Name: Istituzione e Propagazione dei Tumori retinoblastoma umani in topi privi di sistema immunitario (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: Impara a stabilire tumori di retinoblastoma umano in topi immunodeficienti mediante iniezione intraoculare di sfere tumorali. Questo modello ortotopico consente di studiare la biologia tumorale e testare nuove terapie.

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Il finanziamento per questo progetto è fornito dalla Fondazione Clayton per la Ricerca e la Fondazione di Ricerca Retina.

1. Preparazione del tumorspheres retinoblastoma <ol><li> Ottenere tumore campione retinoblastoma sotto un IRB-approvato il protocollo. </li><li> Preparare fresca di supporto definito di cellule staminali (Neurobasal-A media, 1X B-27 integratore meno vitamina A, 1X non essenziali della soluzione di amminoacidi, L-glutamina 1X, 20 ng / mL di EGF, 10 ng / ml bFGF). </li><li> Meccanicamente disaggregare il tessuto tumorale con un bisturi con una trasversale tecnica in una sterile, il tessuto della cultura trattati con 6-pozzetti. Immediatamente aggiungere 100 ml di mezzi di comunicazione definite cellule staminali del tessuto e delicatamente diffondere il tessuto tritata con il bisturi. Aggiungere 5 ml di mezzi di comunicazione di cellule staminali definite al pozzo. </li><li> Incubare a 37 ° C, 5% di CO 2 in un incubatore umidificato e controllare tutti i giorni. Alcuni tumorspheres dovrebbe derivare dal tessuto tumorale interrotto quasi subito, con un numero sempre crescente nel corso di 2-4 giorni. </li><li> Settimanale, tumorspheres centrifugare a 300xg per 5 minuti, risospendere nei media staminali preparati al momento definito di cellule, e seminare su e giù per 10 volte per interrompere più grandi, sfere centrale necrotica e consentire nuove sfere sano di forma. </li></ol> 2. La preparazione delle cellule tumorali per iniezione <ol><li> Se l'iniezione tumorspheres colta, dolcemente sfere in una pipetta da 15 ml tubo conico. Pipettare delicatamente su e giù con una pipetta sierologica 10-15 volte per distruggere le sfere. </li><li> Contare le cellule da iniettare utilizzando un emocitometro, e aliquota almeno 50.000 cellule per iniezione in un nuovo tubo. Prepararsi per le iniezioni maggior numero possibile in base al numero di cellule disponibili. </li><li> Centrifugare a 300xg per 5 minuti. Con attenzione aspirare il surnatante e risospendere in 5 ml di PBS. Ripetere centrifugazione e aspirazione e risospendere in 10 L PBS per iniezione. </li></ol> 3. Preparazione degli animali <ol><li> Utilizzando una siringa per insulina, somministrare un'iniezione intraperitoneale di cocktail roditori anestesia (ketamina 37,6 mg / ml, xilazina 1,92 mg / ml, acepromazina 0,38 mg / ml) a 1 ml per grammo di peso corporeo (GBW). Attendere 5 minuti per l'animale a diventare sedato. Controllare il battito cardiaco e posizionare l'animale su un blocco riscaldato. Mantenere gli animali su un blocco riscaldato in ogni momento fino al recupero. </li><li> Dopo la sedazione, somministrare 1 goccia di HCl proparacaina per l'occhio destro. Sostituire animali sul pad riscaldato e attendere 1 minuto. </li><li> Somministrare 1 goccia di fenilefrina HCl per l'occhio destro. Sostituire l'animale sul pad riscaldato e attendere 5 minuti. Se la dilatazione della pupilla non si è verificato, ri-somministrare 1 goccia e attendere altri 5 minuti. </li><li> Monitorare gli animali per i segni di movimento o spasmi, che può verificarsi in&gt; 30 minuti dopo la sedazione. Al primi segni di movimento, somministrare 1 ml / GBW di ketamina HCl (diluito a 10 mg / ml in PBS) e attendere 5 minuti. </li></ol> 4. Iniezione di cellule tumorali <ol><li> Posizionare l'animale anestetizzato sotto il microscopio su un lato, con l'occhio destro rivolto verso l'alto e con la testa appoggiata su garza e centrato per ottenere un riflesso rosso dell'occhio destro fondo (pupilla dilatata dovrebbe essere in questo momento) quando osservata attraverso il