Name: Legatura dellarteria coronarica e di iniezione intramiocardico in un modello murino di infarto (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 41 s
Description: Impara le tecniche microchirurgiche di legatura dell'arteria coronarica e iniezione intramiocardica nel cuore del topo per studiare l'ischemia e il danno cardiaco. Questi metodi permettono di valutare l'infarto e i processi di recupero.

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Vorrei ringraziare il Dipartimento di Ricerca e Studi Laurea per fornire fondi per sostenere la mia ricerca e del Dipartimento di Medicina comparativa per la vigilanza e l&#39;assistenza. Vorrei anche a riconoscere il Dipartimento di Fisiologia per il loro sostegno e la guida così come gli studenti e tecnici nel mio laboratorio per il loro aiuto. Infine, vorrei ringraziare il mio post-dottorato mentore, il Dr. Charles E. Murry, per l&#39;opportunità di formazione durante i quali ho imparato il microchirurgia del mouse.

<ol><li> Sterili strumenti chirurgici (Tabella 1) e 3 "applicatori di cotone con punta sono disposti su un underpad sterile. Lo sterilizzatore tallone (Germinator 500) è acceso. </li><li> Topi (età:&gt; 6 settimane, peso:&gt; 18g) sono anestetizzati con una iniezione ip di 20μl / g BW di tribromoethanol (250mg/kg, durata - circa 40 minuti). </li><li> Quando i topi non rispondono alla punta pizzico, un lubrificante sterile (Tears rinnovata) è applicato agli occhi per proteggerli dalla disidratazione e il lato sinistro del petto è rivestita con depilatorio (ad esempio Nair) per rimuovere pelo dalla pelle. </li><li> Il depilatoria viene lavato via con acqua corrente calda e betadine / alcool tampone è usato per disinfettare l'area chirurgica. </li><li> Il mouse è posizionato su una calda pad DeltaPhase isotermici che è fissato a un tavolo di plexiglass. Ogni arto è immobilizzato con del nastro e un filo spesso viene posta orizzontalmente sotto i denti superiori per tenere la mascella superiore al suo posto. </li><li> Il tavolo è in posizione verticale e una luce a fibre ottiche è brillato direttamente sulla regione del collo per l'illuminazione transesofagea. Ciò richiede un posizionamento preciso in modo che l'apertura della gola è visto come un orifizio ben illuminato, permettendo così la trachea da visualizzare per facilitare l'inserimento del tubo in PE. </li><li> Il tubo viene poi collegato al ventilatore (collegato ad un 95% O 2 / 5% di CO 2) per amministrare costante ventilazione a pressione positiva (TOPO ventilatore; tasso di 125 atti / min, picco di pressione inspiratoria 10-12 cm H 2 O; nota * : le impostazioni variano a seconda ceppo e sesso 1-3). Una volta che la ventilazione è confermata dai movimenti del torace sincrono, la connessione è fissato per il pad con del nastro adesivo per evitare estubazione durante l'intervento. </li><li> Utilizzando pinze a denti per tirare la pelle in alto e lontano dal petto, una lama # 10 bisturi sterile collegato ad un manico # 3 bisturi viene utilizzato per fare un'incisione 1,5 centimetri in parallelo pelle allo sterno. </li><li> Curve microscissors Vanna sono usati per tagliare i muscoli pettorali e fare un piccolo buco nel muscolo intercostale. </li><li> Dritto, microscissors smussato sono usati per tagliare a 3 costole. </li><li> Uno speculum 9 millimetri oftalmico pediatrica è utilizzata per ritirare la gabbia toracica. </li><li> Utilizzando la pinza curva, tirare il pericardio lontano dal cuore e usare la pinza dentata di strappare delicatamente aperta. </li><li> Utilizzando la porta aghi Castroviejo, un punto di 6 millimetri conico 3 / 8 fili degli aghi del 8-0 sutura polietilene sotto discendente anteriore dell'arteria coronarica (lungo l'asse del cuore) perpendicolare ad esso. <ol><li> Per una legatura temporanea che può essere rimossa per riperfusione a tempo, una sterile 0,5-1cm pezzo di PE90 è posto sul cuore in parallelo per l'arteria coronaria. La sutura, che è stato prima in loop sotto l'arteria coronaria, viene poi legata al tubo. Nel momento in cui deve essere rilasciata, la