Name: Un metodo alternant al tradizionale modello della NASA arti posteriori di scarico in topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: Scopri un metodo alternativo per lo scarico degli arti posteriori nei topi che riduce lo stress animale. Questa tecnica con anello caudale induce atrofia muscolare mantenendo stabile il peso corporeo.

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Gli autori desiderano ringraziare Andrew J. Dunn, uno studente eccezionale di ricerca universitari nel nostro laboratorio, per la sua assistenza tecnica e la cura per gli animali. L&#39;Istituto Nazionale di Salute concedere HD058834 e l&#39;Università del Missouri Scienze della Vita Compagnia finanziato questo lavoro.

Pre-Chirurgia Strumenti / Materiali <ul><li> Tagliafili / pinze </li><li> Garza 2 x 2 "pastiglie </li><li> Riscaldamento pad </li><li> Bastoncini di nitrato d'argento </li><li> Guanti chirurgici sterili </li><li> Isoflurano anestetiche per via inalatoria </li><li> Clorexidina gluconato 4% (antisettico lavaggio chirurgico) </li><li> Sterile 2-0 sutura acciaio chirurgico </li><li> 25 X 5 / 8 A gauge (autoclavato) </li><li> Hemostat (autoclavato) </li><li> Acciaio sutura chirurgica </li></ul> Procedura di chirurgia <ol><li> Creare un campo sterile. Seguire la procedura sterile. </li><li> Anestetizzare il mouse con 2 - 3% isoflurano. </li><li> Posizionare il mouse sul pad riscaldamento. </li><li> Scrub coda con una soluzione di clorexidina. </li><li> Individuare 5, 6 o 7 ° spazio intervertebrale (tra due gobbe ossea sulla coda, inizia a contare dalla fine di peli sul corpo, alla base della coda). </li><li> Usa hemostat e ago 25G per fare un foro pilota tra due vertebre, nello spazio intervertebrale. </li><li> Utilizzare i tronchesi per tagliare la sutura in acciaio 10 cm. </li><li> Rimuovere l'ago ed inserire sutura in acciaio attraverso il foro, 5 cm di sutura su entrambe le estremità della coda. </li><li> Ogni lato della coda dovrebbe avere + 5 cm di sutura. </li><li> Luogo punta del pollice sulla coda. </li><li> Usa la tua mano libera e il vento la sutura in acciaio sulla punta del pollice e ruotare le estremità per formare un grande anello. La parte ferita o circolare deve essere + 3 mm di lunghezza. </li><li> Rimuovere il pollice. </li><li> Morsetto un filo di sutura con la hemostat e piegare in un ciclo più piccolo, alla fine del quale è collegato il più vicino possibile alla torsione sul circuito originale di grandi dimensioni. </li><li> Tagliare il cavo in eccesso, e piegare il filo intrecciato dietro. </li><li> Se c'è un eccesso di sanguinamento, è possibile fermare con i bastoni nitrato d'argento. </li><li> Spegnere il mouse isoflurano e posto in una gabbia singola casa a recuperare per 5-7 giorni prima di scarico degli arti posteriori. Gli anelli di coda rimanere impigliato se più di un topo è alloggiato insieme. </li></ol> 1. Procedura di scarico degli arti posteriori Materiale <ul><li> Dimensioni 10-24 x 4 viti, una per ogni animale. </li><li> Nylon Dado di blocco dimensioni 10-24, uno per ogni animale. </li><li> Dado di ala misura 10 x 24, due per ogni animale. </li><li> Rondella ¼ X 1, due per ogni animale. </li><li> Girevole di pesca con dimensioni moschettone # 6, 1-11/16 ", e un animale per. </li><li> Metallo macchina da cucire bobina. Un animale per. </li><li> Graffetta piccola per S a forma di gancio, una per ogni animale </li><li> Pinze. </li><li> 2 x "garza 2. </li><li> 2 "nero carta legante morsetti. </li><li> Duct tape / lab nastro. </li><li> 1-3/8 "bar in acciaio placcato scanalato che si estende leggermente oltre la lunghezza della gabbia </li><li> 50cm X 40cm x 20cm gabbia (gabbia di ratto). </li><li> Bottiglia d'acqua con tubo piegato. </li><li> Filo di acciaio inossidabile, a forma di U per supportare bottiglia d'acqua. </li></ul> Gabbia di installazione <ol><li> Posare il "1-38 bar in acciaio placcato scanalato sopra la parte superiore della gabbia, e nastro temporalmente giù con del nastro adesivo. </li><li> Vite 1 galletto alla vite della macchina, inserire una rondella, e inserire la vite attraverso la macchina in lamiera di acciaio scanalato ± 15 cm dal bordo della gabbia. </li><li> Aggiungere un altro rondella e dado ad alette. Stringere entrambi galletti, ma non serrare, in quanto sarà necessario fare aggiustamenti successivi. </li><li> Inserire la vite di macchina attraverso il foro centrale della bobina. </li><li> Per evitare che la bobina di cadere, avvitare il dado di bloccaggio in nylon fino alla fine della vite di macchina. La bobina deve girevole liberamente. </li><li> Inserire il gancio girevole dalla pesca attraverso la parte inferiore della bobina. </li><li> Utilizzare pinze a formare una S a forma di gancio dalla graffetta. (Tagliare due centimetri dalla clip di carta a formare un gancio). </li><li> Inserire un'estremità del S a forma di uncino nel foro della pesca girevole e un pizzico si chiuse con le pinze. </li><li> Posizionare il filo a forma di U, parallelamente alla vite della macchina, sulla parte interna del lato della gabbia, e piegare il back end per supportare una bottiglia piena d'acqua. </li><li> Inserire l'acqua in bottiglia a forma di U a filo, con il spicket rivolto verso il basso, ma non toccare il fondo. </li><li> Piegare le 2 "legante morsetto aperto, in modo che non può chiudere chiudere. Basta tensione sufficiente per contenere 3 a 4 pezzi di cibo in esso senza cadere. Questo è prevenire la forza della pinza da schiacciare il cibo, o reprimere il il mouse naso. </li><li> Posto 3 a 4 pezzi di roditore chow nel morsetto legante. </li></ol> Arti posteriori di scarico di Mouse <ol><li> Inserire l'estremità aperta del S a forma di uncino attraverso l'anello più piccolo dell'anello di coda. </li><li> Regolare l'altezza del mouse svitando o avvitando il dado sulla vite inferiore della macchina. Le estremità inferiori non deve essere carico. Una volta che l'altezza ottimale si ottiene serrare il dado superiore