Name: Applicazione della Luce cured resina adesiva dentale per montaggio elettrodi o sonde Microdialisi negli esperimenti cronica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 30 s
Description: Impara a utilizzare resine dentali fotopolimerizzabili per fissare elettrodi e sonde di microdialisi nel cranio senza viti. Questo metodo riduce l'infiammazione e migliora la stabilità negli esperimenti cronici di elettrofisiologia.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ringraziamo i nostri colleghi in RIKEN-BSI per il loro supporto e consigli gentilmente proficuo nel corso di questo lavoro. Vorrei esprimere il mio sincero apprezzamento al Prof. Shigemi Mori, il professor G bor Juh tg, Drs. Kiyoji Matsuyama, Katalin AK kesi e rp d Dobolyi che mi ha consigliato di metodo di studio microdialisi durante il corso di laurea presso l&#39;Università Graduate for Advanced Studies, in Giappone. Infine, ringraziamo il Sig. Chris Sarnecky e il Dr. Akitsugu Takasu per il loro supporto per la registrazione video.

Fase 1. Preparazione di impianto sonda <ol><li> Anestesia (non mostrato nel video) Anestetizzare ogni uccello con un&#39;iniezione interperitoneal di ketamina (12,5 mg / kg di peso corporeo) e xilazina (25 mg / kg) miscela per produrre un livello costante di anestesia chirurgica. </li><li> Fissare una testa ad un telaio stereotassico Usa Xylocaine (TM) gelatina per ridurre i dolori locali bar di pressione all&#39;orecchio &#39;. La testa di uccello è fissato in un apparato stereotassico composto da barre di orecchio e di un supporto becco che tiene la testa con un angolo di 45 °. Durante la chirurgia stereotassica per l&#39;impianto, caldo il corpo di uccello da pad chirurgica con controllo termico (temperatura = 34 ~ 36 ° C). </li><li> Disinfettare l&#39;area chirurgica Disinfettare il campo chirurgico con isodine (TM) prima della chirurgia. </li></ol> Fase 2. Posizionamento stereotassico <ol><li> Punto di riferimento di allineamento Allineare sonda fittizio (vetro micropipetta) al Lambda (Y-punto) e il punto Y-point con il colorante pieno di pipette. Rimanenti Destrano-TMR dello studio tracciante ultima è stata utilizzata nel video. </li><li> Incisione della pelle Togliere la pelle ed esporre la superficie del cranio. Poi, pulire la superficie del cranio con tamponi di cotone. </li><li> Posizionamento di cannula fittizio (in direzione orizzontale) Spostare la cannula fittizio al sito di destinazione (AP asse laterale e di coordinamento) </li><li> Craniotomia piccole e incisione della dura madre. Utilizzare una pinza sottile per craniotomia e un sottile ago per iniezione (30 G) per incisioni della dura madre. Poi, pulire la superficie del cranio. </li><li> Posizionamento finale (impianto) di cannula dummy Individuare la punta della cannula guida allo 0,30 mm al di sopra della microdialisi sonda destinata regione di destinazione. Infine, pulire la superficie del cranio di nuovo, perché una superficie asciutta e pulita è necessaria per l&#39;incollaggio dura. </li></ol> Fase 3. Pretrattamento della superficie cranica (La procedura simile per &quot;restauro diretto riempimento&quot; del prodotto dentale deve essere impiegato.) <ol><li> Primer trattamento <ol><li> Mix PRIMAR liquido A con B su un piatto. </li><li> Applicare il composto sulla superficie del cranio con un pennellino. </li><li> Lasciare agire per 30 secondi. </li><li> A secco con flusso d&#39;aria mite. (Non lavare.) </li></ol></li><li> Applicazione di legante <ol><li> Applicare il collante sulla superficie del cranio con un pennellino. </li><li> Applicare una leggera corrente d&#39;aria. (Non lavare.) </li><li> Fotopolimerizzare per 20 secondi. </li></ol></li></ol> Fase 4. Montaggio in resina composita <ol><li> Resina montare con plugger pianura Se un plugger Pianura non è disponibile, un micro-spatola può essere utilizzato. </li><li> Fotopolimerizzazione </li><li> Incrementale di montaggio Incrementale di montaggio si consiglia di assicurare la reazione completa della resina. Per il montaggio incrementale, applicare collante prima di ogni montaggio. </li><li> Stampo la resina composita e fotopolimerizzabile per la finale di indurimento. </li><li> Fine della chirurgia </li></ol> Pulire l&#39;area chirurgica, si applicano agli antibiotici (gentamicina pomata), e rimuovere l&#39;animale dal fuoco stereotassica. Quindi, tenere l&#39;animale in una camera termo-controllati (temperatura = 33-35 ° C) per il recupero post-anestetico. Come mostrato nel video, nessun comportamento anomalo è stato osservato in qualsiasi degli animali il giorno successivo dopo l&#39;intervento.