legatura è allentato. Questo può essere ripetuto a piacere e il tempo di occlusione / riocclusione può essere modificata 4. A seconda della lunghezza del protocollo e il tipo di anestesia utilizzato, l'integrazione può essere necessario. </li><li> Per una occlusione permanente, la legatura cucita sotto l'arteria coronaria è semplicemente legato. Sbiancamento e discinesia sono evidenti e l'estremità lunga della sutura viene tagliato 5-10. </li><li> Per l'iniezione intramiocardico (s), una siringa sterile Hamilton con un ago sterile da 30 gauge smussato è introdotto nella base del cuore sopra l'area di lesione sul lato destro della legatura. L'ago viene poi avanzate nella zona di lesione e ritirata leggermente in modo che la smussatura può essere visto circa nella zona di confine. Alcune delle soluzione nella siringa (2-3μl) viene iniettato nel cuore e l'ago viene tenuto in posizione. La siringa è ritirato un altro 1-3mm e il resto della soluzione viene iniettata. La siringa è tenuto in posizione fino a quando il bleb che è formato dalla soluzione dissipa. L'ago viene poi rimossa. Se non vi è alcun sanguinamento, un cotton-applicatore con la punta è leggermente premuto sul sito inserimento dell'ago fino a quando il sanguinamento si ferma 5-7. </li></ol></li><li> Una volta che le manipolazioni del miocardio sono state completate, la costola divaricatori vengono rimosse e la cavità toracica è chiuso con 2-3 punti di sutura materasso utilizzando 6-0 sutura surgipro. </li><li> Due-tre punti di sutura materasso sono poi messi a chiudere i muscoli pettorali, 1-3 gocce del 0,25% 1:10 marcaine in soluzione salina sterile (mouse 0.1ml/25g) viene applicato al muscolo e poi 2-3 suture materassi sono fatti per chiudere la pelle. </li><li> Il mouse viene rimosso dal ventilatore. Una volta respirazione ritmica, rapido, poco profondo è verificata, il mouse può essere estubato. </li><li> 0,5 ml soluzione salina calda sterile viene iniettata nello spazio sottocutaneo dorsale e il mouse è posizionato su un blocco del riscaldamento in una gabbia fino a quando non riprende la mobilità (minimo 1 ora). </li><li> Per gli esperimenti di sopravvivenza, i topi sono rimessi nelle loro gabbie e restituita al vivaio fino al momento del sacrificio. Durante i primi 2 giorni, il cibo è inumiditoimmessi sul pavimento della gabbia per facilitare l'alimentazione (in modo da non dover arrivare fino che possono provocare dolore) e la buprenorfina deve essere somministrato ogni 6-12h. Post-operatorio comprende anche il monitoraggio quotidiano per la prima settimana per verificare la mobilità adeguata, governare, e le abitudini alimentari. </li><li> Gli strumenti chirurgici sono puliti con etanolo e inserita nel tallone sterilizzatore prima dell'intervento successivo. </li><li> Al momento del sacrificio, i topi vengono anestetizzati con sodio pentobarbital (65mg/ml; 55-65 mg / kg). Quando un piano adeguato di anestesia viene raggiunto, la cavità toracica è aperta. </li><li> Mentre il cuore batte ancora, una siringa con un ago 23 gauge contenente cloruro di potassio a freddo (KCl, 30 mm) o 2,3-butanedione monoxime (BDM; 10mM) viene utilizzato per forare la regione posteriore basale del ventricolo e la soluzione è lentamente iniettato nella camera fino a quando il cuore è arrestato in diastole. </li><li> Una volta che il cuore è rimosso, una siringa contenente PBS viene utilizzato per perfusione retrograda lavare il cuore per rimuovere il sangue che rimane. Per gli studi acuti, alla fine del periodo di riperfusione, il LAD è ri-legatura nel punto di occlusione originale. Una soluzione contenente 1% di Evan blu viene iniettato nell'aorta. Una volta che il cuore è estratto, è tagliato trasversalmente in 3 sezioni di uguale spessore, incubate in 1% 2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro, e ripreso per le analisi morfometriche 11. Per gli studi cronici, il cuore viene poi immerso in fissativo, poi elaborati e integrati secondo le procedure di routine. Le diapositive possono essere colorati istologicamente e ripreso per l'analisi morfometrica (utilizzando Scion, NIH immagine J, o Image Pro Plus) 9,10,12. </li></ol> Rappresentante dei risultati: Se fatto correttamente, i tassi di sopravvivenza nei topi (maschi: età 8-10 settimane, 22-28g; femmine: età 10-12 settimane, 20-26g) sono: oltre il 90% in acuto ischemia / riperfusione e precondizionamento ischemico esperimenti, oltre 85% in studi permanente legatura dell'arteria, e circa il 80% per iniezioni intramiocardiche. Dal trauma precoce è più visibile da cambiamenti metabolici piuttosto che strutturale, la determinazione dimensione infartuale in ischemia / riperfusione e ischemico esperimenti precondizionamento viene eseguita infondendo l'1% di Evan colorante blu in aorta che perfusione del cuore che non è fornito dal LAD ( Figura 1A). Una volta che il cuore viene rimosso e trasversalmente tagliato a metà, il tessuto è incubato in 1% di soluzione di cloruro di 2,3,5-trifeniltetrazolio per misurare la dimensione dell'infarto (Figura 1B). Le aree sono misurati utilizzando Scion o NIH software di imaging che può essere calibrato utilizzando un micrometro fotografato allo stesso ingrandimento. Questi numeri sono usati per calcolare l'area a rischio / ventricolo sinistro e infarto dimensioni / area a rischio 11. Differenze di ceppo può portare a variazioni di peso corporeo e le dimensioni del cuore e quindi occorre prestare attenzione a queste misure per normalizzare il peso del cuore, peso corporeo, o la lunghezza della tibia ai fini comparativi. Permanente risultati legatura dell'arteria lordo cambiamenti strutturali quali necrosi, parete assottigliamento e dilatazione della camera. Confronto degli effetti del trattamento e / o temporali dell'infarto e necrosi rispetto al ventricolo sinistro, zona camera, parete sinistra del setto e spessore della parete ventricolare libera nel modello occlusione permanente (Figura 2A) può essere misurata utilizzando Scion o NIH di imaging software. Colorazione del collagene con picrosirius rosso / verde veloce (Figura 2B) può essere utilizzato per misurare la fibrosi insterstitial che è correlato agli indici funzionali di 8-10 irrigidimento della parete. L'immagine in Figura 3 rappresenta la distribuzione della soluzione 6ul (Evan blu) iniettato nella zona di confine del cuore dopo legatura dell'arteria permanente. Si noti che si procede nella direzione della lesione così come verso la base e anche transmurally. <img src="/files/ftp_upload/2581/2581fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. A. Evan 's Blu iniettata nell'aorta prima escissione. Questa immagine mostra le regioni perfusi del cuore (macchiato) e la zona occlusa (senza macchia). Evan B.' s Blue e colorazione TTC acuta da ischemia / riperfusione. Questa è un'immagine rappresentativa (20x) che mostra la distribuzione colorante blu che macchiato le regioni non occluse così come colorazione TTC del tessuto metabolicamente vitali (rosso). Aree necrotiche non macchia e così rimangono pallidi (descritto). <img src="/files/ftp_upload/2581/2581fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. A. ematossilina e eosina. Questa è un'immagine rappresentativa (20x) della colorazione H &amp; E di un cuore topo tagliati trasversalmente in tutta la regione infarto a 4 giorni dopo l'infarto miocardico (20x). Il * denota necrosi dei tessuti, le frecce indicano tessuto di granulazione, RV = ventricolo destro e ventricolo LV = sinistra. B. Picrosirius rosso e veloce verde macchia. Si tratta di unrappresentante immagine (20x) di picrosirius rosso / veloce colorazione verde di una sezione del cuore del mouse a 4 settimane post-infarto miocardico. Il verde citoplasma macchie e le fibre di collagene sono rossi. <img src="/files/ftp_upload/2581/2581fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Blu di Evan distribuzione colorante macchia seguenti 6ul iniezione intramiocardico. Questa è un'immagine rappresentativa che mostra la distribuzione globale e transmurale della tintura blu di Evan tutto il cuore segue 6ul iniezione intramiocardico alla zona di confine subito dopo la legatura dell'arteria coronaria (12x).