microscopio . </li><li> Puntellare il globo destra spingendo delicatamente verso il basso contemporaneamente con due dita sulle palpebre e mantenere questa posizione costante per il resto della procedura. </li><li> Usando una sterile da 30 gauge collegato a una siringa Luer-Lock, perforare il globo lateralmente attraverso la congiuntiva e la sclera adiacente al limbus corneale nella zona della pars plana (figura 1) e solo attraverso la coroide in camera vitreale. Rimuovere l'ago dalla apertura. </li><li> Sterilizzare l'ago Hamilton con un batuffolo di cotone imbevuto di alcool. Disegnare la sospensione cellulare nella siringa Hamilton e inserire l'ago nel foro fino a quando l'ago viene visualizzato attraverso il microscopio dietro l'obiettivo nel vitreo vicino alla retina. Con l'aiuto di una seconda persona mentre si tiene l'ago stabilmente in questa posizione, spingere il pistone lentamente. Rimuovere l'ago. Se necessario, utilizzare un batuffolo di cotone per assorbire qualsiasi liquido dall'apertura. </li><li> Delicatamente rilasciare la pressione delle palpebre per chiudere le palpebre del mouse. </li><li> Somministrare 1 goccia di ipromellosa per ciascun occhio e tornare animale pad riscaldato per il recupero. </li></ol> 5. Monitoraggio di topi iniettati e la raccolta dei tumori <ol><li> Ogni giorno, esaminare l'occhio iniettato per leucocoria (bianco riflesso papillare) e / o perioculare distensione che di solito si manifesta 2-4 settimane dopo l'iniezione. </li><li> Una volta che la crescita del tumore viene rilevato, l'eutanasia degli animali secondo le linee guida istituzionali. </li><li> Se l'occhio e tumore sono coperti dalla palpebre, utilizzare il bisturi per fare due incisioni ortogonali alla fessura palpebrale e sollevare i lembi della pelle. </li><li> Sotto la visualizzazione utilizzando il microscopio stereoscopico, fare una incisione circonferenziale al limbus, eliminando la cornea e la lente, e con attenzione sezionare la maggior parte della massa tumorale da altri tessuti utilizzando tweezers. Posizionare il tumore in sterili RPMI-1640 media. </li><li> Utilizzare le pinzette per estrarre lentamente il globo aperto da presa. Per assicurare un nervo ottico collegato in modo invasione tumorale possono essere visualizzati, tirare il globo fino a quando il nervo è esposto e usare le forbici per tagliare il nervo più a lungo possibile. Posto in formalina al 10% per l'elaborazione normale di esame istologico. </li></ol> 6. Rappresentante dei risultati: Tumorspheres retinoblastoma inizierà ad apparire dal tessuto disaggregati quasi immediatamente come sono liberate dalla massa tumorale. Entro 2-4 giorni, più tumorspheres inizierà a formare e aumento delle dimensioni. Le sfere tendono ad essere regolari e mostrano una ben definita, la membrana che circonda l'aggregato secondaria (Figura 2). L'animale si presenta tipicamente con leucocoria entro 4 settimane post-iniezione (figura 3b), seguita dall'ampliamento del globo e la distensione dei tessuti circostanti 5-8 settimane dopo l'iniezione come il tumore cresce (Figura 3c). <img src="/files/ftp_upload/2644/2644fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Sezione trasversale dell'occhio del mouse mettendo in evidenza le caratteristiche si fa riferimento nel protocollo. <img src="/files/ftp_upload/2644/2644fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Retinoblastoma cultura di cellule umane in vitro ripreso a) 4x, e b) ingrandimento obiettivo 10x. Cellule del tumore primario retinoblastoma produrre tumorspheres con una forma regolare sferoidale e una membrana esterna croccante. Barre rappresentano una scala) 500 micron, e b) 200 micron. <img src="/files/ftp_upload/2644/2644fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3 Eye of RAG2 -. / - Topo mostrando a) funzioni di normale, b) indicativi di una massa tumorale nella cavità vitrea leucocoria, e c) una massa tumorale grande riempiendo il mondo con distensione perioculare associati, emorragia intraoculare.

