Name: Applicazione della Luce cured resina adesiva dentale per montaggio elettrodi o sonde Microdialisi negli esperimenti cronica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 30 s
Description: Impara a utilizzare resine dentali fotopolimerizzabili per fissare elettrodi e sonde di microdialisi nel cranio senza viti. Questo metodo riduce l'infiammazione e migliora la stabilità negli esperimenti cronici di elettrofisiologia.

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Ringraziamo i nostri colleghi in RIKEN-BSI per il loro supporto e consigli gentilmente proficuo nel corso di questo lavoro. Vorrei esprimere il mio sincero apprezzamento al Prof. Shigemi Mori, il professor G bor Juh tg, Drs. Kiyoji Matsuyama, Katalin AK kesi e rp d Dobolyi che mi ha consigliato di metodo di studio microdialisi durante il corso di laurea presso l&#39;Università Graduate for Advanced Studies, in Giappone. Infine, ringraziamo il Sig. Chris Sarnecky e il Dr. Akitsugu Takasu per il loro supporto per la registrazione video.

Fase 1. Preparazione di impianto sonda <ol><li> Anestesia (non mostrato nel video) Anestetizzare ogni uccello con un&#39;iniezione interperitoneal di ketamina (12,5 mg / kg di peso corporeo) e xilazina (25 mg / kg) miscela per produrre un livello costante di anestesia chirurgica. </li><li> Fissare una testa ad un telaio stereotassico Usa Xylocaine (TM) gelatina per ridurre i dolori locali bar di pressione all&#39;orecchio &#39;. La testa di uccello è fissato in un apparato stereotassico composto da barre di orecchio e di un supporto becco che tiene la testa con un angolo di 45 °. Durante la chirurgia stereotassica per l&#39;impianto, caldo il corpo di uccello da pad chirurgica con controllo termico (temperatura = 34 ~ 36 ° C). </li><li> Disinfettare l&#39;area chirurgica Disinfettare il campo chirurgico con isodine (TM) prima della chirurgia. </li></ol> Fase 2. Posizionamento stereotassico <ol><li> Punto di riferimento di allineamento Allineare sonda fittizio (vetro micropipetta) al Lambda (Y-punto) e il punto Y-point con il colorante pieno di pipette. Rimanenti Destrano-TMR dello studio tracciante ultima è stata utilizzata nel video. </li><li> Incisione della pelle Togliere la pelle ed esporre la superficie del cranio. Poi, pulire la superficie del cranio con tamponi di cotone. </li><li> Posizionamento di cannula fittizio (in direzione orizzontale) Spostare la cannula fittizio al sito di destinazione (AP asse laterale e di coordinamento) </li><li> Craniotomia piccole e incisione della dura madre. Utilizzare una pinza sottile per craniotomia e un sottile ago per iniezione (30 G) per incisioni della dura madre. Poi, pulire la superficie del cranio. </li><li> Posizionamento finale (impianto) di cannula dummy Individuare la punta della cannula guida allo 0,30 mm al di sopra della microdialisi sonda destinata regione di destinazione. Infine, pulire la superficie del cranio di nuovo, perché una superficie asciutta e pulita è necessaria per l&#39;incollaggio dura. </li></ol> Fase 3. Pretrattamento della superficie cranica (La procedura simile per &quot;restauro diretto riempimento&quot; del prodotto dentale deve essere impiegato.) <ol><li> Primer trattamento <ol><li> Mix PRIMAR liquido A con B su un piatto. </li><li> Applicare il composto sulla superficie del cranio con un pennellino. </li><li> Lasciare agire per 30 secondi. </li><li> A secco con flusso d&#39;aria mite. (Non lavare.) </li></ol></li><li> Applicazione di legante <ol><li> Applicare il collante sulla superficie del cranio con un pennellino. </li><li> Applicare una leggera corrente d&#39;aria. (Non lavare.) </li><li> Fotopolimerizzare per 20 secondi. </li></ol></li></ol> Fase 4. Montaggio in resina composita <ol><li> Resina montare con plugger pianura Se un plugger Pianura non è disponibile, un micro-spatola può essere utilizzato. </li><li> Fotopolimerizzazione </li><li> Incrementale di montaggio Incrementale di montaggio si consiglia di assicurare la reazione completa della resina. Per il montaggio incrementale, applicare collante prima di ogni montaggio. </li><li> Stampo la resina composita e fotopolimerizzabile per la finale di indurimento. </li><li> Fine della chirurgia </li></ol> Pulire l&#39;area chirurgica, si applicano agli antibiotici (gentamicina pomata), e rimuovere l&#39;animale dal fuoco stereotassica. Quindi, tenere l&#39;animale in una camera termo-controllati (temperatura = 33-35 ° C) per il recupero post-anestetico. Come mostrato nel video, nessun comportamento anomalo è stato osservato in qualsiasi degli animali il giorno successivo dopo l&#39;intervento.