Questo protocollo è stato approvato dal animale ed è conforme alle linee guida e regolamenti stabiliti dalla cura degli animali e del Comitato Istituzionale Usa alla East Carolina University.

Malattia coronarica continua ad essere un epidemiologico e fiscalmente rilevante problema di sanità pubblica. Notevole la ricerca di base è ancora necessaria per capire i meccanismi con cui lesioni e rimodellamento procedere e come potenziali terapie possono modulare questi processi, se si vuole essere sviluppate per uso clinico. Roditori sono più comunemente utilizzati e la vasta gamma di topi geneticamente modificati, rende disponibile questa specie un modello più attraente. Anche se ci sono differenze tra topi e altre specie, ci sono molti vantaggi a un modello murino. L&#39;uso di un ambito semplice dissezione o lente d&#39;ingrandimento e condizioni ben illuminata per consentire la vascolarizzazione facilmente essere visto (per informazioni dettagliate anatomia del sistema vascolare, vedere Salto-Téllez et al., 2004 13). Per ridurre il rischio di mortalità post-operatoria, è molto importante evitare di recidere vasi di grandi dimensioni in quanto il volume totale del sangue di un topo 25g è inferiore a 2 ml 14. In caso di eccessivo sanguinamento si verifica, l&#39;applicazione delicata di pressione o cauterizzazione individuare può essere usato per fermare l&#39;emorragia. Questa procedura può anche essere modificata in diversi modi. Per esempio, i topi possono essere anestetizzati con isoflurano, ketamina / xylazina, o sodio pentobarbital e un&#39;adeguata selezione è determinata dalla durata del protocollo 15-18. La punta pizzico riflesso è l&#39;indice più utilizzato della profondità dell&#39;anestesia. Inoltre, per aumentare la probabilità di sopravvivenza a lungo termine, alcuni ricercatori utilizzano farmaci antiaritmici, come lidocaina per ridurre l&#39;incidenza di aritmie letali 19,20 però, si deve tener conto che questo è stato di recente dimostrato di avere proprietà antiapoptotiche in un acuto modello 21. Inoltre, per ridurre il dolore post-operatorio, analgesici come la buprenorfina può essere somministrato per le prime 48 ore dopo l&#39;intervento 3,16,17,22,23. Per mantenere la temperatura corporea durante l&#39;intervento chirurgico (soprattutto per i più protocolli), una sonda rettale in serie con una piastra elettrica è spesso usato al posto del pad isotermici. Per ischemia / riperfusione e / o pre-ischemico o postconditioning: la durata dell&#39;occlusione (s) e riperfusione (s) può essere modificata, per occlusione permanente, la dimensione dell&#39;infarto può essere modificato regolando la posizione della legatura; e per le iniezioni intramiocardiche (es. cellule, proteine), ci possono essere posizioni di iniezione 1-3 e il volume per iniezione può essere fino a 15 microlitri 24. Se le cellule vengono iniettate, il calibro dell&#39;ago utilizzato (di solito 26-30) 5,25,26 deve essere scelto in base alle dimensioni delle celle in modo che il diametro interno dell&#39;ago è grande abbastanza per evitare Sheering. Per evitare confonde a causa di processi infiammatori innescati da l&#39;intervento, alcuni ricercatori hanno riferito di usare una trappola che viene manipolato ex vivo per occludere e reperfuse il cuore in petto un topo chiuso in qualsiasi momento dopo l&#39;intervento chirurgico 27-29. Più recentemente, Gao et al. 30 hanno dimostrato che l&#39;occlusione temporanea e permanente può essere eseguito senza la necessità di ventilazione e di alcuni laboratori hanno iniziato ad utilizzare gli ultrasuoni per eseguire chiuso petto intramiocardico iniezioni 25,31. Dal momento che il primo studio che dimostrano la fattibilità di legatura dell&#39;arteria coronarica nei topi è stato pubblicato da Johns e Olson nel 1954 32, molti altri hanno adottato questo modello e modificato per studiare vari aspetti del danno miocardico e rimodellamento 3,33-45. La natura di topi in termini di dimensioni, capacità riproduttiva, e relativamente meno spese per l&#39;acquisto e la manutenzione rendono questa specie uno strumento interessante per una vasta gamma di studi fisiologici e fisiopatologici. Come la miniaturizzazione della tecnologia per l&#39;imaging in vivo degli anticipi 46-49, così come mezzo per eseguire ed analizzare su larga scala genomica e proteomica, screening di farmaci, l&#39;efficacia di terapie basate sulle cellule e / o di proteine ​​così come biomateriali 50-64, combinato con la gamma sempre più ampia di manipolazioni genetiche offerta da topi specifiche ubiquitaria o tessuto transgenici o mutanti / eliminazione diretta, il modello murino di infarto miocardico senza dubbio continuerà ad essere uno strumento prezioso nella valutazione lesione acuta rimodellamento cardiaco e lungo termine. Pertanto, non vi è valore indiscutibile di essere in grado di effettuare questi esperimenti in modo affidabile e riproducibile.