dell'ala. </li><li> Riposizionare la bottiglia d'acqua, e U filo in modo che il topo non può salire sul spicket con le sue arti posteriori. Fissare la bottiglia d'acqua con del nastro adesivo al lato della gabbia. </li><li> Posizionare il morsetto legante con il cibo sul fondo della gabbia in modo che il mouse non si può salire su di essa; nastro giù con del nastro adesivo. </li><li> Ripetere la stessa procedura se più di un animale è scaricato arti posteriori sul lato opposto della gabbia. Casa di due animali per gabbia, spazio agli animali in modo che possano quasi si toccano. </li><li> Utilizzare il X 2 2 garza per avvolgere liberamente la coda del mouse sul girevole pesce. Utilizzare un piccolo pezzo di nastro per avvolgere la garza, la garza di fissaggio alla coda. Questo passo è importante per evitare la coda da cadenti verso il basso, portando ad una pozza di sangue nella punta della coda e che la coda di divenire necrotico. </li><li> Aggiungere una piccola quantità di biancheria da letto pannocchia alla gabbia. Non aggiungere letto troppo altrimenti il ​​mouse da un cumulo di biancheria da letto e cerca di caricare arti posteriori sul letto. </li></ol> 2. Rappresentante dei risultati: Per stabilire il successo della coda-ring tecnica HU abbiamo misurato peso corporeo degli animali prima della chirurgia anello coda, e prima e dopo HU e recupero; massa muscolare soleo e massa surrenalica in tutti i gruppi. Del peso corporeo dei topi per tutto l'esperimento sono mostrati in Figura 1. Del peso corporeo dei topi prima dell'intervento anello di coda (24,7 ± 3,5 g) non sono risultati significativamente differenti dopo 5 giorni di recupero da un intervento chirurgico anello coda (24,3 ± 2.9g) prima di HU. Né il peso corporeo in modo significativo declino subito dopo 14 giorni di HU (22,7 ± 1.9g), 28 giorni di HU (21,3 + 2,1 g) o dopo 3 giorni dalla ripresa HU (24,0 ± 1,8 g). Anche se HU per 14 e 28 giorni ha comportato una piccola perdita (-6,8% e il 12%) ma non significativo in massa corporea, i topi completamente recuperato alla loro pre-HU del peso corporeo dopo 3 giorni di recupero. Consumo di cibo per topi di controllo ambulatoriale e topi HU è mostrata in Figura 3. Media giornaliera di cibo non era differente nei topi HU nell'arco di 28 giorni rispetto ai controlli. Abbiamo osservato significativa atrofia muscolo soleo seguenti HU per il 14 e 28 giorni (-39,1% e -46,6%) che indica una procedura efficace HU (Figura 2). Inoltre questo grado di atrofia è coerente con i valori attesi letteratura per 2-4 settimane di HU 2, 7, 8. A seguito di 3 giorni di recupero da HU soleo di massa significativamente aumentata al 74% dei valori di controllo. Soleo di massa nel gruppo di recupero era significativamente maggiore rispetto ai due gruppi HU, ma ancora significativamente inferiore rispetto agli animali di controllo ambulatoriale. Surrenali pesi sono stati misurati come indicatore dello stress degli animali, sia le ghiandole surrenali a destra e sinistra sono stati asportati e pesato. I pesi medi erano paragonabili per il controllo e topi HU topi in tutti i gruppi (Figura 4). In precedenza nei ratti abbiamo dimostrato che il tasso di successo per il numero di animali all'inizio del HU rispetto al numero di animali che hanno completato HU senza uscire di apparecchi sospensione (a causa di animali masticazione attraverso la coda di trazione del nastro) è stato 10 su di 12 con il Morey-Holton tecnica 1. Nessuno dei topi (n = 54) in questo studio mai sceso dal sospensione prima del completamento del periodo di HU. Abbiamo fatto comunque, hanno un mouse che ha sviluppato una coda severamente infiammate. Quando l'infiammazione è diventato evidente, abbiamo rimosso l'anello di coda per consentire la zona infiammata di guarire, e successivamente immesse un'altra coda-ring per completare la durata di HU. In passato, quando abbiamo usato la Morey-Holton metodo di HU, di solito 1-2 eliminare i topi / gruppo perché escono dell'apparato sospensione. Con il sentiero ad anello metodo non ci sono stati episodi di topi inavvertitamente uscendo dell'apparato HU durante il periodo di HU per 14 o 28 giorni (n = 54 topi). <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Cambiamenti del peso corporeo (media ± DS). Abbreviazioni: CON: peso-cuscinetto topi di controllo (n = 76); Pre-HU: tutti i topi prima di HU (n = 54); HU14: arti posteriori topi scaricati per 14 giorni (n = 34); HU28: arti posteriori topi scaricati per 28 giorni (n = 20); REC: topi arti posteriori scaricato permesso di recuperare gabbia per 3 giorni (n = 22). Nessuna differenza significativa nel peso corporeo è stata osservata tra i gruppi. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Soleo atrofia muscolare (media ± DS). Abbreviazioni: CON: peso-cuscinetto topi di controllo (n = 76); HU14: arti posteriori topi scaricati per 14 giorni (n = 34); HU28: arti posteriori topi scaricati per 28 giorni (n = 20); e REC: topi arti posteriori scaricato permesso per recuperare gabbia per 3 giorni (n = 22). * Significativamente diversi (p &lt;0,001) rispetto al peso-cuscinetto di controllo (CON). δSignificantly differenti (p &lt;0,01) di entrambi i gruppi HU. 467fig3.jpg "alt =" Figura 3 "/&gt; Figura 3. Consumo alimentare (media ± DS). Media giornaliera di alimenti (g / die) durante peso-cuscinetto e lo scarico degli arti posteriori. Abbreviazioni: peso-cuscinetto topi di controllo (n = 76); HU: topi arti posteriori unloaded14 - 28 giorni. Nessuna differenza significativa tra i gruppi HU CON e sono stati osservati. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Messa surrenale (media ± DS). Abbreviazioni: CON: peso-cuscinetto topi di controllo (n = 76); HU14: arti posteriori topi scaricati per 14 giorni (n = 34); HU28: arti posteriori topi scaricati per 28 giorni (n = 20); e REC: topi arti posteriori scaricato permesso per recuperare gabbia per 3 giorni (n = 22). Nessuna differenza significativa è stata osservata tra i gruppi.

