Name: Xenotrapianto ortotopico di Human-luciferasi con tag cellule maligne del tumore della guaina dei nervi periferici per In vivo Test di agenti terapeutici candidati (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-07T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Scopri il xenotrapianto ortotopico di cellule tumorali maligne della guaina dei nervi periferici con tag luciferasi in topi immunodeficienti. Questo metodo consente di testare agenti terapeutici candidati in vivo mediante imaging bioluminescente.

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Questo lavoro è stato sostenuto dal National Institute of Neurological Diseases and Stroke (R01 NS048353 a SLC), il National Cancer Institute (R01 CA122804 a SLC, R01 CA134773 a Kevin A. Roth e SLC e CA13148-35 a KRZ) e il Dipartimento di difesa (X81XWH-09-1-0086 a SLC). Fondi di sostegno per le operazioni di impianto degli animali di piccola Imaging del Comprehensive Cancer Centre UAB condivise sono state fornite da un tecnico concedere NSC Core (P30 CA13148-35; E. Pernice, PI). Ringraziamo il Alabama Neuroscience Blueprint core Center (P30 NS57098) e UAB Neuroscienze Nucleo Center (P30 NS47466) per la loro assistenza. I contenuti sono di esclusiva responsabilità degli autori e non rappresentano necessariamente il punto di vista ufficiale del National Institutes of Health e del Dipartimento della Difesa.