<table><tbody><tr><td>Forbici lunghe Vanna</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>160-159</td><td></td></tr><tr><td>Forbici da dissezione microchirurgiche</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>160-161</td><td></td></tr><tr><td>Pinze &amp;#8211; dritte, con 1x2 denti</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>105-205</td><td></td></tr><tr><td>Manico per bisturi n. 3</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>105-64</td><td>lama sterile n. 10</td></tr><tr><td>Pinze &amp;#8211; curve a metà, con seghettatura</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>160-19</td><td></td></tr><tr><td>Forbici per tessuti</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>105-410</td><td></td></tr><tr><td>Pinza per ago di Castroviejo</td><td>Miltex Inc.</td><td>18-1828</td><td></td></tr><tr><td>Specillo oculare Cook</td><td>Miltex Inc.</td><td>18-63</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II 8-0</td><td>Suture Express</td><td>VP-900-X</td><td></td></tr><tr><td>Prolene 6-0</td><td>Suture Express</td><td>8776</td><td></td></tr><tr><td>Sterilizzatore a perline Germinator 500</td><td>Cellpoint Scientific</td><td>65369-1</td><td></td></tr><tr><td>Piastra isoterma Deltaphase</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>39DP</td><td></td></tr><tr><td>Siringa Hamilton - 25&amp;mu;l</td><td>Hamilton Co</td><td>80430</td><td></td></tr><tr><td>Ago bevel 30 gauge</td><td>Hamilton Co</td><td>7803-07</td><td></td></tr><tr><td>Ventilatore</td><td>Kent Scientific</td><td>TOPO</td><td></td></tr></tbody></table>

legatura dell&#39;arteria coronarica e di iniezione intramiocardico in un modello murino di infarto

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

I modelli murini sono uno strumento prezioso per lo studio delle lesioni acute e del rimodellamento cronico del miocardio in vivo. Con l'avvento di modifiche genetiche all'intero organismo o al miocardio e con una serie di materiali biologici e/o sintetici, esiste un notevole potenziale affinché qualsiasi combinazione di questi elementi possa attenuare l'entità della lesione ischemica acuta e ostacolare l'insorgenza di scompenso cardiaco conseguente al rimodellamento miocardico.
Presentiamo qui i metodi e i materiali utilizzati per eseguire in modo affidabile questa microchirurgia e le modifiche necessarie per studi di occlusione coronarica temporanea (con riprofusione) o permanente, nonché per iniezioni intramiocardiche. Gli effetti sul cuore osservabili durante l'intervento e al termine dell'esperimento, unitamente alla valutazione istologica, confermeranno l'efficacia.
In breve, la preparazione chirurgica prevede l'anestetizzazione dei topi, la rimozione del pelo sul torace e la disinfezione della zona chirurgica. L'intubazione intratraqueale viene eseguita mediante illuminazione transesofagea con una luce a fibra ottica. Il tubo viene quindi collegato a un ventilatore. Un'incisione sul torace espone i muscoli pettorali, che vengono sezionati per visualizzare le costole. Per studi di ischemia/riperfusione, un pezzo di tubo PE lungo 1 cm posizionato sul cuore viene utilizzato per annodare il legaccio in modo da personalizzare l'occlusione e la riprofusione. Per iniezioni intramiocardiche, si utilizza una siringa Hamilton con ago sterile bevel 30 gauge. Al termine delle manipolazioni miocardiche, la gabbia toracica, i muscoli pettorali e la cute vengono chiusi in modo sequenziale. L'anestesia mediante blocco di campo viene effettuata con marcaina allo 0,25% in soluzione salina sterile, applicata allo strato muscolare prima della chiusura della cute. I topi ricevono un'iniezione sottocutanea di soluzione salina e vengono posti in una camera riscaldata fino al recupero della decubito sterno. Successivamente vengono restituiti al vivario e mantenuti in condizioni standard fino al momento del prelievo dei tessuti. Al momento dell'eutanasia, i topi vengono anestetizzati, il cuore viene arrestato in diastole con KCl o BDM, lavato con soluzione salina e immerso in fissativo. Successivamente vengono eseguite le procedure standard di processamento, inclusione, sezionamento e colorazione istologica.
L'intubazione non chirurgica di un topo e le manipolazioni microchirurgiche descritte rendono questo un modello tecnicamente complesso da apprendere e da riprodurre in modo ripetibile. Queste procedure, combinate con la difficoltà di eseguire manipolazioni costanti del ligamento per occlusioni temporizzate e riprese della perfusione o iniezioni intramiocardiche, possono influenzare anche la percentuale di sopravvivenza, pertanto l'ottimizzazione e la coerenza sono fondamentali.