<ol><li>Adell, A., Artigas, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Brain+microdialysis%3A+Principles+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vivo+Neuromethods%3A+Neuromethods%22%5BJournal%5D)">In vivo Brain microdialysis: Principles and applications.</a> In Vivo Neuromethods: Neuromethods. Boulton, A., Baker, G., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).</li>
<li>Kendrick, K. Microdialysis in large unrestrained animals: neuroendocrine and behavioral studies of acetylcholine, amino acid, monoamine and neuropeptide release in the sheep. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKendrick%2C+K+%22Microdialysis+in+the+Neuroscience%22">Microdialysis in the Neuroscience</a>. Robinson, T., Justice, J., Bateson, A. 7, Elsevier. Amsterdam. 327-348 (1991).</li>
<li>Oakley, B., Schafer, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOakley%2C+B+%22Experimental+Neurobiology%3A+A+laboratory+Manual%22">Experimental Neurobiology: A laboratory Manual</a>. , University of Michigan Press. Ann Arbor. (1978).</li>
<li>Okumura, T., Yamashita, Y., Okanoya, K., Tani, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+the+sensori-motor+nucleus+NIf+in+generation+of+complex+syntactical+song+in+the+Bengalese+Finch+I.+A+Biological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Soc.+Neurosci+Abst%22%5BJournal%5D)">Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese Finch I. A Biological study.</a> Soc. Neurosci Abst. 33, (2007).</li>
<li>Boulton, A., Baker, G. The relation of brain electrical activity to behavior. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBoulton%2C+A+%22In+Vivo+Neuromethods%3A+Neuromethods%22">In Vivo Neuromethods: Neuromethods</a>. Robinson, T., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).</li>
<li>Yamashita, Y., Okumura, T., Okanoya, K., Tani, J. Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese finch. Proceeding of the 2nd International Symposium on Mobiligence, , 101-104 (2007).</li>
</ol>

Gli esperimenti sono stati effettuati in conformità con le linee guida per la sperimentazione animale del cervello Science Institute, RIKEN (RIKEN-BSI) e dell&#39;Istituto animale comitato etico li ha approvati.

Rispetto per l&#39;applicazione dei tradizionali resine acriliche cura di sé, la tecnica ha introdotto una serie di vantaggi importanti: 1. Legame diretto: Acrilico curare sé può essere attaccati all&#39;osso per un po &#39;ma non aderisce alle ossa. Pertanto, le viti di ancoraggio sono tenuti a fissare una base di montaggio (vedi Figura 2A). Al contrario, la resina fotopolimerizzazione possibile legame con l&#39;osso direttamente le viti in modo non sono necessari (Figura 2B). Pertanto, il volume di base di montaggio ...

1A fotografia mostra sonda microdialisi (a), un dado cieco (b) e una cannula guida (c). In questa foto, la cannula guida è circondata da resina dentale che aderisce al cranio direttamente. Foto B mostra un uccello durante la perfusione di droga. Sulla sommità della testa, c&#39;è una sonda microdialisi che è collegato a un tubo tefron fine. Barre di scala = 1 cm per A e 2 cm per B, rispettivamente. <img src="http://www.jove.com/files/249_2008_8_26_3/249_Figure-01.png" /> Figura 1 - Le fotografie di una sonda da microdialisi (A) e un uccello durante la perfusione di droga (B)

applicazione della luce cured resina adesiva dentale per montaggio elettrodi o sonde microdialisi negli esperimenti cronica

Application of Light-cured Dental Adhesive Resin for Mounting Electrodes or Microdialysis Probes in Chronic Experiments

In esperimenti di registrazione cronica, resine dentarie autopolimerizzante acrilici sono stati usati come una base di montaggio di elettrodi o di microdialisi-sonde. Dal momento che questi acrilici non legame con l&#39;osso, le viti sono stati utilizzati come ancore. Tuttavia, in piccoli animali da esperimento, come fringuelli o il mouse, i loro crani sono molto fragili e non possono tenere con successo le ancore. In questo rapporto, proponiamo una nuova applicazione di resine dentali fotopolimerizzabili per la base di montaggio degli elettrodi o sonde di microdialisi in esperimenti cronica. Questo materiale permette legame diretto al cranio. Pertanto, le viti di ancoraggio non sono necessarie e campo chirurgico può essere ridotto notevolmente. Le esperienze passate dimostrano che l&#39;effetto di incollaggio mantiene più di 2 mesi. Finestra di resina convenzionale di tempo in cui i materiali sono flessibili e funzionali è a pochi minuti. Tuttavia, la finestra del tempo di lavoro per questi adesivi dentali è significativamente più ampio e regolabile.