<ol><li>Brown, M., Foley, A. M., Hasser, E. M., Foley, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+alternative+method+for+hindlimb+unweighting%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gravitational+Physiol%22%5BJournal%5D)">An alternative method for hindlimb unweighting.</a> J Gravitational Physiol. 12, 43-50 (2005).</li>
<li>Fitts, R. H., Metzger, J. M., Riley, D. A., Unsworth, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+disuse%3A+a+comparison+of+hindlimb+suspension+and+immobilization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Models of disuse: a comparison of hindlimb suspension and immobilization.</a> J Appl Physiol. 60, 1946-1953 (1986).</li>
<li>Ingalls, C. P., Warren, G. L., Armstrong, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+Ca2%2B+transients+in+mouse+soleus+muscle+after+hindlimb+unloading+and+reloading%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Intracellular Ca2+ transients in mouse soleus muscle after hindlimb unloading and reloading.</a> Journal of Applied Physiology. 87, 386-390 (1999).</li>
<li>Morey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spaceflight+and+bone+turnover%3A+correlation+with+a+new+rat+model+of+weightlessness%5BTitle%5D)+AND+%22BioScience%22%5BJournal%5D)">Spaceflight and bone turnover: correlation with a new rat model of weightlessness.</a> BioScience. 29, 168-172 (1979).</li>
<li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hindlimb+unloading+of+growing+rats%3A+a+model+for+predicting+skeletal+changes+during+space+flight%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Hindlimb unloading of growing rats: a model for predicting skeletal changes during space flight.</a> Bone. 22, 83-88 (1998).</li>
<li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hindlimb+unloading+rodent+model%3A+technical+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Hindlimb unloading rodent model: technical aspects.</a> J Appl Physiol. 92, 1367-1377 (2002).</li>
<li>Thomason, D. B., Booth, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atrophy+of+the+soleus+muscle+by+hindlimb+unweighting%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Atrophy of the soleus muscle by hindlimb unweighting.</a> J Appl Physiol. 68, 1-12 (1990).</li>
<li>Thomason, D. B., Herrick, R. E., Surdyka, D., Baldwin, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+soleus+muscle+myosin+expression+during+hindlimb+suspension+and+recovery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Time course of soleus muscle myosin expression during hindlimb suspension and recovery.</a> J Appl Physiol. 63, 130-137 (1987).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Abbiamo valutato un metodo alternativo di topi scarico degli arti posteriori, che abbiamo deciso di essere di grande successo. La coda-ring metodo descritto qui è stato usato a lungo termine della sospensione degli arti posteriori, e di studiare HU recupero successivo. In ognuna di queste condizioni, non vi era alcuna evidenza di mancato adeguamento, come evidenziato dalla assunzione di cibo stabile, peso corporeo, e pesi surrenali dei topi. Questa coda anello tecnica HU è facile da eseguire e può facilmente essere incorporato con pochissima pratica chirurgica. Ci sono diversi vantaggi di coda-ring metodo rispetto al tradizionale Morey-Holton 5, 6 metodo. In primo luogo, la pelle e l&#39;impianto sito anello sulla coda che sono sempre visibili, per cui in caso di problemi è evidente subito, non solo alla fine del periodo di sospensione. In secondo luogo, gli animali non sono in grado di uscire dell&#39;apparato sospensione in qualsiasi momento durante HU, ovviando alla necessità di fare una determinazione di se mantenere un mouse o non nel set di dati. Inoltre, i topi non si preoccupano l&#39;apparato ring e quando vengono rilasciate da HU per il recupero, non manomettere le loro code, consentendo una fase di ripresa senza soluzione di continuità dopo HU. Infine, arti posteriori topi scariche, con la coda anello metodo di mantenere il proprio peso corporeo meglio di arti posteriori topi scaricato dal Morey-Holton coda trazione tecnica. Nelle nostre mani dopo 14 giorni di HU abbiamo osservato una piccola perdita (-6,8%) ma non significativo di massa corporea. Mentre Ingalls et al. Osservata una diminuzione significativa -12% del peso corporeo nei topi dopo 14 giorni di HU dal Morey-Holton metodo 3. Anche se Ingalls non ha segnalato pesi surrenali, sembra che la nostra coda anello metodo conferisce meno stress sul mouse (pesi surrenalica nei nostri topi HU non sono differenti rispetto ai controlli) e una migliore manutenzione del peso corporeo durante tutto il periodo di scarico degli arti posteriori. In sintesi, un metodo anello coda degli arti posteriori di scarico è stato sviluppato e testato su topi HU per 14 e 28 giorni, e su topi restituito al recupero gabbia per 3 giorni dopo HU. Sulla base dei pesi surrenali, massa corporea e l&#39;assunzione di cibo, i topi sembrano essere adattato bene alla coda-ring apparato. La coda-ring scarico degli arti posteriori è un metodo utile, semplice alternativa al tradizionale Morey-Holton tecnica di scarico degli arti posteriori.