Numerose manipolazioni genetiche e / o iniezioni intramiocardiche di geni, proteine, cellule e / o biomateriali si sovrappongono la dimensione del tempo negli studi di acuta ischemia / riperfusione e rimodellamento cronica nel topo. Questo video illustra le procedure di microchirurgia per ischemia / riperfusione, permanente legatura delle arterie coronarie, e gli studi di iniezione intramiocardico.

Legatura dell&#39;arteria coronarica e di iniezione intramiocardico in un modello murino di infarto

I modelli murini rappresentano uno strumento prezioso per studiare in vivo il danno acuto e il rimodellamento cronico del miocardio. Con l'avvento delle modifiche genetiche a...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è dimostrare i metodi microchirurgici per eseguire la legatura temporanea o permanente dell'arteria coronaria, nonché l'iniezione intramiocardica nel cuore del topo. Questo viene ottenuto innanzitutto preparando e disinfettando l'area chirurgica. Il topo viene quindi intubato con un tubo PE 90 per fornire una ventilazione a pressione positiva durante la toracotomia.Dopo l'isolamento, l'arteria coronaria può essere occlusa temporaneamente o permanentemente. Inoltre, è possibile iniettare una sostanza nel cuore. I risultati ottenuti mostrano il grado di danno indotto al cuore in base a parametri istologici e morfometrici, marcatori proteici nei tessuti e nel siero, nonché indici funzionali.Il mio nome è TKA Rag e lavoro presso il Dipartimento di Fisiologia della Brody School of Medicine della East Carolina University. Lo scopo di questo video è mostrare le procedure microchirurgiche utilizzate per la legatura temporanea e permanente dell'arteria coronaria, nonché per l'iniezione intramiocardica nel cuore di un topo. Per iniziare, posizionare strumenti chirurgici sterili e applicatori sterili con estremità in cotone da tre pollici su un tappetino sterile.Successivamente, accendere un sterilizzatore a perle in modo che sia pronto per sterilizzare gli strumenti tra un intervento e l'altro. Per preparare l'animale all'intervento chirurgico, applicare un lubrificante sterile sugli occhi di un topo anestetizzato. Successivamente, rimuovere il pelo dal lato sinistro del torace utilizzando un agente depilatorio, come nare.Pulire accuratamente la crema depilatoria per evitare ustioni chimiche o dermatiti. Posizionare il topo su un tappetino isoterma in fase delta fissato a un tavolo in plexiglass. Immobilizzare ogni arto con del nastro adesivo e posizionare un filo spesso sotto i denti superiori per mantenere la mascella superiore in posizione.Pulire il sito chirurgico con Betadine e poi con alcol per un totale di tre volte. Utilizzare una luce a fibra ottica per illuminare la regione del collo al fine di visualizzare la trachea durante l'inserimento del tubo in PE. Una volta illuminata, inserire con attenzione il tubo attraverso la bocca.Collegare il tubo a un ventilatore per somministrare una ventilazione a pressione positiva. Una volta confermata la ventilazione mediante movimenti sincroni del torace, fissare il collegamento alla stecca con del nastro adesivo per mantenerlo in posizione. Durante l'intervento chirurgico, utilizzare pinze dentate per sollevare la pelle dal torace e praticare un'incisione di 1,5 centimetri parallela allo sterno.Successivamente, utilizzare forbici micro curve Vana per tagliare i muscoli pettorali e creare un piccolo foro nel muscolo intercostale. Dopo aver ritratto il muscolo, utilizzare forbici micro dritte e smussate per tagliare attraverso tre costole. Utilizzare un espansore per ritrarre la gabbia toracica.Aprire delicatamente la sacca pericardica per visualizzare il cuore utilizzando un pinza per ago TRO Viejo e un ago a punta conica con filo di sutura in polietilene posizionato al di sotto dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra per una legatura temporanea che può essere rimossa. Per una riperfusione controllata nel tempo, tagliare un pezzo di PE 90 lungo da 0,5 a 1 centimetro e posizionarlo sul cuore. Parallelamente all'arteria coronaria, legare il filo di sutura passato sotto l'arteria coronaria al tubicino. Dopo un periodo di tempo prestabilito, allentare