ml freddo SCM in un piatto di 60 mm e il trasferimento a fette dell&#39;ippocampo dal affettatrice utilizzando un altro è stato tagliato P1000 filtro punta e freddo SCM. Evitare di fare bolle. </li><li> Con l&#39;aiuto di una spatola di iris e una spatola diritta separare delicatamente le fette le une dalle altre. </li><li> Separare le fette ben definito e non danneggiati da fette danneggiato. </li></ol> 3. Dell&#39;ippocampo Fette Cultura <ol><li> Portare a sei pozzetti con SCM e inserti colture cellulari dal termostato. Con l&#39;aiuto di un altro stato tagliato P1000 punta filtro, il trasferimento di singole sezioni sulla membrana. Mettere le fette 4-5 per membrana. Fare attenzione a non mettere le fette sia vicino al muro inserire o vicini gli uni agli altri. Quando necessario, utilizzare spatola iride a fette separate. Rimuovere l&#39;eccesso di media. Tocco fette il meno possibile una volta che sono sulla membrana. </li><li> Spostare la piastra posteriore per incubatrice e cultura a 35 ° C e 5% di CO 2. </li><li> Cambia SCM ogni 48 ore all&#39;interno della cappa di aspirazione TC del CSM con una pipetta Pasteur. Aggiungere 750 ml di fresca pre-riscaldato SCM per bene. Assicurarsi che non bolle si formano sotto la membrana. </li></ol> 4. Soluzioni <ol><li> Bassa Na + ACSF - Soluzione Dissezione di culture fetta Per deionizzata e sterile H 2 O aggiungere: <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Per 500 ml </td><td> Per 1000 ml </td><td> Concentrazione finale </td></tr><tr><td> CaCl 2 (1 M) </td><td> 0,5 ml </td><td> 1 ml </td><td> 1 mM </td></tr><tr><td> D-glucosio </td><td> 0,901 g </td><td> 1,802 g </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 0,149 g </td><td> 0,298 g </td><td> 4 mM </td></tr><tr><td> MgCl 2 (1 M) </td><td> 2,5 ml </td><td> 5 ml </td><td> 5 mM </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> 1,092 g </td><td> 2,184 g </td><td> 26 mm </td></tr><tr><td> Saccarosio </td><td> 40 g </td><td> 80 g </td><td> 234 mm </td></tr><tr><td> Soluzione di rosso fenolo 0,5% nel DPBS </td><td> 0,5 ml </td><td> 1 ml </td><td> 0,1% v / v </td></tr></tbody></table> Mix ~ 30 min Sterilize dal passaggio attraverso 0.22μm filtro Fai aliquote di 50 mL e conservare a 4 ° C non più di 2 mesi. </li><li> Fetta terreno di coltura (SCM) <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Per 500 ml </td><td> Per 1000 ml </td><td> Concentrazione finale </td></tr><tr><td> MEM di Eagle medium </td><td> 4,2 g </td><td> 8,4 g </td><td> 8,4 g / l </td></tr><tr><td> Calore siero di cavallo inattivato </td><td> 100 ml </td><td> 200 mL </td><td> 20% </td></tr><tr><td> L-Glutammina (200 mm) </td><td> 2,5 ml </td><td> 5 ml </td><td> 1 mM </td></tr><tr><td> CaCl 2 (1 M) </td><td> 0,5 ml </td><td> 1 ml </td><td> 1 mM </td></tr><tr><td> MgSO 4 (1 M) </td><td> 1 ml </td><td> 2 ml </td><td> 2 mM </td></tr><tr><td> Insulina (1 mg / mL), disciolto in HCl 0,01 N </td><td> 0,5 ml </td><td> 1 ml </td><td> 1 mg / l </td></tr><tr><td> Acido ascorbico, soluzione (25% w / v) </td><td> 0,024 ml </td><td> 0,048 ml </td><td> 0,00125% </td></tr><tr><td> D-glucosio </td><td> 1.16g </td><td> 2.32g </td><td> 13 mm </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> 0.22g </td><td> 0.44g </td><td> 5,2 mm </td></tr><tr><td> Hepes </td><td> 3.58g </td><td> 7.16g </td><td> 30 mM </td></tr></tbody></table> Mescolare fino a fondo sciolto e portare a temperatura ambiente. Regolare il pH a 7,27-7,28 con 1 N NaOH Misura osmolarità. Regolare a 320 mmol / kg con acqua deionizzata e sterilizzata H 2 O. Aspettatevi di aggiungere circa 25-40 ml. Controllare osmolarità di nuovo. *** PH possono cambiare leggermente durante la regolazione dell&#39;osmolarità, questo è ok, è più importante che l&#39;osmolarità è nella gamma corretta (317-323). Sterilizzare il passaggio attraverso filtro 0,22 micron. Fare 20 aliquote da ml e conservare per un massimo di 2-3 settimane a 4 ° C. Magazzino Gluatamine: preparare ad una concentrazione di 200 mm e conservare a -20 ° C in aliquote di 2,5 ml. L&#39;acido ascorbico magazzino: preparare ad una concentrazione del 25% (w / v) e conservati a -20 ° C in aliquote di 100 ul. </li></ol> 5. Rappresentante dei risultati: Fette dovrebbe apparire bianco sotto una portata dissezione senza macchie nere e ben definite e non danneggiato CA1, CA3 e giro dentato regioni. La contaminazione batterica è facilmente visibile lo spostamento punti neri nel medio o torbidità della SCM. Quando viene posto sotto il microscopio, la superficie della fetta dovrebbe essere pulita dopo 4 giorni di cultura con gli enti a cellule chiare e visibilmente. Se non corpi a cellule chiare sono visti e detriti molto ricopre la superficie dopo 4 giorni, quindi non è una fetta sano.