<ol><li>Chèvez-Barrios, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+and+Nonmetastatic+Models+of+Retinoblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Metastatic and Nonmetastatic Models of Retinoblastoma.</a> Am. J. Pathol. 157, 1405-1412 (2000).</li>
<li>Suber, M. L., Hurwitz, M. Y., Chèvez-Barrios, P., Hurwitz, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+consequences+of+intraocular+administration+of+modified+adenoviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Immune consequences of intraocular administration of modified adenoviral vectors.</a> Hum. Gene Ther. 12, 833-838 (2001).</li>
<li>Mallam, J. N., Hurwitz, M. Y., Mahoney, T., Chèvez-Barrios, P., Hurwitz, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+Gene+Transfer+into+Retinal+Cells+Using+Adenoviral+Vectors%3A+Dependence+on+Receptor+Expression%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Efficient Gene Transfer into Retinal Cells Using Adenoviral Vectors: Dependence on Receptor Expression.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 1680-1687 (2004).</li>
</ol>

Gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti in conformità con le linee guida e dei regolamenti previsti dal Baylor College of Medicine IACUC Comitato.

La tecnica qui descritta favorisce i tumori nel loro propagazione retinoblastoma intraoculare, ambiente intravitreale. La tecnica di iniezione intraoculare è stata utilizzata in passato per creare i tumori da retinoblastoma derivate linee cellulari 1, nonché per fornire vettori virali per la terapia genica intraoculare 2,3. Questa tecnica è stata utilizzata con successo per la produzione di tumori retinoblastoma umano mediante iniezione diretta di cellule dal tumore primario e l&#39;iniezione di tumorspheres, nonché la riproduzione seriale di tumori trapiantati. La prova visibile della formazione del tumore (di solito leucocoria) di solito è notata la prima volta entro 4 settimane, dopo di che emorragia intraoculare e distensione del / mondo e tessuti circostanti o l&#39;orbita sviluppano entro 5-8 settimane. Una minoranza di topi iniettati ferire l&#39;occhio iniettato, con conseguente chiusura permanente delle palpebre. In questi casi, la distensione è l&#39;unico segno della formazione di tumori. Istituzione di tumori murini trapiantati non ha avuto successo con tutti i tumori retinoblastoma umano, anche se la propagazione dei tumori trapiantati stabilito è di grande successo. Questa osservazione suggerisce che alcune caratteristiche del tumore primario, come l&#39;invasività e il livello di differenziazione o di qualche altro fattore sconosciuto, può influenzare la capacità di questi tumori a persistere nell&#39;ambiente oculare murino. La quantità di tessuto che può essere acquisito da un tumore retinoblastoma umano è abbastanza piccola, e ci sono significative limitazioni sulla capacità di cellule di retinoblastoma cultura umana in vitro ad esempio come span durata limitata, perdita di istologia tumore solido e cambiamenti nel fenotipo cellulare. Questo protocollo fornisce un modo relativamente semplice per propagare il tumore umano e stabilire un modello murino della malattia umana. Questo permette inoltre in vitro e in vivo la sperimentazione della biologia di retinoblastoma e più manutenzione del tumore al di fuori del paziente.