<table><tbody><tr><td>Tronches/tenaglie</td><td>Ace Hardware</td><td>84-056</td><td></td></tr><tr><td>Garza</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-901</td><td></td></tr><tr><td>Stuoia riscaldata</td><td>Sunbeam</td><td>Z-1228-001</td><td></td></tr><tr><td>Applicatori di nitrato d'argento</td><td>ARZOL</td><td>0001-2</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano, USP</td><td>Novaplus</td><td>NDC 0409-3292-49</td><td></td></tr><tr><td>Clorhexidina gluconato al 4%</td><td>Purdue Products L.P.</td><td>NDC 67618-200-01</td><td></td></tr><tr><td>Sutura sterile in acciaio chirurgico 2-0</td><td>Ethicon Inc.</td><td>SS-28</td><td></td></tr><tr><td>Ago calibro 25 X 5/8</td><td>Terumo Medical Corp.</td><td>NN 2516R</td><td></td></tr><tr><td>Emostato/forbice per ago</td><td>Fine Science Tools</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>Viti a testa cilindrica 10-24 X 4</td><td>Hillman The Fastener Center</td><td>90272</td><td></td></tr><tr><td>Dado autobloccante in nylon 10 X 24</td><td>Hillman The Fastener Center</td><td>180141</td><td></td></tr><tr><td>Dado a farfalla 10 X 24</td><td>Hillman The Fastener Center</td><td>180243</td><td></td></tr><tr><td>Washer paraurti calibro &amp;#188; X 1</td><td>Hillman The Fastener Center</td><td>290012</td><td></td></tr><tr><td>Swivel da pesca con gancio a scatto calibro #6, 1-11/16&amp;#8221;</td><td>Bass Pro Shop</td><td>38-481-554-01</td><td></td></tr><tr><td>Bobina metallica per macchina da cucire</td><td>Singer Instruments</td><td>45785</td><td></td></tr><tr><td>Clip per carta</td><td>Office Depot</td><td>221720</td><td></td></tr><tr><td>Morsetti neri per rilegatura da 2&amp;#8221;</td><td>Office Depot</td><td>308957</td><td></td></tr><tr><td>Nastro adesivo multiuso Scotch</td><td>Office Depot</td><td>790710</td><td></td></tr><tr><td>Barra d'acciaio scanalata placcata da 1-3/8&amp;#8221;</td><td>Home Depot</td><td>548932</td><td>Si estende leggermente oltre l'intera lunghezza della gabbia</td></tr><tr><td>Gabbia da 50 cm X 40 cm X 20 cm (gabbia per ratto)</td><td>Alternative Design Manufacturing</td><td>RC88D-PC</td><td></td></tr><tr><td>Bottiglia dell'acqua</td><td>Alternative Design Manufacturing</td><td>WB16FS</td><td></td></tr><tr><td>Filo in acciaio inossidabile</td><td>Small Parts, Inc.</td><td>SWX-4029</td><td>Filo a forma di U per sostenere la bottiglia dell'acqua</td></tr></tbody></table>