<ol><li>Rosenberg, M. P., Bortner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+transgenic+and+knockout+animal+models+should+be+used+%28for+drug+efficacy+studies+in+cancer%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Met.+Rev%22%5BJournal%5D)">Why transgenic and knockout animal models should be used (for drug efficacy studies in cancer).</a> Cancer Met. Rev. 17, 295-299 (1999).</li>
<li>Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+models+are+necessary+to+predict+therapy+of+transplantable+tumors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Met.+Rev%22%5BJournal%5D)">Orthotopic models are necessary to predict therapy of transplantable tumors in mice.</a> Cancer Met. Rev. 17, 279-284 (1999).</li>
<li>Carroll, S. L., Ratner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+does+the+Schwann+cell+lineage+form+tumors+in+NF1%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">How does the Schwann cell lineage form tumors in NF1?</a> Glia. 56, 1590-1605 (2008).</li>
<li>Woodruff, J. M., Kourea, H. P., Louis, D. N., Scheithauer, B. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWoodruff%2C+JM+%22Pathology+and+Genetics+of+Tumours+of+the+Nervous+System%22">Pathology and Genetics of Tumours of the Nervous System</a>. Kleihues, P., Cavenee, W. K. , IARC Press. Lyon. 172-174 (2000).</li>
<li>DeClue, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+growth+factor+receptor+expression+in+neurofibromatosis+type+1-related+tumors+and+NF1+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Epidermal growth factor receptor expression in neurofibromatosis type 1-related tumors and NF1 animal models.</a> J. Clin. Invest. 105, 1233-1241 (2000).</li>
<li>Byer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tamoxifen+inhibits+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+growth+via+an+estrogen+receptor-independent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">Tamoxifen inhibits malignant peripheral nerve sheath tumor growth via an estrogen receptor-independent mechanism.</a> Neuro-Oncology. , Forthcoming (2010).</li>
<li>Zinn, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+bioluminescence+imaging+in+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Noninvasive bioluminescence imaging in small animals.</a> ILAR J. 49, 103-115 (2008).</li>
<li>Wu, J. C., Sundaresan, G., Iyer, M., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+optical+imaging+of+firefly+luciferase+reporter+gene+expression+in+skeletal+muscles+of+living+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Therapy%22%5BJournal%5D)">Noninvasive optical imaging of firefly luciferase reporter gene expression in skeletal muscles of living mice.</a> Mol. Therapy. 4, 297-306 (2001).</li>
<li>Luker, G. D., Leib, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luciferase+real-time+bioluminescence+imaging+for+the+study+of+viral+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Luciferase real-time bioluminescence imaging for the study of viral pathogenesis.</a> Methods Mol. Biol. 292, 285-296 (2005).</li>
<li>Dahlberg, W. K., Little, J. B., Fletcher, J. A., Suit, H. D., Okunieff, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiosensitivity+in+vitro+of+human+soft+tissue+sarcoma+cell+lines+and+skin+fibroblasts+derived+from+the+same+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Radiat.+Biol%22%5BJournal%5D)">Radiosensitivity in vitro of human soft tissue sarcoma cell lines and skin fibroblasts derived from the same patients.</a> Int. J. Radiat. Biol. 63, 191-198 (1993).</li>
<li>Badache, A., DeVries, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibrosarcoma-derived+Schwann+cells+overexpress+platelet-derived+growth+factor+%28PDGF%29+receptors+and+are+induced+to+proliferate+by+PDGF%5BTitle%5D)+AND+%22BB.+J.+Cell.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Neurofibrosarcoma-derived Schwann cells overexpress platelet-derived growth factor (PDGF) receptors and are induced to proliferate by PDGF.</a> BB. J. Cell. Physiol. 177, 334-342 (1998).</li>
<li>Muir, D., Neubauer, D., Lim, I. T., Yachnis, A. T., Wallace, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorigenic+properties+of+neurofibromin-deficient+neurofibroma+Schwann+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Tumorigenic properties of neurofibromin-deficient neurofibroma Schwann cells.</a> Am. J. Pathol. 158, 501-513 (2001).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Il metodo ortotopico dettagliati xenotrapianto qui presentato è quello che abbiamo sviluppato utilizzando ST88-14 MPNST cellule, una linea che è ampiamente utilizzato negli studi di questi NF1 associate a tumori della guaina dei nervi periferici. Tuttavia, questa metodologia è facilmente adattabile per studi preclinici con altre linee cellulari MPNST. Per esempio, abbiamo anche effettuato ortotopico xenotrapianto con STS-26T 10 celle, una linea derivata da un sporadici MPNST e T265-2c 11 celle, che sono derivati ​​da un NF1 associate MPNST, con un successo simile a quello che abbiamo osservato con ST88 -14 cellule. Detto questo, si segnala che le condizioni esatte che descriviamo qui per ortotopico xenotrapianto di ST88-14 le cellule non possono essere direttamente adottata per l&#39;innesto delle linee MPNST altri. Invece, i parametri chiave della metodologia deve essere empiricamente determinato per ogni linea cellulare. Questi parametri includono il numero di cellule MPNST inizialmente innestato, il tempo concesso per lo sviluppo del trapianto e, in misura minore, il volume in cui le cellule tumorali vengono iniettate. Per stabilire questi parametri per una nuova linea, abbiamo gruppi di topi innesto (5 topi per gruppo) con 03-5 ottobre x 10 6 cellule tumorali, controllando due concentrazioni di cellule per ogni ordine di grandezza (cioè, 10 3 celle, 5 x 10 3 celle, 10 4 celle, 5 x 10 4 cellule, ecc.) Un maggior numero di cellule tumorali (&gt; 10 6) deve essere iniettato in un volume più grande, abbiamo scoperto che fino a 5 ml può essere iniettato senza perdita di cellule del nervo innestato. Abbiamo anche scoperto che non più di 5 x 10 6 cellule tumorali per 5 ml di volume può essere iniettato come sospensioni dense diventano sempre più inclini a taglio che uccide le cellule tumorali. Seguiamo questi topi fino ad almeno tre animali all&#39;interno di ogni gruppo hanno tumori palpabili, a quel punto abbiamo porre termine a tale gruppo ed esaminare istologicamente il coraggio di confermare la crescita del trapianto. Ovviamente, il tempo necessario per arrivare a questo punto sarà diverso, a seconda del numero di cellule iniettate, in generale, stiamo cercando una concentrazione di cellule che raggiungerà la massima ammissibile di crescita del tumore entro 30-60 giorni. Crescita più rapida può rendere difficile da raggiungere concentrazioni terapeutiche efficaci prima della risoluzione della sperimentazione e / o impedire la raccolta di datapoint sufficiente di imaging bioluminescenza nel corso degli esperimenti. Un corso di tempo più lungo di 60 giorni permette di regolare parametri sperimentali ingombranti e prolunga inutilmente la durata degli esperimenti previsti. Infine, vorremmo anche notare che abbiamo utilizzato questa metodologia ortotopico xenotrapianto con ST88-14 cellule trapiantate in topi NIH III per dimostrare l&#39;efficacia terapeutica di tamoxifene 6. Una descrizione dettagliata dei metodi che usano abitualmente per valutare gli effetti degli agenti terapeutici candidato su xenotrapianti ortotopico si trovano in quel manoscritto. E &#39;stato anche dimostrato che le cellule neurofibroma può essere innestato con successo in nervo periferico 12, suggerendo che, con modifiche, le procedure descritte in questo protocollo può essere utilizzato per eseguire studi preclinici con agenti terapeutici diretti contro candidato neurofibromi.