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome </th><th> Azienda </th><th> Catalogo </th><th> Commenti </th></tr><tr><td> Fenilefrina HCl 2,5% </td><td> Bausch &amp; Lomb </td><td> 053-11 </td><td> Soluzione oftalmica </td></tr><tr><td> 30-Ago ga </td><td> BD </td><td> 305128 </td><td> Conica regolare </td></tr><tr><td> 10-ml Luer-Lock siringa </td><td> BD </td><td> 309604 </td><td></td></tr><tr><td> 3/10-cc insulina siringa </td><td> BD </td><td> 328431 </td><td></td></tr><tr><td> Tamponi imbevuti di alcool </td><td> BD </td><td> 326895 </td><td></td></tr><tr><td> 6-pozzetti, Tissue Culture-trattati </td><td> BD </td><td> 353046 </td><td></td></tr><tr><td> Proparacaina HCl 0,5% </td><td> Maggiordomo AHS </td><td> 017239 </td><td> Soluzione oftalmica </td></tr><tr><td> Ketamina HCl 100mg/ml </td><td> Fort Dodge </td><td> 4402A </td><td></td></tr><tr><td> 10-microlitri Hamilton siringa </td><td> Hamilton Azienda </td><td> 7648-01 </td><td></td></tr><tr><td> 32-Ago ga Hamilton </td><td> Hamilton Azienda </td><td> 7803-04 </td><td> Personalizzati lunghezza - 0,5 &quot; </td></tr><tr><td> Neurobasal-A Media </td><td> Invitrogen </td><td> 10888-022 </td><td></td></tr><tr><td> B-27 Minus supplemento di vitamina A, 50X </td><td> Invitrogen </td><td> 12587-010 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI-1640 media </td><td> Mediatech </td><td> 10-040-CV </td><td></td></tr><tr><td> Non essenziali soluzione di aminoacidi, 100X </td><td> Mediatech </td><td> 25-025-CI </td><td></td></tr><tr><td> L-Glutammina, 100X </td><td> Mediatech </td><td> 25-005-CI </td><td></td></tr><tr><td> Disposable Scalpel # 11 </td><td> Miltex </td><td> 4-411 </td><td></td></tr><tr><td> Roditori Anestesia Combo </td><td> n / a </td><td> n / a </td><td> In-house formulazione farmacia (ketamina 37,6 mg / ml, xilazina 1,92 mg / ml, acepromazina 0,38 mg / ml) </td></tr><tr><td> Fattore umano ricombinante crescita epidermico (EGF) </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02633 </td><td> Ricostituire a 10 mg / mL di soluzione di magazzino </td></tr><tr><td> Ricombinante umano di base fattore di crescita dei fibroblasti (bFGF) </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02634 </td><td> Ricostituire a 10 mg / mL di soluzione di magazzino </td></tr><tr><td> OMS-75 Microscopio di funzionamento </td><td> Topcon Medical Systems </td><td> OMS-75 </td><td> Questo modello è stato interrotto </td></tr><tr><td> Formalina 10% </td><td> VWR </td><td> 95042-908 </td><td></td></tr></tbody></table>

istituzione e propagazione dei tumori retinoblastoma umani in topi privi di sistema immunitario

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Coltura di cellule tumorali retinoblastoma nei media di cellule staminali definite dà luogo a tumorspheres primario che può essere coltivata e mantenuta solo per un tempo limitato. Queste tumorspheres colta possono presentare fenotipi cellulari notevolmente diverso rispetto al tumore originale. Dimostrazione che le cellule in coltura hanno la capacità di formare nuovi tumori è importante assicurarsi che il modello di una coltura di cellule la biologia del tumore originale. Qui vi presentiamo un protocollo per la propagazione dei tumori retinoblastoma umano in vivo utilizzando RAG2 - / - immune topi deficienti. Colta tumorspheres retinoblastoma umano di passaggio basso o cellule ottenute da appena raccolte tumori retinoblastoma umano iniettato direttamente in camera vitreale di occhi murino formare tumori entro 2-4 settimane. Questi tumori possono essere raccolte e sia ulteriori diversi passaggi negli occhi di topo in vivo o coltivate come tumorspheres in vitro. Propagazione è stato svolto con successo per almeno tre passaggi stabilendo così una continua fonte di tessuto retinoblastoma umano per ulteriori sperimentazioni. Wesley S. Bond e Lalita Wadhwa sono co-primi autori.

Un metodo è descritto per propagare i tumori retinoblastoma umano nei topi. Le cellule tumorali sono direttamente iniettate negli occhi di topi privi di sistema immunitario. Tumori secondari sono state stabilite con successo utilizzando sia le cellule raccolte direttamente da tumori umani e tumorspheres colta.

Istituzione e Propagazione dei Tumori retinoblastoma umani in topi privi di sistema immunitario

La coltura di cellule tumorali di retinoblastoma in terreni definiti per cellule staminali dà origine a tumoresfere primarie che possono essere accresciute e mantenute solo per un periodo limitato...