un metodo alternant al tradizionale modello della nasa arti posteriori di scarico in topi

An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

Il Morey-Holton arti posteriori scarico (HU) è un metodo ampiamente accettato National Aeronautics and Space Administration (NASA) con base a terra modello per lo studio disuso-atrofia nei roditori 4-6. Il nostro studio ha valutato un metodo alternant al gold-standard Morey-Holton HU coda trazione tecnica nei topi. Cinquantaquattro topi di sesso femminile (4-8 mesi). HU sono stati per 14 giorni (n = 34) o 28 giorni (n = 20). Recupero da HU è stata valutata dopo 3 giorni di deambulazione normale gabbia seguenti HU (n = 22). Di età compresa tra i topi abbinati (n = 76) è servito come peso-cuscinetto controlli. Prima di HU un anello di coda si è formata con un filo di 2-0 sterile acciaio chirurgico che è stato passato attraverso il 5 °, 6 ° o 7 ° inter-vertebrali spazio disco e racchiusi in un anello da cui sono stati sospesi i topi. Posizione vertebrale per la coda-anello è stato scelto per bilanciare opportunamente il peso corporeo dell&#39;animale senza interferire con la defecazione. Abbiamo determinato il successo di questa nuova tecnica HU, valutando il peso corporeo prima e dopo HU, il grado di atrofia soleo, e HU massa surrenalica seguente. Il peso corporeo dei topi prima di HU (24,3 ± 2.9g) non in modo significativo declino subito dopo l&#39;14 quinquies del HU (22,7 ± 1.9g), 28d di HU (21,3 + 2,1 g) o dopo tre giorni di recupero (24,0 ± 1,8 g) . Massa muscolare soleo significativamente diminuito (-39,1% e -46,6%) a seguito HU per 14 giorni e 28 giorni rispettivamente (p &lt;0,001). A seguito di 3 giorni di massa recupero soleo significativamente aumentata al 74% dei valori di controllo. Pesi surrenali di topi HU non erano differenti rispetto ai topi di controllo. Il successo del nostro metodo romanzo di HU è evidenziato dal mantenimento del peso dell&#39;animale, paragonabile pesi ghiandola surrenale, e l&#39;atrofia soleo seguenti HU, corrispondenti ai valori attesi letteratura 2, 7, 8. I vantaggi principali di questo metodo HU includono: 1) la facilità d&#39;esame coda durante la sospensione, 2) ha ridotto la probabilità di code cianotico, infiammato, e / o necrotiche frequentemente osservati con la coda-taping e HU, 3) senza possibilità di topi masticare la trazione nastro e in uscita dell&#39;apparato sospensione e 4) e un rapido recupero dell&#39;attività gabbia normale subito dopo l&#39;HU.

Abbiamo sviluppato un modello di scarico degli arti posteriori alternant nei topi. Il vantaggio principale del nostro arti posteriori scarico coda anello metodo più convenzionale Morey-Holton coda trazione tecnica è una procedura semplice semplice che riduce al minimo lo stress sull&#39;animale.

Un metodo alternant al tradizionale modello della NASA arti posteriori di scarico in topi

Il metodo di scarico dell'arto posteriore (HU) di Morey-Holton è un modello a terra della National Aeronautics and Space Administration (NASA) ampiamente accettato per studiare...