la legatura per consentire la riperfusione; per eseguire un'occlusione permanente, non rimuovere la legatura.Il legaccio passato sotto l'arteria coronaria viene annodato. Devono risultare evidenti lo sbiancamento e la discinesia. Tagliare l'estremità lunga del filo di sutura per le iniezioni intramiocardiche; inserire un ago sterile da 30 gauge alla base del cuore, al di sopra della zona lesa e a destra del legaccio.Avanzare l'ago fino alla zona della lesione e ritirarlo leggermente in modo che il bisello sia visibile approssimativamente alla periferia della zona. Iniettare una piccola quantità di soluzione e mantenere l'ago in posizione. Ritirare la siringa di altri uno a tre millimetri e iniettare il resto della soluzione.Tenere la siringa in posizione finché il sangue formato dalla soluzione non si dissolve. Una volta dissipato, rimuovere l'ago. Se si verifica sanguinamento, premere delicatamente un applicatore con estremità di cotone sulla sede fino a quando il sanguinamento non si arresta.Una volta completate le manipolazioni miocardiche, rimuovere i retrattori delle costole e chiudere la cavità toracica con due o tre punti a croce. Successivamente, chiudere i muscoli pettorali con due o tre punti a croce. Applicare uno a tre gocce di 0,25% marcatura in soluzione salina sterile sul muscolo e utilizzare altri due o tre punti a croce per chiudere la cute.Rimuovere il topo dal ventilatore ed assicurarsi una respirazione rapida e superficiale ritmica. Iniettare 0,5 millilitri di soluzione salina sterile e calda nello spazio sottocutaneo dorsale e posizionare il topo in una gabbia contenente un tappetino riscaldante fino al recupero della mobilit&agrave;. Per esperimenti di sopravvivenza, i topi vengono rimessi nelle loro gabbie di origine e restituiti al vivario fino al momento dell'eutanasia.Pulire gli strumenti chirurgici con etanolo e inserirli nel sterilizzatore a perline per prepararsi alla successiva chirurgia per il prelievo di campioni da analizzare; isolare il cuore e pungere la regione basale posteriore del ventricolo con un ago contenente cloruro di potassio freddo o una soluzione di due tre butano Diossido di Azoto. Iniettare lentamente la soluzione nella camera fino a quando il cuore non si arresta in diastole. Rimuovere il cuore e perfondere con PBS per eliminare qualsiasi residuo di sangue.Dopo la perfusione, immergere il cuore nel fissativo; il cuore viene quindi processato e incluso secondo procedure di routine. Il danno acuto causato dalla legatura temporanea può essere visualizzato mediante colorazione. In questa immagine, il colorante blu si distribuisce nelle regioni occluse del cuore e la colorazione con TTC evidenzia il tessuto metabolicamente vitale.In rosso, le aree necrotiche non si colorano e rimangono quindi pallide. Un software di analisi delle immagini può essere utilizzato per calcolare l'area a rischio in rapporto al ventricolo sinistro e l'area dell'infarto in rapporto all'area a rischio. In questo esempio, un cuore leso viene sezionato trasversalmente attraverso la regione dell'infarto, quattro giorni dopo un mi e colorato con emat, ematina ed eosina.La stella indica la necrosi del tessuto, mentre le frecce indicano la colorazione del collagene del tessuto di granulazione con prose. Il rosso serio, verde rapido può essere utilizzato per misurare la fibrosi interstiziale, che si correla con gli indici funzionali di indurimento della parete. Questa immagine del cuore di un topo quattro settimane dopo un infarto miocardico mostra il citoplasma in verde e le fibre di collagene in rosso.Questa serie di immagini mostra la distribuzione di sei microlitri di soluzione del colorante blu di Evans iniettati nella zona di confine del cuore dopo la legatura permanente dell'arteria. Si noti che il colorante si propaga nella direzione della lesione e anche verso la base, nonché in senso transmurale. Visualizzare l'arteria coronaria e otturare in modo affidabile è molto difficile e richiede molta pratica per raggiungere la competenza.È molto importante ricordare, durante la procedura, di evitare di perforare i polmoni e, inoltre, di evitare l'estubazione dell'animale durante le manipolazioni chirurgiche.