<ol><li>Martin, S. J., Grimwood, P. D., Morris, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+plasticity+and+memory%3A+an+evaluation+of+the+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Synaptic plasticity and memory: an evaluation of the hypothesis.</a> Annu Rev Neurosci. 23, 649-711 (2000).</li>
<li>Bliss, T. V., Collingridge, G. L., Morris, R. G. I. ntroduction <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+potentiation+and+structure+of+the+issue%5BTitle%5D)+AND+%22Philos+Trans+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Long-term potentiation and structure of the issue.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 358, 607-611 (2003).</li>
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<li>Malinow, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+of+green+fluorescent+protein+%28GFP%29+into+hippocampal+neurons+through+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Introduction of green fluorescent protein (GFP) into hippocampal neurons through viral infection.</a> Cold Spring Harb Protoc. , (2010).</li>
<li>Shi, S., Hayashi, Y., Esteban, J. A., Malinow, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subunit-specific+rules+governing+AMPA+receptor+trafficking+to+synapses+in+hippocampal+pyramidal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Subunit-specific rules governing AMPA receptor trafficking to synapses in hippocampal pyramidal neurons.</a> Cell. 105, 331-343 (2001).</li>
<li>Woods, G., Zito, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+gene+gun+bullets+and+biolistic+transfection+of+neurons+in+slice+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of gene gun bullets and biolistic transfection of neurons in slice culture.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
<li>Esteban, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKA+phosphorylation+of+AMPA+receptor+subunits+controls+synaptic+trafficking+underlying+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">PKA phosphorylation of AMPA receptor subunits controls synaptic trafficking underlying plasticity.</a> Nat Neurosci. 6, 136-143 (2003).</li>
<li>Mainen, Z. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+imaging+in+living+brain+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Two-photon imaging in living brain slices.</a> Methods. 18, 231-239 (1999).</li>
<li>Barria, A., Malinow, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subunit-specific+NMDA+receptor+trafficking+to+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Subunit-specific NMDA receptor trafficking to synapses.</a> Neuron. 35, 345-353 (2002).</li>
<li>Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> J Neurosci Methods. 37, 173-182 (1991).</li>
<li>Simoni, A. D. e, Griesinger, C. B., Edwards, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+rat+CA1+neurones+in+acute+versus+organotypic+slices%3A+role+of+experience+in+synaptic+morphology+and+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Development of rat CA1 neurones in acute versus organotypic slices: role of experience in synaptic morphology and activity.</a> J Physiol. 550, 135-147 (2003).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Questo metodo si basa sul primo metodo descritto da Stoppini et al. 11 e offre un modo rapido a fette cultura dell&#39;ippocampo. L&#39;aspetto più importante di questo protocollo è quello di mantenere fette sterile, quindi è fondamentale utilizzare appropriate tecniche sterili e per disinfettare correttamente e sterilizzare tutto il materiale a contatto con il tessuto. Diverse fonti sieri possono influenzare la qualità delle fette. Si consiglia di provare diversi lotti p...