L'obiettivo generale di questa procedura è stabilire un tumore ortotopico di retinoblastoma in un topo immunodeficiente, fornendo un modello pratico per ulteriori sperimentazioni e consentendo la propagazione del tumore. Questo risultato si ottiene innanzitutto isolando le cellule da un tumore primario o da un xeno-trapianto e coltivando sfere tumorali in vitro. Il secondo passaggio della procedura consiste nell'iniettare le cellule tumorali coltivate nella cavità vitrea o nello spazio sottoretinico dell'occhio di un topo immunodeficiente rag two null.Il terzo passaggio della procedura consiste nel monitorare i topi inoculati per rilevare segni di formazione tumorale, inclusi leucocoria, ingrandimento del GLO e distensione perioculare. L'ultimo passaggio della procedura è il prelievo del tumore xenotrapiantato. Alla fine, si possono ottenere risultati che mostrano la formazione di tumori ortotopici nell'occhio murino mediante esame istopatologico.La dimostrazione visiva di questa tecnica è fondamentale a causa della delicatezza dell'iniezione intraoculare. Le strutture circostanti possono essere facilmente danneggiate, se non identificate correttamente. In generale, le persone nuove a questo metodo incontrano difficoltà perché il posizionamento dell'iniezione nella cavità vitrea richiede precisione per consegnare le cellule tumorali nel sito corretto.Ora, questo metodo può fornire informazioni sulla biologia dei tumori del retinoblastoma. Può inoltre essere applicato ad altri sistemi, come l'amministrazione interoculare di vettori per il trasferimento genico. Preparare innanzitutto un mezzo fresco e definito per cellule staminali in una piastra sterile da 10 centimetri trattata per colture cellulari.Posizionare il tessuto tumorale del retinoblastoma ed aspirare il mezzo di trasporto in eccesso, lasciandone una quantità sufficiente a prevenire l'essiccamento; disgregare meccanicamente il tessuto con un bisturi utilizzando una tecnica di taglio incrociato, quindi aggiungere immediatamente 100 microlitri di mezzo definito per cellule staminali al tessuto e distribuire delicatamente il tessuto tritato usando il bisturi. Successivamente, aggiungere 10 millilitri di mezzo definito per cellule staminali alla piastra. Incubare la piastra a 37 gradi Celsius con 5% di anidride carbonica in un incubatore umidificato ed esaminare quotidianamente la presenza di torbidità e variazioni di pH.Alcune sferoidi tumorali dovrebbero formarsi dal tessuto tumorale frammentato quasi immediatamente, con un numero crescente nell'arco di sette-dieci giorni, quando si osserva una crescita sufficiente. Successivamente, una volta alla settimana, centrifugare le sferoidi tumorali a 300 ×g per cinque minuti. Risospendere, sospenderle in un mezzo per cellule staminali definito appena preparato e pipettare su e giù per 10 volte per frammentare le sferoidi più grandi e necrotiche al centro e permettere la formazione di nuove sferoidi sane.Per preparare le sferoidi tumorali coltivate per l'iniezione, trasferire delicatamente le sferoidi in un tubo conico da 15 millilitri. Pipettare delicatamente su e giù da 10 a 15 volte per rompere le sferoidi. Contare le cellule da iniettare utilizzando un emocitometro con trian blu per escludere le cellule non vitali.Preparare il numero di iniezioni necessarie in base al numero di cellule disponibili e ai requisiti sperimentali. Successivamente, centrifugare i tubi a 300 ×g per cinque minuti. Aspirare con attenzione il sopranatante e risospendere le cellule in cinque millilitri.PBS ripetere i passaggi di centrifugazione e aspirazione ancora una volta. Infine, risospendere le cellule in 10 microlitri di PBS sterile per iniezione. Per preparare gli animali all'intervento, posizionare innanzitutto un topo anestetizzato su un tappetino riscaldato.Per mantenere la temperatura corporea, somministrare una goccia di cloridrato di propano nell'occhio destro e attendere un minuto. Successivamente, somministrare una goccia di cloridrato di fenilefrina nell'occhio destro e