Name: Registrazioni cella intero cervello di adulti Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 27 s
Description: Impara la registrazione in cella intera su cervelli isolati di Drosophila adulta per studi di neurofisiologia. Questo metodo consente di analizzare l'attività neuronale singola usando neuroni marcati con GFP.

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Questo lavoro è stato finanziato da una sovvenzione al NIH NS27501 DKOD. Supporto aggiuntivo per questo lavoro è stato fornito da una sovvenzione HHMI Programma Professore a DKOD.

I. La dissezione del cervello da mosca adulta <ol><li> Mettere una piccola goccia (~ 100 l) di dissezione soluzione in centro di un piatto 35 millimetri Petri. </li><li> Cattura femmina adulta con aspiratore. Sotto dissezione microscopio, utilizzare due aghi da siringa di decapitare la mosca. </li><li> Mettere la testa in una piccola goccia di soluzione salina dissezione (con papaina aggiunto) in una capsula di Petri. </li><li> Testa di posizione con con proboscide rivolta fondo del piatto. </li><li> Tenere la cuticola che copre l&#39;occhio sinistro composto con ago 1. Fare un taglio diagonale che si estende dalla dorsale verso la superficie ventrale con ago 2, proprio mediale ago 1. </li><li> Tenere l&#39;apparato boccale con l&#39;ago 1 e usare l&#39;ago 2 per fare un taglio orizzontale che si estende dalla superficie ventrale dell&#39;occhio sinistro per l&#39;occhio destro, a livello della base della proboscide. </li><li> Tenere la cuticola che copre l&#39;occhio destro compound con ago 1. Fare un taglio diagonale che si estende dalla dorsale verso la superficie ventrale con ago 2, proprio mediale dell&#39;ago 1. </li><li> Ruotare la testa in modo che la parte rostrale è sulla superficie del piatto di Petri. Inserire l&#39;ago 1 tra la cuticola rostrale e il cervello, e usare l&#39;ago da 2 a seguire lo stesso percorso del primo ago. Idealmente, la capsula sarà staccarsi dal cervello con entrambi i lobi ottici collegati in quanto questi sono importanti per stabilizzare il cervello per la registrazione. </li><li> La trachea, l&#39;aria sacche, e altri tessuti connettivi sono accuratamente rimossi con due pinze punta fine. </li><li> Dissezione tutto dovrebbe prendere 3-10 minuti </li></ol> II. Montaggio del sistema nervoso centrale <ol><li> Il cervello è trasferita nella camera di registrazione usando una pipetta gialla punta. </li><li> Nella camera di registrazione, il cervello è stabilizzato posizionando il telaio platino tale che due mirino bene mettersi in contatto con il tessuto a livello della giunzione tra i lobi ottici e la regione del cervello centrale. </li><li> Ogni cervello si lascia riposare in camera di registrazione con perfusione continua con soluzione fisiologica ossigenata (95% di ossigeno e anidride carbonica del 5%) per almeno 10 minuti. Perfusione della camera con soluzione fisiologica ossigenata è proseguito per tutto il periodo di registrazione. La preparazione è visualizzata utilizzando un microscopio in posizione verticale (Axioskop 2FS; Zeiss, Oberkochen, Germania) con un palco fisso e un obiettivo 40x immersione in acqua (Achroplan, apertura numerica, 0,8; Zeiss) e l&#39;ottica Nomarski. GFP è stato visto con una pressione arteriosa 505-530 fluorescenza filtro. </li></ol> III. Elettrofisiologia <ol><li> Pipette di 8-14 Mohm sono usati per le registrazioni a cellula intera </li><li> Current-clamp e voltage-clamp registrazioni vengono eseguite utilizzando un elenco EPC7 o un amplificatore Axopatch 200B, un Digidata 1322A convertitore DA (Molecular Devices, Foster City, CA), un Dell Dimension 8200 computer (Dell Computer, Round Rock, TX), e pClamp 9 software (Molecular Devices). </li></ol>

<ol><li>Gu, H., O Dowd, D. K., K, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+synaptic+transmission+in+Adult+Drosophila+Kenyon+cells+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Cholinergic synaptic transmission in Adult Drosophila Kenyon cells in situ.</a> Journal of Neuroscience. 26, 265-272 (2006).</li>
<li>Wilson, R. I., Turner, G. C., Laurent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+of+olfactory+representations+in+the+Drosophila+antennal+lobe%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Transformation of olfactory representations in the Drosophila antennal lobe.</a> Science. 303, 366-370 (2004).</li>
</ol>

La preparazione isolato intero cervello illustriamo in questo video permette la valutazione dei meccanismi cellulari alla base eccitabilità e la trasmissione sinaptica nei neuroni identificati, compresi quelli nelle vie di elaborazione olfattiva, nel cervello adulto Drosophila (Gu e O Dowd, 2006). Questo approccio è complementare allo studio dell&#39;attività neuronale nel cervello degli adulti Drosophila intatto (Wilson et all 2004), più o meno allo stesso modo le registrazioni da parte dei neuroni in una fetta cervello dei mammiferi sono ...