<table><tbody><tr><td>Inserti per coltura cellulare</td><td>EMD Millipore</td><td>PICM03050</td><td></td></tr><tr><td>Piastre a 6 pozzetti</td><td>BD Biosciences</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Tagliatore di tessuti</td><td>Stoelting Co.</td><td>51425/51415</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>Olympus Corporation</td><td>SZX7-ILLD2-100</td><td></td></tr><tr><td>Strumento per dissezione dell'ippocampo</td><td>F.S.T.</td><td>10099-15</td><td></td></tr><tr><td>Forbici chirurgiche grandi. Perfection</td><td>F.S.T.</td><td>37500-00/37000-00 Destra/Sinistra</td><td></td></tr><tr><td>Spatola ad iris</td><td>F.S.T.</td><td>10093-13</td><td></td></tr><tr><td>Spatola dritta</td><td>F.S.T.</td><td>10094-13</td><td></td></tr><tr><td>Microspatola a cucchiaio arrotondata</td><td>VWR international</td><td>57949-039</td><td></td></tr><tr><td>Ago da dissezione a singolo taglio</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72946</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette da dissezione</td><td>Dumont</td><td>#2</td><td></td></tr><tr><td>Forbici da dissezione piccole</td><td>F.S.T.</td><td>14060-10</td><td></td></tr><tr><td>Mezzo MEM Eagle</td><td>Cellgro</td><td>50-019 PB</td><td></td></tr><tr><td>Serum equino inattivato per riscaldamento</td><td>Invitrogen</td><td>26050-88</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutammina (200 mM)</td><td>Invitrogen</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; (1 M)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3881</td><td></td></tr><tr><td>MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt; (1 M)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2773</td><td></td></tr><tr><td>Insulina (1 mg/ml), disciolta in HCl 0,01 N</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I0516</td><td></td></tr><tr><td>Acido ascorbico, soluzione (25%)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4544</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucosio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5767</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6014</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H7523</td><td></td></tr><tr><td>Saccarosio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5016</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di rosso fenolo 0,5% in DPBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0290</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; (1 M)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9272</td><td></td></tr></tbody></table>