attendere cinque minuti. Se la dilatazione della pupilla non si è verificata, somministrare un'altra goccia e attendere altri cinque minuti.Posizionare l'animale anestetizzato di lato sotto il microscopio, appoggiando la testa sulla garza. Rivolgere il lato destro verso l'alto e centrare l'occhio per ottenere un riflesso rosso dell'occhio destro. Quando la retina viene osservata attraverso il microscopio, sostenere il bulbo oculare destro spingendo delicatamente verso il basso contemporaneamente con due dita sulle palpebre.Mantenere questa posizione stabile per il resto della procedura. Utilizzando un ago sterile da 30 gauge collegato a una siringa con attacco a baionetta, perforare lateralmente il bulbo oculare attraverso la congiuntiva e la sclera adiacenti al limbo corneale nell'area della pars plana, e appena attraverso la coroide fino alla cavità vitrea.Rimuovere l'ago dall'apertura. Sterilizzare un ago Hamilton con un batuffolo di alcol. Aspirare la sospensione cellulare nella siringa Hamilton e inserire l'ago nell'apertura fino a quando l'ago è visibile attraverso il microscopio dietro la lente nel vitreo, vicino alla retina.Con l'aiuto di una seconda persona, mantenere ferma l'ago in questa posizione mentre si preme lo stantuffo; rimuovere quindi lentamente l'ago. Se necessario, utilizzare un batuffolo di cotone per assorbire sangue o liquidi dall'apertura. Rilasciare delicatamente la pressione per chiudere le palpebre del topo.Riportare l'animale su un tappetino riscaldato per il recupero. Ogni giorno dopo l'iniezione, esaminare l'occhio alla ricerca di leucocoria. Questo fenomeno di solito diventa evidente da due a quattro settimane dopo l'iniezione.Una volta rilevata la crescita del tumore, si proceda all'eutanasia dell'animale seguendo le linee guida istituzionali. Al microscopio stereoscopico, effettuare un'incisione circonferenziale a livello del limbo, rimuovendo la cornea e il cristallino, ed estrarre con cura la maggior parte della massa tumorale dai tessuti circostanti utilizzando pinzette. Posizionare il tumore in RPMI 1640 sterile.Utilizzando pinzette, estrarre lentamente il bulbo oculare dalla cavità orbitaria fino a quando non viene esposto il nervo ottico. Mentre si solleva delicatamente il bulbo dall'orbita, utilizzare forbici per recidere il nervo ottico, lasciando attaccata al bulbo la maggior quantità possibile di nervo al fine di valutare l'invasione del nervo ottico da parte del tumore. Porre quindi in formalina neutra tampone al 10% per l'esame istologico.Di seguito è riportato un esempio di sferoidi tumorali coltivati. Dopo tre giorni, solo alcuni sferoidi tumorali sono visibili tra il tessuto tumorale dissociato. Tuttavia, a 10 giorni, il numero di sferoidi tumorali è aumentato.Le sfere mostrano una membrana esterna ben definita, come mostrato nell'inserzione in alto a destra, diverse settimane dopo l'iniezione. Il topo iniettato presenta leucocoria, il riflesso pupillare bianco è dovuto a un tumore situato nella parte posteriore dell'occhio. In questi esempi di sezioni oculari colorate con ematossilina ed eosina (h e d), si noti il tumore del retinoblastoma xenotrapiantato che riempie la cavità vitrea a sinistra, e l'assenza di tale crescita nell'occhio iniettato con controllo negativo a destra.Dopo aver visionato questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come preparare cellule tumorali coltivate, eseguire correttamente un'iniezione intraoculare nell'occhio di un topo e come monitorare la progressione del tumore. Una volta acquisita la tecnica, l'iniezione può essere completata in circa 30 minuti per animale. Se eseguita correttamente, non dimenticare che le cellule tumorali possono essere pericolose e che è sempre necessario adottare precauzioni, come indossare dispositivi di protezione individuale adeguati, tra cui camice da laboratorio e mascherine, durante l'esecuzione di questa procedura. Le cellule tumorali umane devono sempre essere manipolate in condizioni BSL 2.

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