<ol><li>Adell, A., Artigas, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Brain+microdialysis%3A+Principles+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vivo+Neuromethods%3A+Neuromethods%22%5BJournal%5D)">In vivo Brain microdialysis: Principles and applications.</a> In Vivo Neuromethods: Neuromethods. Boulton, A., Baker, G., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).</li>
<li>Kendrick, K. Microdialysis in large unrestrained animals: neuroendocrine and behavioral studies of acetylcholine, amino acid, monoamine and neuropeptide release in the sheep. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKendrick%2C+K+%22Microdialysis+in+the+Neuroscience%22">Microdialysis in the Neuroscience</a>. Robinson, T., Justice, J., Bateson, A. 7, Elsevier. Amsterdam. 327-348 (1991).</li>
<li>Oakley, B., Schafer, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOakley%2C+B+%22Experimental+Neurobiology%3A+A+laboratory+Manual%22">Experimental Neurobiology: A laboratory Manual</a>. , University of Michigan Press. Ann Arbor. (1978).</li>
<li>Okumura, T., Yamashita, Y., Okanoya, K., Tani, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+the+sensori-motor+nucleus+NIf+in+generation+of+complex+syntactical+song+in+the+Bengalese+Finch+I.+A+Biological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Soc.+Neurosci+Abst%22%5BJournal%5D)">Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese Finch I. A Biological study.</a> Soc. Neurosci Abst. 33, (2007).</li>
<li>Boulton, A., Baker, G. The relation of brain electrical activity to behavior. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBoulton%2C+A+%22In+Vivo+Neuromethods%3A+Neuromethods%22">In Vivo Neuromethods: Neuromethods</a>. Robinson, T., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).</li>
<li>Yamashita, Y., Okumura, T., Okanoya, K., Tani, J. Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese finch. Proceeding of the 2nd International Symposium on Mobiligence, , 101-104 (2007).</li>
</ol>

Gli esperimenti sono stati effettuati in conformità con le linee guida per la sperimentazione animale del cervello Science Institute, RIKEN (RIKEN-BSI) e dell&#39;Istituto animale comitato etico li ha approvati.

Rispetto per l&#39;applicazione dei tradizionali resine acriliche cura di sé, la tecnica ha introdotto una serie di vantaggi importanti: 1. Legame diretto: Acrilico curare sé può essere attaccati all&#39;osso per un po &#39;ma non aderisce alle ossa. Pertanto, le viti di ancoraggio sono tenuti a fissare una base di montaggio (vedi Figura 2A). Al contrario, la resina fotopolimerizzazione possibile legame con l&#39;osso direttamente le viti in modo non sono necessari (Figura 2B). Pertanto, il volume di base di montaggio ...

1A fotografia mostra sonda microdialisi (a), un dado cieco (b) e una cannula guida (c). In questa foto, la cannula guida è circondata da resina dentale che aderisce al cranio direttamente. Foto B mostra un uccello durante la perfusione di droga. Sulla sommità della testa, c&#39;è una sonda microdialisi che è collegato a un tubo tefron fine. Barre di scala = 1 cm per A e 2 cm per B, rispettivamente. <img src="http://www.jove.com/files/249_2008_8_26_3/249_Figure-01.png" /> Figura 1 - Le fotografie di una sonda da microdialisi (A) e un uccello durante la perfusione di droga (B)

applicazione della luce cured resina adesiva dentale per montaggio elettrodi o sonde microdialisi negli esperimenti cronica

