Valutare scavatori, Costruzione nido, e Tesaurizzazione in topi

Lo scopo di questa procedura è caratterizzare i comportamenti tipici delle specie nei topi. In primo luogo, il comportamento di scavare è studiato riempiendo un tubo con materiale e misurando quanto ne viene rimosso dall'animale. Vengono posizionati nestlet nella gabbia e la completezza del nido è quantificata come misura del comportamento di nidificazione.

Il comportamento di accumulo viene esaminato posizionando un topo in una scatola con accesso a un tunnel riempito di pellet alimentari e misurando la quantità che l'animale recupera dal tunnel. I risultati di questa serie di test indicano se i topi svolgono le loro attività quotidiane. Normalmente, le implicazioni di questa tecnica possono estendersi alla ricerca di trattamenti per la demenza, poiché comportamenti funzionalmente simili risultano compromessi sia nel topo che nell'uomo.

I comportamenti tipici nei topi possono essere paragonati alle attività quotidiane degli esseri umani. E i primi effetti della malattia di Alzheimer consistono nell'inibire lo svolgimento delle normali attività quotidiane, come preparare la colazione, allacciarsi le scarpe, pianificare un pasto o andare a fare la spesa. Nei nostri topi modello di Alzheimer, osserviamo che i comportamenti tipici della specie sono fortemente inibiti.

Quindi qui abbiamo un modello diretto, quasi un modello omologo, tra le attività della vita quotidiana osservate nei pazienti con Alzheimer a casa e in ambito clinico, e l'inibizione delle specie. Comportamenti tipici nel topo: costruire un riparo utilizzando un tubo di plastica del diametro di 68 millimetri e lungo 20 centimetri. Sigillare un'estremità con un tappo realizzato in truciolato di 12 millimetri.

Successivamente, praticare due fori, distanti un centimetro dall'estremità aperta del tubo di scavo, ad un angolo di 90 gradi. Inserire in ciascun foro una vite metrica lunga cinque centimetri e avvitarla saldamente. Il tubo dovrebbe ora essere sollevato di circa tre centimetri rispetto al pavimento.

All'estremità opposta, riempire la tana con 200 grammi di pellet alimentari e posizionarla nella gabbia principale per l'abitazione durante la notte. Se i topi sono allevati in gruppo, l'abituation sarà più rapida e completa grazie all'effetto di facilitazione sociale. Tuttavia, i test di base sui topi allevati singolarmente devono comunque essere eseguiti.

In seguito, possono essere utilizzate anche sostanze non alimentari per misurare il comportamento di scavare. Alcuni esempi includono palline di argilla, ghiaia di piselli e sabbia. Dopo che gli animali si sono abituati, posizionare un tunnel completo nella gabbia di prova intorno alle 16:00 per eseguire un test di base.

Si consiglia di eseguire due test di base a distanza di 48 ore. Due ore dopo, misurare il peso del materiale rimasto nella tana svuotando il contenuto in un contenitore tarato.

Rimettere il materiale non consumato nel tubo e riposizionare il tubo nella gabbia domiciliare la mattina successiva. Rimuovere il tubo e pesare qualsiasi materiale rimanente per l'analisi. Ripetere questa procedura almeno 48 ore dopo l'ultima misurazione di base.

I topi C57 black six di solito scavano circa 70 grammi nelle prime due ore e quasi 200 grammi durante la notte. I topi con lesione all'ippocampo spesso scavano meno di cinque grammi. La malattia da prioni inibisce lo scavare, così come il lipopolisaccaride.

L'analisi del comportamento di scavo può rilevare la malattia da prioni a 10-12 settimane dall'iniezione dell'omogenato cerebrale malato, mentre i segni clinici compaiono solo a 22 settimane. È stato dimostrato che lo scavo è sensibile alle differenze tra ceppi e alla soppressione delle subunità dei canali ionici del potassio. Per misurare il comportamento di costruzione del nido, preparare gabbie singole e coprire il fondo con materiale per lettiera di 0,5 centimetri di spessore.

Inserire in profondità in ogni gabbia un quadrato di cinque centimetri di ovatta di cotone pressata, chiamato nido artificiale. Collocare un topo in ogni gabbia con nido circa un'ora prima della fase scura e valutare i risultati la mattina successiva.

Pesare la quantità di nido intatto e valutare il nido su una scala da uno a cinque. Un punteggio di uno viene assegnato quando il nido è quasi intatto, mentre un cinque viene attribuito a un nido quasi perfetto, con oltre il 90% del nido strappato. Sia i maschi che le femmine costruiscono nidi, poiché la loro funzione è la termoregolazione e sono inoltre associati alla riproduzione.

I punteggi nei test di costruzione del nido nei topi C57BL/6 maschi e femmine rientrano nello stesso intervallo. Sebbene non abbiamo effettuato un confronto controllato in un singolo ceppo, la maggior parte dei topi C57BL/6 ottiene un punteggio compreso tra quattro e cinque nella costruzione del nido. Tuttavia, quando l'ippocampo è lesione, il punteggio mediano si aggira intorno a due.

Un punteggio di tre è improbabile che venga superato. Per misurare il comportamento di accumulo, preparare la scatola che fungerà da base domestica inserendo una bottiglia d'acqua e praticando un foro sul lato dove verrà fissato il tubo per l'accumulo. Creare un tubo per l'accumulo arrotolando un tratto di rete metallica lungo 45 centimetri attorno a un tubo di diametro 40 millimetri.

Fissatelo con clip Allen o con filo metallico attorcigliato. Quindi inseritelo per pressione su un tubo nero lungo 10 centimetri e di diametro 40 millimetri. Successivamente, collegare il tubo di convogliamento alla scatola preparata in precedenza e ostruire l'estremità prossimale con un tappo di legno rimovibile.

Preparare la scatola di casa con un tunnel di cartone e lettiera sporca della gabbia di provenienza. Assicurarsi che l'accesso al tubo per l'accumulo sia impedito. Introdurre il topo nella scatola nelle prime ore della giornata per l'abituazione successiva; rimuovere il tubo per l'accumulo e riempire l'estremità distale con una miscela di pellet alimentari grandi e piccoli, per un totale di 100 grammi.

Poco prima dell'inizio della fase scura. Rimuovere il tappo di legno per consentire al topo l'accesso al tubo dell'accumulo la mattina successiva. Ancora una volta, il momento non è critico.

Raccogliere e pesare i pellet di cibo accumulati nella scatola della base domestica. Utilizzando topi femmine C57BL/6. La quantità mediana accumulata sarebbe di circa 50-70 grammi.

Le lesioni dell'ippocampo sopprimono fortemente l'accumulo, mentre quelle della corteccia prefrontale hanno un effetto solo debole. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come valutare i comportamenti tipici della specie nella popolazione.