<table><tbody><tr><td>#5 Pinza</td><td>Strumento</td><td>Fine Science Tools</td><td>n. 11251-10</td><td>Fare attenzione a non danneggiare mai le punte sottili della pinzetta</td></tr><tr><td>Papaina</td><td>Reagente</td><td>Worthington Biochemical</td><td>3126</td><td>20 U/ml attivata da 1 mM L-cisteina</td></tr><tr><td>Microscopio stereoscopico</td><td>Modello SMZ-2B: C-PS</td><td>Nikon Instruments</td><td></td><td>Dotato di luci a fibra ottica con collo d'oca posizionate a basso angolo</td></tr><tr><td>Ago &amp;e siringa </td><td></td><td>PrecisionGlide&amp;#174;?, Becton Dickinson & Co</td><td>305175 &amp;amp; 309602</td><td>Economico e duraturo</td></tr><tr><td>Microscopio eretto</td><td>Axioskop2 FS plus</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td>Dotato di una piastra fissa, obiettivo ad immersione in acqua 40X, ottiche Nomarski e lampada a fluorescenza</td></tr><tr><td>Amplificatore per tecnica del patch clamp</td><td>200 B</td><td>Molecular Devices</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Convertitore D-A Digidata </td><td>1322A</td><td>Molecular Devices</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

registrazioni cella intero cervello di adulti drosophila

Whole Cell Recordings from Brain of Adult Drosophila

In questo video, dimostriamo la procedura per isolare il cervello tutto da adulto Drosophila, in preparazione per la registrazione da singoli neuroni. Cominciamo con la descrizione della soluzione di dissezione e la cattura delle femmine adulte utilizzate nei nostri studi. La procedura per la rimozione del cervello intatto, tra cui entrambi i lobi ottici, è illustrata. Dissezione della trachea sovrastante è anche mostrato. Il cervello isolato non è solo piccola ma necessita di particolare attenzione nella gestione in questa fase, per evitare di danneggiare i neuroni, molti dei quali sono vicini alla superficie esterna del tessuto. Si mostra come un supporto speciale che abbiamo sviluppato è usato per stabilizzare il cervello nella camera di registrazione. Un elettrofisiologia norme stabilite viene utilizzato per la registrazione di singoli neuroni o coppie di neuroni. Una immagine fluorescente, vista attraverso il microscopio di registrazione, da una linea guida GAL4 espressione GFP (GH146) illustra come i neuroni di proiezione (PN) sono identificate nel cervello vivo. Una immagine ad alta potenza Nomarski mostra una vista di un singolo neurone che è nel mirino per la registrazione a cellula intera. Quando il cervello è rimosso con successo senza danni, la maggior parte dei neuroni sono attivi spontaneamente, sparando potenziali d&#39;azione e / o esporre spontaneo di input sinaptici. Questo in preparazione in situ, in cui la registrazione a cellule intere di neuroni identificati in tutto il cervello può essere combinato con manipolazioni genetiche e farmacologiche, è un modello utile per esplorare la fisiologia cellulare e la plasticità del sistema nervoso centrale adulto.

Questo video mostra la procedura per isolare il cervello tutto da adulto Drosophila, in preparazione per la registrazione di singoli neuroni utilizzando tecnologia standard a cellula intera. Esso comprende le immagini di cellule GFP etichettati e neuroni visualizzati durante la registrazione.

Registrazioni cella intero cervello di adulti Drosophila

In questo video, dimostriamo la procedura per l'isolamento di cervelli interi da Drosophila adulte in preparazione per la registrazione di singoli neuroni. Iniziamo con...

Il mio nome è, sono un'assistente specialista del Dipartimento di Anatomia e Neurobiologia dell'uc R one. Oggi vi spiegherò la procedura per effettuare la registrazione su cervello PHA, i passaggi chiave di questa preparazione consistono nel decapitare il soggetto, rimuovere il cervello e asportare il sistema TRICARE e il tessuto G trasparente dalla superficie cerebrale. Oggi vi mostrerò come preparare una soluzione di dissezione per la registrazione di cellule intere su cervello adulto di soft lab.Il primo passo consiste nel preparare la prima soluzione, la seconda soluzione è molto importante, ed è fondamentale per una buona preparazione del cervello adulto. Per prima cosa metterò cinque millilitri di soluzione registrata in questa provetta centrifuga. E poi qui ho un'altra provetta più piccola.Aggiungerò un millilitro di soluzione registrata in questo tubo, aggiungerò un po' di sing e poi preparerò questa soluzione di sing. La pipetterò su e giù per ottenere una buona soluzione di sing. Successivamente preleverò 100 unità di pepane da questa bottiglia.E poi metterò questa pepane in questa provetta centrifuga. Come potete vedere, la soluzione è torbida; aggiungerò quindi altri 10