In questo rapporto, proponiamo una nuova applicazione di resine dentali fotopolimerizzabili per la base di montaggio degli elettrodi o sonde di microdialisi in esperimenti cronica. Questo materiale permette legame diretto al cranio.

Applicazione della Luce cured resina adesiva dentale per montaggio elettrodi o sonde Microdialisi negli esperimenti cronica

Negli esperimenti di registrazione cronica, le resine acriliche dentali autopolimerizzanti sono state utilizzate come base di fissaggio per elettrodi o sonde per microdialisi. Poiché queste...

Negli esperimenti cronici di elettrofisiologia o di microdialisi, il cemento dentale autopolimerizzante è stato ampiamente utilizzato come base di montaggio per elettrodi o sonde di microdialisi. Poiché queste resine acriliche non aderiscono alla superficie ossea, sono state utilizzate viti come ancoraggi. Tuttavia, in animali di piccole dimensioni come i FIE o i topi, il cranio è molto fragile e non riesce a trattenere con successo le viti.A volte queste viti per le caviglie causano infezione e infiammazione del tessuto. In questo rapporto, proponiamo una nuova applicazione del riempimento dentale destro come sua base di sollevamento per il montaggio. Questo materiale permette un legame diretto con il cranio.Pertanto, non sono necessarie viti di ancoraggio e il campo chirurgico può essere ridotto notevolmente. Il peso totale di una sonda, di una cannula guida, di un alloggiamento e della base di montaggio era inferiore a un grammo. Le esperienze precedenti mostrano che l'effetto adesivo persiste per più di due mesi.Questa tecnica può essere utilizzata anche con altri animali sperimentali, come il pesce, il topo e così via. Due implementazioni su due barre sono state registrate in video. In questa dimostrazione video, per ogni passaggio del protocollo sono state selezionate e utilizzate le riprese migliori.Questi sono separati stereotassici e una camera di recupero controllata estiva. Questi sono cento strumenti per interventi chirurgici. Prime PR a sinistra e micro problema.I suoi accessori sulla destra. Se un programma principale non è disponibile, si può utilizzare al posto di esso una spatolina micro. Questo è un set di resina dentale fotopolimerizzabile.Il primer AP e un agente adesivo sono stati conservati in questi flaconi per farmaci. Abbiamo scelto questo prodotto perché è un sistema autopolimerizzante e a doppia polimerizzazione. Se si scelgono alternative, modificare la procedura dettagliata in base alle istruzioni del prodotto; lo strumento a forma di pistola sul lato sinistro è un'unità di polimerizzazione visibile a destra.È possibile assemblare un'unità luminosa LED fatta a mano come mostrato a destra. Si prega di consultare la documentazione per i dettagli. Successivamente, è stata indotta l'anestesia chirurgica, è stata rimossa ulteriore area chirurgica e la testa è stata fissata al telaio stereotassico.Prima dell'inserimento delle EVA, l'infortunio DI è stato applicato alle estremità delle EVA per prevenire il dolore. La testa dell'animale è stata fissata al telaio e l'angolo della testa è stato regolato adeguatamente. Dopo aver disinfettato la zona chirurgica con iodio, una micropipetta è stata fissata al supporto dell'elettrodo.Questo micropipetta è stato utilizzato per creare un punto di riferimento in un esperimento non riuscito. Il punto Lambda Y è stato utilizzato come punto di riferimento. È stata effettuata una piccola incisione cutanea per esporre il punto di riferimento.Segnare il punto con una micropipetta di vetro riempita con un colorante. Tagliare la cute per esporre la superficie cranica, quindi pulire la superficie dell'osso con un bastoncino di cotone per rimuovere sangue e umidità. È necessaria una superficie pulita e asciutta per garantire un'adesione resistente.Dopo aver individuato la posizione del bersaglio, si è praticata una piccola craniotomia mediante pinzette fini. È possibile utilizzare anche micro-punti o pinzette per ossa per eseguire la craniotomia. Successivamente, il microtubo grezzo è stato rimosso dal supporto e l'ago guida, la cannula o l'elettrodo è stato fissato al supporto.La punta della cannula guida è stata allineata al punto di riferimento e quindi spostata con attenzione fino al punto bersaglio. È stata eseguita la più piccola incisione nel tessuto cerebrale mediante un ago da iniezione da 30 gauge. La