Application of Light-cured Dental Adhesive Resin for Mounting Electrodes or Microdialysis Probes in Chronic Experiments

In esperimenti di registrazione cronica, resine dentarie autopolimerizzante acrilici sono stati usati come una base di montaggio di elettrodi o di microdialisi-sonde. Dal momento che questi acrilici non legame con l&#39;osso, le viti sono stati utilizzati come ancore. Tuttavia, in piccoli animali da esperimento, come fringuelli o il mouse, i loro crani sono molto fragili e non possono tenere con successo le ancore. In questo rapporto, proponiamo una nuova applicazione di resine dentali fotopolimerizzabili per la base di montaggio degli elettrodi o sonde di microdialisi in esperimenti cronica. Questo materiale permette legame diretto al cranio. Pertanto, le viti di ancoraggio non sono necessarie e campo chirurgico può essere ridotto notevolmente. Le esperienze passate dimostrano che l&#39;effetto di incollaggio mantiene più di 2 mesi. Finestra di resina convenzionale di tempo in cui i materiali sono flessibili e funzionali è a pochi minuti. Tuttavia, la finestra del tempo di lavoro per questi adesivi dentali è significativamente più ampio e regolabile.

In questo rapporto, proponiamo una nuova applicazione di resine dentali fotopolimerizzabili per la base di montaggio degli elettrodi o sonde di microdialisi in esperimenti cronica. Questo materiale permette legame diretto al cranio.

Applicazione della Luce cured resina adesiva dentale per montaggio elettrodi o sonde Microdialisi negli esperimenti cronica

Negli esperimenti di registrazione cronica, le resine acriliche dentali autopolimerizzanti sono state utilizzate come base di fissaggio per elettrodi o sonde per microdialisi. Poiché queste...

Negli esperimenti cronici di elettrofisiologia o di microdialisi, il cemento dentale autopolimerizzante è stato ampiamente utilizzato come base di montaggio per elettrodi o sonde di microdialisi. Poiché queste resine acriliche non aderiscono alla superficie ossea, sono state utilizzate viti come ancoraggi. Tuttavia, in animali di piccole dimensioni come i FIE o i topi, il cranio è molto fragile e non riesce a trattenere con successo le viti.A volte queste viti per le caviglie causano infezione e infiammazione del tessuto. In questo rapporto, proponiamo una nuova applicazione del riempimento dentale destro come sua base di sollevamento per il montaggio. Questo materiale permette un legame diretto con il cranio.Pertanto, non sono necessarie viti di ancoraggio e il campo chirurgico può essere ridotto notevolmente. Il peso totale di una sonda, di una cannula guida, di un alloggiamento e della base di montaggio era inferiore a un grammo. Le esperienze precedenti mostrano che l'effetto adesivo persiste per più di due mesi.Questa tecnica può essere utilizzata anche con altri animali sperimentali, come il pesce, il topo e così via. Due implementazioni su due barre sono state registrate in

application-light-cured-dental-adhesive-resin-for-mounting-electrodes

Research

Ricerca

JoVE Journal

Biology

Biologia

Il video mostra una procedura per impiantare un'unità di elettrodi multicanale bidirezionale wireless nel cervello di un ratto per registrare e stimolare reti neurali multicanale.

Impianto di un sistema di microelettrodi bidirezionali wireless in un cervello di ratto

Le tecniche tradizionali di fissazione della testa hanno utilizzato telai metallici attaccati al cranio come interfaccia per l'apparato di fissazione della testa. Questo protocollo dimostra una tecnica di fissazione della testa basata sullo stampaggio di resina acrilica senza cornice per compiti comportamentali nei roditori.

Acrilico Resina Molding Based Testa tecnica di fissazione in Roditore

Un colorante raziometrico pH-sensibile è utilizzato in combinazione con microscopio confocale a scansione laser e analisi di immagine digitale per monitorare pH extracellulare in biofilm dentali in tempo reale.

Imaging Raziometrico del pH extracellulare nel dentale biofilm

Presentiamo metodi per la costruzione di elettrodi per registrare simultaneamente l'attività neurale extracellulare e rilasciare più sostanze neuroattive in prossimità dei siti di registrazione nei topi svegli. Questa tecnica consente l'analisi dettagliata di input sinaptici locali putativi al neurone di interesse.