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Biologia

Registrazione elettrofisiologiche in Drosophila Embryo

La registrazione simultanea dei segnali di calcio da parte dei neuroni identificati e comportamento alimentare di Drosophila melanogaster</em

Questo video descrive come sezionare e isolare il cervello adulto di Drosophila, una procedura necessaria per visualizzare l'organo, che altrimenti è oscurato dalla cuticola, dall'occhio e dal tessuto tracheale. Il protocollo di esempio mostra una dimostrazione dettagliata che produce preparati di alta qualità che possono essere utilizzati per l'immunocolorazione e i metodi di imaging nella neurobiologia della Drosophila.

drosofila Dissezione cerebrale adulta: un metodo nella neurobiologia delle mosche

Il video dimostra la registrazione extracellulare dell'attività neuronale dal sistema nervoso centrale (SNC) delle larve di Drosophila. Il SNC sezionato viene posizionato in una camera di registrazione e l'attività elettrica di un nervo discendente viene registrata per stabilire la frequenza di attivazione di base. Viene quindi introdotto un agente di prova e viene registrata la variazione della frequenza di attivazione per determinare l'effetto eccitatorio o inibitorio dell'agente.

Registrazione extracellulare dell'attività elettrica nel sistema nervoso centrale della Drosophila

I microelettrodi affilati consentono un'accurata caratterizzazione elettrofisiologica dell'output dei fotorecettori e degli interneuroni visivi in Drosophila vivente. Qui mostriamo come utilizzare questo metodo per registrare risposte di tensione di alta qualità delle singole cellule alla stimolazione luminosa controllata. Questo metodo è ideale per studiare l'elaborazione delle informazioni neurali negli occhi composti da insetti.

Metodo elettrofisiologiche per la registrazione intracellulare di tensione Risposte di<em&gt; Drosophila</em&gt; Fotorecettori e Interneuroni a luce stimoli<em&gt; In Vivo</em

Le registrazioni a cellule intere dai fotoricettori Drosophila melanogaster consentono di misurare scatti oscuri spontanei, urti quantici, risposte macroscopiche alla luce e relazioni di tensione-corrente in varie condizioni. In combinazione con gli strumenti di manipolazione genetica D. melanogaster , questo metodo consente di studiare il percorso iniettol-lipidico onnipresente e il suo target, il canale TRP.

Metodo elettrofisiologico per le registrazioni a morsetto di tensione a cellule intere da<em&gt; Drosophila</em&gt; Fotorecettori

L'obiettivo del presente protocollo è quello di stabilire ex vivo Drosophila cultura larvale cervello ottimizzato per monitorare i ritmi circadiani molecolari con formazione immagine di time-lapse fluorescenza a lungo termine. L'applicazione di questo metodo a dosaggi farmacologici inoltre è discussa.

Cella singola risoluzione fluorescenza Live Imaging di Drosophila orologi circadiani nel cervello larvale cultura

Questo articolo presenta un metodo per verificare le connessioni monosinaptica tra neuroni impiegando tetrodotossina e il canale del sodio tetrodotossina-resistente, NaChBac.

Esaminando monosinaptica connessioni in Drosophila utilizzando i canali di sodio tetrodotossina resistenti

Questo protocollo descrive un metodo per registrare l'attività elettrica discendente del sistema nervoso centrale Drosophila melanogaster per abilitare il costo-efficiente e conveniente test degli agenti farmacologici, mutazioni genetiche delle proteine neuronali, e/o il ruolo di inesplorate vie fisiologiche.

Registrazione elettrofisiologica dell'attività del sistema nervoso centrale di terza-Instar Drosophila Melanogaster

Presentiamo un metodo specificamente su misura per l'immagine dell'intero cervello della Drosophila adulta durante il comportamento e in risposta agli stimoli. La testa è posizionata per consentire l'accesso ottico a tutto il cervello, mentre la mosca può muovere le gambe e le antenne, la punta della proboscide e gli occhi possono ricevere stimoli sensoriali.

Preparazione della Drosophila melanogaster adulta per l'imaging cerebrale intero durante il comportamento e le risposte agli stimoli

Un ostacolo significativo allo studio dell'attività cellulare durante i processi cognitivi come l'apprendimento e la memoria è l'uso di anestetici per la preparazione dell'imaging in vivo . L'anestesia compromette la memoria a breve termine e la cognizione in più modelli, tra cui la Drosophila. Questo studio presenta un metodo unico per preparare la Drosophila adulta per l'imaging in vivo senza anestesia.

In vivo Imaging dell'attività neurale nelle mosche adulte di Drosophila non anestetizzate

Impara la registrazione in cella intera su cervelli isolati di Drosophila adulta per studi di neurofisiologia. Questo metodo consente di analizzare l'attività neuronale singola usando neuroni marcati con GFP.

Registrazioni cella intero cervello di adulti Drosophila

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