organotipica culture slice ippocampale

Organotypic Hippocampal Slice Cultures

L&#39;ippocampo, un componente del sistema limbico, gioca un ruolo importante nella memoria a lungo termine e la navigazione spaziale 1. Neuroni dell&#39;ippocampo può modificare la forza delle loro connessioni, dopo brevi periodi di forte attivazione. Questo fenomeno, noto come potenziamento a lungo termine (LTP), può durare per ore o giorni ed è diventato il meccanismo miglior candidato per l&#39;apprendimento e la memoria 2. Inoltre, l&#39;anatomia ben definito e connettività dell&#39;ippocampo 3 ha fatto un sistema modello per lo studio classico trasmissione sinaptica e 4 plasticità sinaptica. Come la nostra comprensione della fisiologia delle sinapsi dell&#39;ippocampo crebbe e giocatori molecolare è stato identificato, la necessità di manipolare proteine ​​sinaptiche è diventato un imperativo. Organotipica culture dell&#39;ippocampo offrono la possibilità di manipolazione genetica facile e preciso l&#39;intervento farmacologico, ma mantenere l&#39;organizzazione sinaptica che è fondamentale per comprendere la funzione sinapsi in un contesto più naturalistico di routine cultura metodi dissociato neuroni. Qui vi presentiamo un metodo per la preparazione e la cultura fettine di ippocampo, che può essere facilmente adattato ad altre regioni del cervello. Questo metodo permette di raggiungere facilmente le fette di manipolazione genetica utilizzando approcci diversi, come infezioni virali o 5,6 biolistics 7. Inoltre, fette può essere facilmente recuperato per le analisi biochimiche 8, o trasferiti ad microscopi per l&#39;imaging 9 o esperimenti elettrofisiologici 10.

Descriviamo un metodo per preparare organotipica fettine di ippocampo che può essere facilmente adattato ad altre regioni del cervello. Sezioni di cervello sono previste sulle membrane porose e terreni di coltura è consentito costituiscono l&#39;interfaccia. Questo metodo consente di mantenere l&#39;architettura lordo dell&#39;ippocampo per un massimo di 2 settimane in cultura.

Organotipica Culture Slice ippocampale

L'ippocampo, un componente del sistema limbico, svolge ruoli importanti nella memoria a lungo termine e nella navigazione spaziale 1. I neuroni ippocampali possono modificare la ...

L'obiettivo generale di questa procedura è coltivare fette organotipiche dell'ippocampo. Questo viene raggiunto innanzitutto dissezionando l'ippocampo. Il secondo passaggio della procedura consiste nel tagliare l'ippocampo in fette.Il terzo passaggio della procedura consiste nel separare e ordinare le fette ippocampali. L'ultimo passaggio della procedura è coltivare le fette ippocampali. In definitiva, è possibile ottenere risultati che mostrano fette ippocampali organiche sane mediante visualizzazione al microscopio stereoscopico o al microscopio ottico.Ciao, mi chiamo Jimena Opitz e sono una ricercatrice nel laboratorio del dottor Andres bar presso l'Università di Washington a Seattle. Illustrerò il procedimento per la coltura di organotipi di ippocampo, LICs. In genere, le persone nuove a questo metodo incontrano difficoltà a causa della necessità di dissezionare e tagliare rapidamente gli ippocampi e di prevenire contaminazioni, soluzione di dissezione sterile e coltura di tessuti.Il mezzo può essere preparato fino a tre settimane in anticipo e conservato a quattro gradi Celsius come descritto nel protocollo scritto. Prima della preparazione di fette di ippocampo, è possibile p

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Il organotipica ippocampale Cultura Modello Slice per l&#39;esame di danno neuronale

Questo video mostra un metodo per preparare colture organotipiche di fette di ippocampo dal cervello di un cucciolo di ratto. Delinea le fasi coinvolte nella dissezione dell'ippocampo, nel taglio e nelle condizioni di coltura necessarie per promuovere la vitalità cellulare e la crescita nelle fette dell'ippocampo, generando infine colture di fette organotipiche.

Preparazione di colture organotipiche di fette dall'ippocampo di un cucciolo di ratto

Viene descritta una tecnica per studiare le cellule NG2 e gli oligodendrociti utilizzando un sistema di coltura a fette del proencefalo e del cervelletto.  Questo metodo consente di esaminare le dinamiche di proliferazione e differenziazione delle cellule all'interno della linea degli oligodendrociti, dove l'ambiente extracellulare può essere facilmente manipolato mantenendo la citoarchitettura tissutale.

Culture Organotipica Slice per studiare Oligodendrocyte Dynamics e mielinizzazione

Le registrazioni di coppia sono registrazioni simultanee di patch clamp di intere cellule da due neuroni collegati sinapticamente, che consentono una precisa caratterizzazione elettrofisiologica e farmacologica delle sinapsi tra i singoli neuroni. Qui descriviamo la metodologia dettagliata e i requisiti per stabilire questa tecnica in colture organotipiche di fette di ippocampo in qualsiasi laboratorio attrezzato per l'elettrofisiologia.