<table><tbody><tr><td>Topi SCID Foxchase outbred</td><td>Charles River Laboratories</td><td>#236</td><td></td></tr><tr><td>Topi NIH III</td><td>Taconic</td><td>#NIHBNX</td><td></td></tr><tr><td>Topi NOD-SCID&amp;#947;</td><td>Jackson Laboratory</td><td>#005557</td><td></td></tr><tr><td>Cell Stripper</td><td>Fisher Scientific</td><td>25-056-cl</td><td></td></tr><tr><td>Colla chirurgica Vetbond</td><td>3M</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>Siringa Hamilton</td><td>Hamilton Co</td><td>#80030</td><td>volume di 10 &amp;#x03BC;L</td></tr><tr><td>Aghi per siringa Hamilton</td><td>Hamilton Co</td><td>#7803-05</td><td>33 Ga., 0,5 pollici, PT4 (realizzati su misura)</td></tr><tr><td>Contrassegni auricolari</td><td>National Band and Ear Tag Co.</td><td>1005-1</td><td></td></tr><tr><td>Unguento oftalmico</td><td>Dechra</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr></tbody></table>

xenotrapianto ortotopico di human-luciferasi con tag cellule maligne del tumore della guaina dei nervi periferici per in vivo test di agenti terapeutici candidati

Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

Sebbene in vitro schermi sono essenziali per l&#39;identificazione iniziale di agenti terapeutici candidato, una rigorosa valutazione della capacità del farmaco di inibire la crescita tumorale deve essere eseguito in un modello animale adeguato. Il tipo di modello animale che è meglio per questo scopo è un argomento di discussione intensa. Alcune evidenze indicano che gli studi preclinici hanno esaminato gli effetti della droga sui tumori che insorgono in topi transgenici sono più predittivi di outcome clinico 1 e così gli agenti candidato terapeutici sono spesso testati in questi modelli. Purtroppo, i modelli transgenici non sono disponibili per molti tipi di tumore. Inoltre, i modelli transgenici hanno spesso altre limitazioni come ad esempio le preoccupazioni su come anche i modelli del mouse tumore sua controparte umana, penetranza incompleta del fenotipo tumorale e l&#39;incapacità di prevedere quando i tumori si sviluppano. Di conseguenza, molti ricercatori utilizzano modelli di xenotrapianto (innestato cellule tumorali umane in topi immunodeficienti) per gli studi preclinici, se del caso modelli tumorali transgenici non sono disponibili. Anche se i modelli transgenici sono disponibili, sono spesso in partnership con modelli di xenotrapianto di questi ultimi facilitare la determinazione rapida degli intervalli terapeutici. Inoltre, questa partnership permette un confronto tra l&#39;efficacia del farmaco in tumori transgenici e genuini cellule tumorali umane. Storicamente, xenotrapianto è stata spesso eseguita iniettando cellule tumorali per via sottocutanea (xenotrapianti ectopica). Questa tecnica è rapida e riproducibile, poco costoso e permette quantificazione continuo di crescita del tumore durante il periodo terapeutico 2. Tuttavia, lo spazio sottocutaneo non è il microambiente normale per la maggior parte neoplasie e quindi i risultati ottenuti con xenotrapianto ectopica può essere fuorviante a causa di fattori quali l&#39;assenza di organo-specifica espressione del tessuto ospite e geni del tumore. E &#39;stato pertanto fortemente raccomandato che ectopica studi innesto essere sostituiti o integrati da studi in cui si innestano le cellule tumorali umane nel loro tessuto di origine (xenotrapianto ortotopico) 2. Purtroppo, l&#39;attuazione di questa raccomandazione è spesso ostacolato dal fatto che ortotopico metodologie xenotrapianto non sono ancora stati sviluppati per molti tipi di tumore. I tumori maligni della guaina dei nervi periferici (MPNSTs) sono sarcomi molto aggressivi che si verificano sporadicamente o in associazione con neurofibromatosi di tipo 1 3 e più comunemente sorgono nel nervo sciatico 4. Qui si descrive un metodo tecnicamente semplice, in cui lucciola luciferasi-tagged MPNST cellule umane sono orthopically trapiantate nel nervo sciatico di topi immunodeficienti. Il nostro approccio per valutare il successo della procedura di trapianto nei singoli animali e la successiva randomizzazione non polarizzato in gruppi di studio è anche discusso.