guida dell'ago è stata spostata nella posizione bersaglio.La seconda procedura di screening sulla superficie ossea ha previsto l'applicazione del primer Supp. Questo primer è composto dalle parti rigide A e B. Una goccia di ciascuna componente rigida è stata depositata su una capsula e mescolata con un pennello, quindi il primer è stato applicato sull'area di contatto. Anche la superficie della canula guida è stata tamponata. È stato fornito un leggero soffio d'aria per distribuire ed asciugare l'adesivo, quindi si è cambiato il pennello ed è stato applicato un agente adesivo sull'area. Questo agente adesivo è fotosensibile, pertanto deve essere protetto durante la procedura. Anche la superficie della cannula guida è stata tamponata. L'aria mite è stata fornita ed è stata eliminata la luce blu visibile per accelerare la reazione chimica dell'agente di legame. Per proteggere gli occhi dell'operatore, si dovrebbe utilizzare il seme trasparente Orange Coral. Se necessario, agli occhi degli animali non si dovrebbe applicare un allineamento diretto.Un foro in alluminio viene utilizzato per proteggere gli occhi degli animali. Una piccola quantità di resina composita è stata applicata sulla superficie cranica e sulla cannula guida mediante un tappo semplice. Successivamente, la luce blu visibile è stata eliminata per polimerizzare la resina durante il montaggio incrementale.Un agente adesivo è stato applicato prima di ogni montaggio. L'area dell'intervento è stata mantenuta costantemente in posizione corretta a causa della videoregistrazione. Tuttavia, è preferibile evitare una pressione eccessiva perché potrebbe ridurre il periodo di tempo in cui i materiali sono utilizzabili.Il montaggio progressivo e il riposizionamento sono raccomandabili per garantire una reazione completa del regime. È possibile riformare la forma fino a quando non diventa visibile. Sono stati somministrati antibiotici o è stato applicato un trattamento all'area chirurgica per prevenire infezioni.Ora che l'intervento chirurgico era terminato, l'adattatore stereotassico è stato sganciato dal portaelettrodi. L'adattatore stereotassico è stato rimosso. Al suo posto è stata inserita una cannuccia DAMing e l'animale è stato liberato dal telaio stereotassico.Infine, l'animale è stato trasferito nella camera di controllo estiva per il recupero dall'anestesia. Era il giorno successivo all'intervento chirurgico. Rispetto all'applicazione della tradizionale tecnica autopolimerizzante, la tecnica introdotta presenta diversi vantaggi importanti.Prima di tutto, si lega direttamente all'osso. L'acrilico autopolimerizzante può essere fissato all'osso mediante filo metallico, ma non aderisce all'osso. Al contrario, il materiale fotopolimerizzabile può legarsi direttamente all'osso.Aderisce inoltre ad alcuni materiali, inclusi plastica e metalli, se utilizzato insieme a un primer per metalli. Questa caratteristica di adesione a materiali diversi consente un'ampia gamma di applicazioni. In secondo luogo, la facilità di manipolazione: la finestra temporale di lavorazione delle resine convenzionali è relativamente breve.In pochi minuti presenta un'elevata fluidità e non è facile da manipolare rapidamente. Tuttavia, una volta iniziata la reazione chimica, questa viene accelerata dal calore esotermico. Calore e resina induriscono in breve tempo.Le finestre temporali di lavorazione per la resina indurente corretta sono significativamente più ampie e regolabili. Fondamentalmente, le resine rimangono costantemente in uno stato lavorabile dall'inizio fino al momento dell'indurimento ottimale. La terza reazione indurita non genera calore.La reazione di polimerizzazione della resina autopolimerizzante è esotermica. Quando la base di montaggio è spessa, questo calore si accumula e provoca danni. La reazione tissutale della resina fotopolimerizzabile non genera calore ed il materiale è biocompatibile.Il costo dei materiali e delle attrezzature speciali, come l'unità luminosa, può rappresentare un problema. Nel documento supplementare presentiamo un'unità luminosa a LED fatta in casa che non ha un costo elevato. Consultare rapidamente il documento per i dettagli.Questa tecnica è applicabile all'implementazione di un elettrodo o di una microsonda in altri animali sperimentali come pesce, topo, coniglio, gatto e scimmia.

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