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Questo video illustra come utilizzare un modello veloce e affidabile per lo studio dei processi fisiopatologici pathobiological e di ischemia miocardica.

LAD-Legatura: un modello murino di infarto miocardico

La procedura chirurgica utilizzata per indurre infarto miocardico sperimentale in topi inizia con toracotomia sinistra tra il terzo e il quarto nervature per visualizzare la superficie anteriore del cuore e polmone sinistro. Coronaria sinistra viene ligato, il torace è chiuso e il mouse viene consentito di recuperare spontaneamente.

Tecnica modificata di legatura dell&#39;arteria coronarica in Mouse

In questo video, descriviamo una procedura chirurgica per generare un modello murino di infarto del miocardio legando in modo permanente l'arteria coronaria discendente anteriore sinistra.

Generazione di un modello murino di infarto del miocardio: una procedura chirurgica per la legatura permanente dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra in un modello murino

Si introduce un metodo chirurgico per indurre sperimentale ischemia / riperfusione (I / R) pregiudizio per simulare infarto del miocardio (MI) in modelli murini che consente una maggiore chiarezza posizionamento della legatura sulla discendente anteriore sinistra (LAD) per migliorare la riproducibilità di esperimenti MI nei topi.

Un modello murino di ischemia miocardica e riperfusione lesioni da legatura della arteria discendente anteriore sinistra

Viene descritto un modello altamente riproducibile per l'infarto del miocardio nei topi con manipolazioni minimamente invasive. Il modello può essere facilmente eseguito, con conseguente elevata riproducibilità e tasso di sopravvivenza. Pertanto, il modello descritto ridurrà il numero di animali necessari come richiesto dal principio delle 3R (Sostituzione, Perfezionamento e Riduzione).

Minimal procedura chirurgica invasiva di indurre infarto miocardico nei topi

L'insufficienza cardiaca è la principale causa di ospedalizzazione e una delle principali cause di mortalità. Un modello di legatura permanente dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra nei topi è stato applicato per studiare il rimodellamento ventricolare e la disfunzione cardiaca post-infarto del miocardio. Viene presentata la tecnica delle misurazioni emodinamiche invasive nei topi.

Legatura permanente dell&#39;arteria discendente anteriore sinistra coronarica nei topi: un modello di post-infarto rimodellante miocardico e insufficienza cardiaca

Forniamo un metodo affidabile per la legatura dell'arteria discendente anteriore sinistra (LAD) in un modello murino. Questo metodo è relativamente meno invasivo di altri metodi, che coinvolgono l'intubazione endotracheale, un approccio di toracotomia sul lato sinistro e la toracentesi. Questo metodo può essere utilizzato come modello per l'infarto miocardico acuto e cronico.

Murino discendente anteriore sinistra (LAD) Coronary legatura dell&#39;arteria: una migliore e semplificata del modello di infarto miocardico

Qui descriviamo una procedura chirurgica che mostra come ottenere una legatura permanente dell'arteria coronaria discendente sinistra-anteriore nei topi. Questo modello è di grande rilevanza per studiare la fisiofisiologia dell'infarto miocardico e i processi biologici concomitanti.

Modello di infarto miocardico Murine utilizzando la legatura permanente dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra

Questo articolo dimostra un modello per studiare il rimodellamento cardiaco dopo la crioinfortuni miocardica nei topi.

Un modello di criolesionismo per studiare l'infarto miocardico nel mouse

Presentato qui è una procedura chirurgica per la legatura permanente dell'arteria coronaria sinistra nei topi. Questo modello può essere utilizzato per studiare la fisiopatologia e la risposta infiammatoria associata dopo infarto miocardico.

Legatura coronaria sinistra: un modello chirurgico murino di infarto miocardico

Impara le tecniche microchirurgiche di legatura dell'arteria coronarica e iniezione intramiocardica nel cuore del topo per studiare l'ischemia e il danno cardiaco. Questi metodi permettono di valutare l'infarto e i processi di recupero.

Legatura dell'arteria coronarica e di iniezione intramiocardico in un modello murino di infarto

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