Un metodo affidabile per l&#39;innesto luciferasi-tagged umani maligni dei nervi periferici cellule tumorali della guaina nel nervo sciatico di topi immunodeficienti è descritto. L&#39;uso di immagini bioluminescenza per dimostrare corretta predisposizione degli innesti del tumore ed i criteri per la segregazione casuale di animali in gruppi di studio vengono anche discussi.

Xenotrapianto ortotopico di Human-luciferasi con tag cellule maligne del tumore della guaina dei nervi periferici per In vivo Test di agenti terapeutici candidati

Sebbene gli screening in vitro siano essenziali per l'identificazione iniziale di agenti terapeutici candidati, è necessaria una valutazione rigorosa della capacità del farmaco di...

L'obiettivo generale di questa procedura è determinare se un agente terapeutico candidato inibisce efficacemente la crescita di cellule M-P-N-S-T innestate nel nervo sciatico di topi immunodeficienti. Questo viene ottenuto rimuovendo innanzitutto le cellule tumorali da un flacone per colture cellulari, lavandole e risospendendole alla concentrazione appropriata. Il secondo passaggio della procedura consiste nell'esporre chirurgicamente il nervo sciatico e quindi iniettare nel nervo 5.000 cellule.Il passaggio successivo consiste nel determinare il successo dell'innesto mediante imaging in vivo basato sulla luce, randomizzando i CIN in gruppi di studio e iniziando la terapia con l'agente terapeutico in esame. L'ultimo passaggio della procedura prevede il prelievo dei tumori a 30 giorni dall'innesto e l'analisi degli effetti che l'agente terapeutico in esame ha avuto sul tumore. In definitiva, è possibile ottenere risultati che mostrano se l'agente terapeutico ha ridotto la crescita tumorale attraverso metodi come il confronto dei pesi tumorali, l'analisi dei tassi relativi di proliferazione mediante immunoistochimica per KI 67 e la valutazione dei livelli di morte cellulare tumorale nei topi di controllo e trattati mediante saggi TUNEL.Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come il trapianto sottocutaneo, è che riproduce l'ambiente microscopico normale, modellando in modo più accurato la crescita di M-P-N-S-T. A dimostrare questa tecnica sarà Amy Turk, un'assistente di laboratorio del mio gruppo. I topi immunodeficienti non nudi vengono preparati il giorno precedente il trapianto. Utilizzare un rasoio elettrico per rimuovere il pelo da un topo anestetizzato, lavorando su un tappetino riscaldato per mantenere la temperatura corporea.Utilizzare un agente depilatorio chimico per rimuovere eventuali peli residui. Una volta rimosso tutto il pelo, posizionare il topo su un tappetino riscaldante all'interno di una gabbia di isolamento senza lettiera fino al completo recupero. Nel giorno del trapianto, centrifugare le cellule a 3000 giri al minuto per cinque minuti.Rimuovere con attenzione il surnatante e risospendere il pellet cellulare in DMEM 10 senza puromicina a una concentrazione finale di cinque volte 10 alla terza cellule per tre microlitri. Mantenere le cellule sul ghiaccio fino al momento dell'uso. Per iniziare, posizionare un animale anestetizzato su un tappetino riscaldante e applicare un unguento oftalmico su ciascun occhio.Applicare un marchio auricolare con un numero identificativo univoco all'orecchio destro di ciascun topo. Per facilitare l'identificazione durante tutto lo studio, posizionare l'animale in posizione prona e allargare le zampe posteriori. Coprire il topo con un telo sterile ed esporre una finestra chirurgica nel sito in cui avverrà il trapianto.Applicare il Betadine sulla sede chirurgica utilizzando un applicatore di cotone, partendo dal centro del fianco e spiraleggiando gradualmente verso i bordi della finestra chirurgica. Successivamente, applicare l'etanolo al 70% sulla sede chirurgica nello stesso modo. Ripetere altre due volte applicazioni consecutive di Betadine seguite da etanolo.Rimuovere le cellule dal ghiaccio e risospendere delicatamente le cellule sedimentate, agitando leggermente con un vortex o battendo delicatamente il tubo. Utilizzare una pipetta per prelevare 3,2 microlitri della sospensione cellulare e dispensarli su un pezzo di paraform. Aspirare 3 microlitri della sospensione cellulare in una siringa Hamilton da 10 