L'obiettivo generale di questa procedura è eseguire lo scarico degli arti posteriori, o hu, nei topi mediante un metodo più semplice e diretto, che minimizzi lo stress per l'animale. Questo metodo di applicazione alla coda induce con successo l'atrofia degli arti posteriori senza compromettere la salute generale e il peso corporeo. Il primo passaggio consiste nell'implantare un anello caudale in un topo adulto.È importante che il peso corporeo e le osservazioni relative alla salute vengano registrati per tutta la durata dello studio. Successivamente, l'apparato di scarico degli arti posteriori viene assemblato e posizionato all'interno di una gabbia dove avverrà lo scarico. Una volta che l'animale si è ripreso, viene posizionato all'interno dell'apparato per la procedura di scarico.In definitiva, i risultati possono essere ottenuti mediante misurazioni della massa corporea e muscolare che hanno evidenziato un'atrofia muscolare degli arti posteriori nei topi non sollecitati. Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come la tecnica di fissaggio con nastro di Maori Holton, è che la cute della coda è sempre visibile. I topi non sono in grado di uscire dall'apparato di sospensione né di giocare con l'anello, e si riprendono più rapidamente mantenendo un peso corporeo stabile.Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nei campi della fisiologia muscoloscheletrica, nonché della biologia gravitazionale e spaziale, ad esempio su come prevenire l'atrofia muscolare scheletrica e la perdita ossea dopo lunghi periodi di inattività fisica, riposo a letto, immobilizzazione degli arti, microgravità, malattie neuromuscolari e con l'avanzare dell'età. Abbiamo avuto questa idea per la prima volta quando abbiamo riscontrato complicazioni con la tecnica di fissaggio della coda di Maury Holden. Perdevamo costantemente animali e dati sperimentali a causa della fuga dei topi dall'apparato degli arti posteriori durante la dimostrazione di questa tecnica.Oggi sono presenti Andre's Ferrara, ricercatore associato senior del mio laboratorio, con l'assistenza di Jacqueline Chrissy, studentessa dottoranda del laboratorio, e Andrew Dunn, studente universitario dello stesso laboratorio. Iniziare sterilizzando l'area chirurgica, anestetizzando il topo adulto con isoflurano, quindi registrare il peso del topo e posizionarlo su un tappetino riscaldante. Preparare la coda per l'intervento chirurgico strofinandola con soluzione di clorexidina.Iniziare a contare a partire dall'estremità dei peli del corpo alla base della coda per individuare lo spazio intervertebrale quinto, sesto o settimo tra due protuberanze ossee sulla coda. Utilizzare un emostato e un ago 20 5G per creare un foro pilota tra due vertebre, penetrando nello spazio intervertebrale. Rimuovere l'ago e inserire un filo di sutura in acciaio.Tagliare a una lunghezza di 10 centimetri attraverso il foro. Cinque centimetri di sutura devono sporgere da ciascun lato della coda. Appoggiare la punta del pollice sulla coda e utilizzare l'altra mano per avvolgere la sutura di acciaio intorno al pollice.Twista le estremità per formare un grande anello. La parte avvolta o circolare deve essere lunga circa tre millimetri. Fissa un capo del filo di sutura con un emostatico e piegalo in un anello più piccolo, il cui estremo va attaccato il più vicino possibile alla torsione del grande anello originale.Tagliare il filo in eccesso e ripiegare indietro il filo attorcigliato. Arrestare qualsiasi sanguinamento residuo con bastoncini di nitrato d'argento. Lasciare l'animale in recupero per cinque a sette giorni prima dello scarico dell'arto posteriore o dello hu dopo l'intervento chirurgico.Collocare singolarmente la casa del misero per evitare che gli anelli della coda si aggroviglino. Sovrapporre un'asta di acciaio scanalata placcata spessa un pollice e larga tre ottavi di pollice sulla sommità della gabbia e fissarla con del nastro adesivo. Aggiungere un altro dado e un dado a ghiera, ma non avvitarli completamente per permettere regolazioni successive.Inserire la vite meccanica attraverso il foro centrale della bobina per impedire che cada. Avvitare un dado autobloccante in nylon all'estremità della vite meccanica. La bobina deve ruotare liberamente.Inserire il gancio a sgancio rapido di un moschettone da pesca nella parte inferiore del rocchetto. Utilizzare delle pinze per modellare un gancio a forma di S da una graffetta. Inserire un'estremità del gancio a forma di S nel foro del moschettone da pesca e chiuderlo premendo con le pinze.Posizionare un filo a forma di U parallelamente alla vite sulla parte interna della gabbia e