Extracellulare La registrazione di un neurone attività combinata con Microiontophoretic applicazione di sostanze neuroattivi nei topi Awake

I microelettrodi affilati consentono un'accurata caratterizzazione elettrofisiologica dell'output dei fotorecettori e degli interneuroni visivi in Drosophila vivente. Qui mostriamo come utilizzare questo metodo per registrare risposte di tensione di alta qualità delle singole cellule alla stimolazione luminosa controllata. Questo metodo è ideale per studiare l'elaborazione delle informazioni neurali negli occhi composti da insetti.

Metodo elettrofisiologiche per la registrazione intracellulare di tensione Risposte di<em&gt; Drosophila</em&gt; Fotorecettori e Interneuroni a luce stimoli<em&gt; In Vivo</em

Qui, descriviamo un metodo per microdialisi in vivo analizzare il rilascio del glutammato e aspartato nell'ippocampo ventrale dei ratti epilettici e non-epilettici, in combinazione con le registrazioni di EEG. Concentrazioni extracellulari di aspartato e glutammato possono essere correlate con le diverse fasi della malattia.

Microdialisi degli aminoacidi eccitanti durante le registrazioni di EEG in liberi di muoversi

Il restringimento del cemento dentale durante la polimerizzazione sposta la piastra di base. Questo protocollo minimizza il problema creando una base iniziale del cemento dentale che lascia spazio per cementare la piastra di base. Settimane dopo, la piastra di base può essere cementata in posizione su questa impalcatura utilizzando poco nuovo cemento, riducendo così il restringimento.

Utilizzo di baseplating e un miniscopio preancorato con una lente obiettiva per la ricerca transitoria di calcio nei topi

Questo protocollo descrive una procedura per la costruzione di array di microelettrodi in fibra di carbonio per registrazioni elettrofisiologiche croniche e acute in vivo nel topo (Mus musculus) e nel furetto (Mustela putorius furo ) da più regioni del cervello. Ogni passaggio, dopo l'acquisto di fibre di carbonio grezze per l'impianto di array di microelettrodi, è descritto in dettaglio, con particolare attenzione alla costruzione di array di microelettrodi.

Costruzione e implementazione di array di microelettrodi in fibra di carbonio per registrazioni in vivo croniche e acute

Qui presentiamo un sistema di impianto di sonde leggero ed economico per l'elettrofisiologia cronica nei roditori, ottimizzato per la facilità d'uso, il recupero della sonda, la versatilità sperimentale e la compatibilità con il comportamento.

L'impianto DREAM: un sistema implantare leggero, modulare ed economico per l'elettrofisiologia cronica in topi con testa fissa e a comportamento libero

Abbiamo sviluppato un approccio semplificato ed economico per la fabbricazione di elettrodi e condotto registrazioni di segnali su più regioni in topi che si muovono liberamente. L'utilizzo dell'optogenetica, insieme all'elettrofisiologia multiregionale e alla registrazione del segnale del calcio, ha permesso la rivelazione delle attività neuronali in tutte le regioni nel modello di accensione delle crisi.

Un metodo integrato per la creazione di optrodi elettrofisiologici flessibili e convenienti per la registrazione in vivo multi-regione

Questo protocollo descrive un metodo chirurgico a due fasi per creare una grande finestra cranica richiudibile e conservatrice della durata nei topi. Questa tecnica consente registrazioni elettrofisiologiche croniche e multimodali da reti cerebrali profonde distribuite, come la Default Mode Network, nell'arco di diverse settimane.

Protocollo chirurgico per una grande finestra cranica richiudibile che consente registrazioni elettrofisiologiche longitudinali e multimodali della rete in modalità predefinita del mouse

Impara a utilizzare resine dentali fotopolimerizzabili per fissare elettrodi e sonde di microdialisi nel cranio senza viti. Questo metodo riduce l'infiammazione e migliora la stabilità negli esperimenti cronici di elettrofisiologia.

Applicazione della Luce cured resina adesiva dentale per montaggio elettrodi o sonde Microdialisi negli esperimenti cronica

Esplora altri video