microlitri.Dotato di un ago da 33 gauge. Mantenere le cellule e la siringa contenente le cellule sul ghiaccio fino al momento dell'uso. Utilizzare un manico di bisturi numero quattro, dotato di una lama di bisturi numero 22, per praticare un'incisione attraverso la cute della regione flank appena al di sotto e parallela al femore.Aprire l'incisione cutanea con la pinza chirurgica per esporre il muscolo sottostante. Utilizzare un paio di forbici a punta fine per effettuare una dissezione ottusa attraverso la fascia che corre lungo la gamba ed esporre il nervo sciatico, situato al di sotto di una struttura lineare bianca dello spessore di un filo grosso, lavorando al microscopio. Usare un paio di pinze curve a punta fine per dissezionare con attenzione al di sotto del nervo, staccandolo delicatamente dal muscolo sottostante.Lasciare la pinzetta in posizione per mantenere il nervo sollevato e accuratamente isolato. Inserire l'ago della siringa Hamilton nel nervo, cercando di mantenere l'angolo di iniezione il più parallelo possibile al nervo, in modo da non perforarlo fino al lato inferiore. Una volta che l'ago è correttamente posizionato all'interno del nervo, allentare la tensione prodotta dalla pinzetta ed iniettare lentamente le cellule nell'arco di 45-60 secondi. Un'iniezione lenta è essenziale per evitare un rigurgito delle cellule tumorali, che comporterebbe la loro perdita.Dopo aver iniettato con successo tutte le cellule, ritirare lentamente l'ago per minimizzare la perdita del materiale iniettato. Al termine dell'iniezione, rimuovere la pinza chirurgica e le pinzette. Quindi riposizionare con attenzione il nervo nella sua sede originale.Chiudere l'incisione con colla chirurgica vet bond, tenendola unita con pinze per circa 20 secondi per permettere alla colla di asciugarsi. Posizionare l'animale in una gabbia riscaldata priva di lettiera fino al completo recupero. Monitorare lo stato di salute dei topi.I topi vengono rimossi quotidianamente dallo studio. Se il carico tumorale supera il 10% del peso corporeo normale dell'animale o la perdita di peso supera il 20%, per determinare il successo della procedura eseguire un'immagine bioluminescente un giorno e tre giorni dopo il trapianto. Iniettare un topo con 2,5 milligrammi di luciferina e posizionare l'animale anestetizzato sulla piattaforma riscaldata per l'acquisizione delle immagini.L'emissione di luce da parte della luciferasi della lucciola espressa dal tumore viene rilevata 10 minuti dopo l'iniezione del substrato. Utilizzando il software di Xeno Gen, impostare i tempi di acquisizione delle immagini su un intervallo compreso tra un secondo e 10 minuti. Successivamente, scattare fotografie in bianco e nero dei topi e applicare una pseudocolorazione.La scala della bioluminescenza è sovrapposta a queste immagini per fornire una misura dell'intensità dell'emissione luminosa. Per essere idonei all'inclusione in un gruppo di prova preclinica, i topi devono presentare un segnale di bioluminescenza rilevabile sia un giorno sia tre giorni dopo il trapianto, e l'intensità del segnale deve aumentare tra il primo e il terzo giorno. Qui viene mostrato un tipico aumento progressivo della bioluminescenza osservato dal primo al diciottesimo giorno dopo il trapianto in un xeno-trapianto ortotopico correttamente stabilito in un topo nudo.Si noti la somiglianza tra i segnali rilevati nella regione di interesse di topi diversi. La reimaging effettuata a 10 e 18 giorni dal trapianto mostra che i segnali bioluminescenti aumentano progressivamente nel sito del trapianto nei singoli topi. La quantificazione dei segnali bioluminescenti osservati da uno a 24 giorni dopo il trapianto mostra che, sebbene questi segnali aumentino progressivamente, la crescita tumorale accelera in modo marcato nelle fasi successive del periodo di studio.Data la crescita aggressiva di M pns ts, le cellule tumorali trapiantate spesso superano le barriere normali del nervo e invadono i tessuti adiacenti. Questa microfotografia del sito di trapianto mostra la crescita tumorale e l'invadenza focale nel muscolo scheletrico adiacente. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in un topo in 10 minuti se effettuata correttamente.

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