piegare le estremit&agrave; verso l'esterno. Per sostenere una bottiglia piena d'acqua, inserire la bottiglia nel filo a forma di U con il beccuccio rivolto verso il basso, ma senza farlo toccare il fondo. Fissare la bottiglia alla gabbia con nastro adesivo robusto.Aprire una molletta per raccoglitore da due pollici, lasciando una tensione sufficiente a trattenere alcuni pezzi di cibo senza schiacciare le pastiglie prima della procedura di scarico degli arti posteriori. Registrare il peso del topo da utilizzare per i confronti. Successivamente, inserire l'estremità aperta del gancio a forma di S nell'anello più piccolo che sporge dalla coda.Regolare l'altezza del mouse stringendo o allentando il dado a farfalla inferiore sulla vite della macchina. Gli arti inferiori non devono sostenere il peso. Una volta raggiunta l'altezza ottimale, stringere il dado a farfalla superiore e riposizionare la bottiglia dell'acqua con un nuovo filo modellato in modo che il mouse non possa arrampicarsi sul beccuccio con gli arti posteriori.Per misurare il consumo alimentare durante lo studio, pesare le pastiglie prima di posizionarle nella pinza del raccoglitore. Fornire circa otto-dieci grammi per consentire un consumo di circa cinque-sei grammi di mangime al giorno. Per ogni posizione del topo, posizionare la pinza del raccoglitore con il cibo sul fondo della gabbia in modo che il topo non possa arrampicarcisi sopra, e fissarla con nastro adesivo isolante.Utilizzando due pollici per due pollici di piume di gallo in modo allentato. Avvolgere la coda sull'ancoretta. Avvolgere una piccola parte di coda intorno alle piume di gallo, fissando le piume di gallo alla coda.Questo passaggio è importante per evitare che la coda penda verso il basso, causando l’afflusso di sangue alla punta e la necrosi della coda. Ripetere la stessa procedura per un ulteriore animale sull’altro lato della gabbia. Quando si alloggiano due animali per gabbia, posizionarli in modo che possano quasi toccarsi l’un l’altro.Al centro della gabbia. Aggiungo una piccola quantità di lettiera in cob alla gabbia, assicurandomi che non ce ne sia abbastanza perché il topo possa utilizzarla per formare un mucchio. Dopo la procedura di scarico dell'arto posteriore, rimuovere l'animale dall'apparato e rimuovere l'anello caudale.Utilizzando un tagliafilo, registrare il peso corporeo e restituire l'animale alla sua gabbia per il recupero. Dopo un periodo di recupero, gli animali vengono nuovamente lasciati in attesa e vengono misurati il muscolo soleo e le masse surrenali. I pesi corporei prima dell'intervento chirurgico sulla coda non differivano significativamente da quelli rilevati cinque giorni dopo l'intervento e prima dell'hu.Sebbene lo scarico degli arti posteriori per 14 e 28 giorni abbia provocato una lieve perdita di massa corporea, questa non è risultata statisticamente significativa; i topi hanno infatti recuperato completamente i pesi corporei precedenti allo scarico. Dopo tre giorni di recupero, qui viene mostrato il consumo alimentare di topi di controllo deambulanti e di topi sottoposti a scarico.L'assunzione alimentare giornaliera media non è risultata diversa nei topi HU rispetto ai controlli durante un periodo di 28 giorni. Un'atrofia significativa del muscolo soleo è stata osservata dopo 14 e 28 giorni di HU, indicando una procedura efficace già dopo tre giorni di recupero. La massa del soleo è risultata significativamente maggiore rispetto a entrambi i gruppi HU, ma comunque significativamente inferiore rispetto agli animali di controllo ambulatoriali.Entrambe le ghiandole surrenali, destra e sinistra, sono state escisse e pesate per fornire un indicatore dello stress animale. Come mostrato qui, i pesi medi erano confrontabili tra i topi di controllo e quelli HU. Una volta acquisita padronanza, la chirurgia di adattamento può essere completata in cinque-dieci minuti per topo, e l'allestimento della gabbia può essere portato a termine in 15 minuti seguendo questa procedura. Altri metodi come il ricarico degli arti, il recupero dall'atrofia da inattività e l'utilizzo di topi Hein possono essere eseguiti per rispondere a ulteriori domande, ad esempio su come i sistemi muscolare e scheletrico possano recuperare e rispondere a prolungati periodi di inattività.Ora che hai visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come eseguire lo scarico degli arti posteriori nei topi. Questa tecnica permette lo studio di diversi tessuti e sistemi, come quelli cardiovascolare, muscoloscheletrico e intestinale, in condizioni di scarico e ricarico, utilizzando una varietà di modelli murini come knockout o knockin.