Associati a cellule intere registrazioni in organotipiche fettine di ippocampo

Un protocollo per culture fetta organotipica entorhino-ippocampale, che permette di riprodurre molti aspetti della lesione cerebrale ischemico, è presentato. Studiando cambiamenti del neurovasculature in aggiunta ai cambiamenti nei neuroni, questo protocollo è uno strumento versatile per studiare i cambiamenti plastici in tessuto neurale dopo l'infortunio.

L&#39;analisi di neurovascolare ritocca in Entorhino-ippocampali Culture Organotipica Slice

Qui si descrive una tecnica per lo studio dell'ippocampo la neurogenesi postnatale utilizzando la tecnica organotipica cultura fetta. Questo metodo permette la manipolazione in vitro di neurogenesi adulta e permette l'applicazione diretta di agenti farmacologici per l'ippocampo in coltura.

Colture organotipiche Slice di studi di post-natale neurogenesi

Colture organotipiche fettine di ippocampo (OHSC) rappresentano un modello in vitro che simula molto bene la situazione in vivo . Qui descriviamo un basato su vibratome migliorato affettare protocollo per ottenere fette di alta qualità per uso nel valutare il potenziale di neuroprotective del romanzo sostanze o il comportamento biologico delle cellule del tumore.

Colture Hippocampal Fetta organotipiche come modello di studio Neuroprotection e l'invasività delle cellule del tumore

Descriviamo un protocollo per l'espressione specifica del tipo di cellula del sensore basato su FRET codificato geneticamente ATeam1.03YEMK nelle colture di sezioni organotipiche del prosencefalo del topo. Inoltre, mostriamo come utilizzare questo sensore per l'imaging dinamico dei livelli di ATP cellulare in neuroni e astrociti.

Imaging di ATP intracellulare in fette di tessuto organicino del cervello del topo utilizzando il sensore basato su FRET ATeam1.03YEMK

Qui descriviamo la preparazione di fette organotipiche della corteccia renale-ippocampo. Sotto una graduale e controllata privazione del siero, queste fette raffigurano eventi epilettici in evoluzione e possono essere considerate un modello ex vivo di epileptogenesi. Questo sistema rappresenta un ottimo strumento per monitorare la dinamica dell'attività spontanea, nonché per valutare la progressione delle caratteristiche neuroinfiammatorie durante tutto il corso dell'epileptogenesi.

Un modello di epileptogenesi nelle culture delle fette organotipiche della corteccia rinale-ippocampo

Questo protocollo descrive la preparazione di fette orizzontali di corteccia ippocampale-entorinale (HEC) da topi che mostrano un'attività spontanea di increspatura ad onda acuta. Le fette vengono incubate in una camera di tenuta dell'interfaccia semplificata e le registrazioni vengono eseguite in condizioni sommerse con liquido cerebrospinale artificiale a flusso rapido per promuovere l'ossigenazione dei tessuti e l'emergere spontaneo di attività a livello di rete.

Affezione cerebrale acuta del topo per indagare sull'attività spontanea della rete ippocampale

Questo articolo ha lo scopo di descrivere un protocollo sistematico per ottenere fette orizzontali del cervello ippocampale nei topi. L'obiettivo di questa metodologia è preservare l'integrità delle vie della fibra ippocampale, come il percorso perforante e il tratto di fibra muschiata per valutare i processi neurologici correlati al giro dentato.

Fette ippocampali orizzontali del cervello del topo

Impara a coltivare fette ippocampali organotipiche preservando l'architettura neuronale per due settimane. Questo metodo consente di studiare la funzione ippocampale in vitro con elevata integrità tissutale.

Organotipica Culture Slice ippocampale

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