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La procedura chirurgica per l'induzione di ischemia degli arti posteriori unilaterale è dimostrato, con la conferma di ischemia da imaging laser Doppler perfusione.

Modello murino di ischemia degli arti posteriori

Il modello di resezione del nervo tibiale è un modello ben tollerato, validato e riproducibile di atrofia del muscolo scheletrico. Il protocollo chirurgico modello è descritto e dimostrato in C57Black6 topi.

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I microRNA svolgono ruoli cruciali nel cervello e sono potenziali bersagli per la modellazione della neurodegenerazione. Tuttavia, perturbare i livelli di miRNA è difficile a causa della breve lunghezza dei miRNA e dell'inaccessibilità del tessuto cerebrale. Questo video presenta un metodo per la progettazione di antagomir e la somministrazione di antagomir specifici per il cervello utilizzando un neuropeptide nei topi.

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L'induzione chirurgica dell'ischemia degli arti posteriori nel topo è utile per esaminare l'angiogenesi, tuttavia questa è compromessa in alcuni ceppi di topi consanguinei che mostrano una marcata necrosi tissutale indotta da ischemia. Vengono descritti metodi per indurre l'ischemia subacuta degli arti utilizzando costrittori ameroidi per aggirare questo problema attraverso l'induzione di un'occlusione arteriosa graduale.

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Utilizzando un modello innovativo di analogici terrestri, siamo in grado di simulare una missione spaziale, tra cui un viaggio a (0g) e un soggiorno su Marte (0,38 g) in ratti. Questo modello permette una valutazione longitudinale dei cambiamenti fisiologici che si verificano durante le due fasi IPO-gravitazionale della missione.

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Un metodo rivisto per indurre il linfomal secondario nell'Hindlimb dei topi

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Fare il passo successivo: un modello di trapianto di arto hind di coaptation neurale per massimizzare il recupero funzionale nel ratto

Questo articolo dimostra un approccio chirurgico efficiente per stabilire l'ischemia acuta nei topi con una piccola incisione. Questo approccio può essere applicato dalla maggior parte dei gruppi di ricerca senza aggiornamenti di laboratorio.

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