Name: Disegno di sangue di ratti attraverso la vena safena e da puntura cardiaca (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-23T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 27 s
Description: Impara due tecniche di prelievo ematico nei ratti: dalla vena safena senza anestesia e dalla puntura cardiaca per volumi maggiori. Questi metodi sono essenziali per studi farmacocinetici etici.

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Disegno di sangue di ratti attraverso la vena safena e da puntura cardiaca Nota: Tutte le procedure devono essere approvati dalla cura degli animali vostro Istituto e sul comitato per l&#39;uso. 1. Prelievo di sangue dalla vena safena <ol><li> Questa procedura viene eseguita senza anestesia e richiede due persone, uno che gestisce il topo, e chi esegue il sorteggio. </li><li> Fai un cono da un asciugamano o tenere il topo con i guanti roditore manipolazione, lasciando un arto posteriore esposti. </li><li> Radere la parte posteriore della gamba con un trimmer elettrico fino a quando la vena safena è visibile. Shave una superficie sufficiente, in modo che nessun capello verrà a contatto con il sito della puntura. Utilizzare una piccola quantità di non-fragrante lozione per le mani per mantenere la non rasata i capelli lontano dal sito della puntura. </li><li> Fare un punto di compressione alla base della gamba per rendere il rigonfiamento della vena safena fuori (simile ad usare un laccio emostatico quando un prelievo di sangue da un essere umano o un animale di grandi dimensioni). Puntura della vena con un ago 20G e scoop come il sangue esce con un microvette. Pompaggio con la gamba aiuterà a disegnare più sangue. Quando avrete raccolto abbastanza sangue, tenere pulito un impacco sul sito della puntura per fermare le emorragie. </li></ol> 2. Prelievo di sangue da puntura cardiaca <ol><li> Questa procedura richiede l&#39;anestesia ed è terminale. Gli animali devono essere immediatamente eutanasia al termine di una puntura cardiaca. </li><li> Preparare una siringa da 5 ml con un ago 23G1. </li><li> Profondamente anesthesize il ratto e controllo per l&#39;anestesia per la mancanza di movimento spontaneo, il tasso di respirazione lenta, e la mancanza di risposta agli stimoli (come pizzicare un dito del piede). Per garantire l&#39;anestesia prolungata, inserire una siringa contenente un tovagliolo di carta imbevuto di anestetico volatile sul naso del ratto durante la procedura. </li><li> Posizionare il topo sul dorso, di fronte lontano da voi. </li><li> Se siete di mano destra, posizionare il dito indice sinistro al livello del più basso costole, senza applicare alcuna pressione. Il cuore sarà situato circa 1 cm al di sopra questo punto, leggermente a destra. </li><li> Tenendo la siringa in un angolo di 45 gradi, inserire l&#39;ago tra due costole e guardare per una goccia di sangue per entrare in l&#39;ago. Questa è un&#39;indicazione che si è nel cuore. Senza muovere la siringa, tirare lo stantuffo per riempire la siringa. Una volta che la siringa è piena, con attenzione scollegarlo dalla ago e vuoto in un tubo. La siringa può essere ri-collegato l&#39;ago per il disegno più sangue. Dovrebbe essere possibile tracciare 5-10 ml di sangue da un topo 120-180 g. </li><li> Immediatamente eutanasia il topo. </li></ol>

<ol><li>Van Herck, H., Baumans, V., Brandt, C. J. W. M., Boere, H. A. G., Hesp, A. P. M., Van Lith, H. A., Schurink, M., Beynen, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+sampling+from+the+retro-orbital+plexus%2C+the+saphenous+vein+and+the+tail+vein+in+rats%3A+comparative+effects+on+selected+behavioural+and+blood+variables%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Blood sampling from the retro-orbital plexus, the saphenous vein and the tail vein in rats: comparative effects on selected behavioural and blood variables.</a> Laboratory Animals. 35, 131-139 (2001).</li>
<li>Luzzi, M., Skoumbourdis, E., Baumans, V., Conte, A., Sherwin, C., Kerwin, A., Lang, T., Morton, D., Barley, J., Moreau, E., Weilenmann, R. F., Reinhardt, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collecting+blood+from+rodents%3A+a+discussion+by+the+laboratory+animal+refinement+and+enrichment+forum%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Technology+and+Welfare%22%5BJournal%5D)">Collecting blood from rodents: a discussion by the laboratory animal refinement and enrichment forum.</a> Animal Technology and Welfare. 4, 99-102 (2005).</li>
<li>Angelow, O., Schroer, R. A., Heft, S., James, V. C., Noble, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+two+methods+of+bleeding+rats%3A+the+venous+plexus+of+the+eye+versus+the+vena+sublingualis%5BTitle%5D)+AND+%22Jounal+of+Applied+Toxicology%22%5BJournal%5D)">A comparison of two methods of bleeding rats: the venous plexus of the eye versus the vena sublingualis.</a> Jounal of Applied Toxicology. 4, 258-260 (2006).</li>
<li>Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+blockade+of+T+lymphocyte+K%2B+channels+ameliorates+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%2C+a+model+for+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad%22%5BJournal%5D)">Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis.</a> Proc. Natl. Acad. , 13942-13947 (2001).</li>
<li>Beeton, C., Pennington, M. W., Wulff, H., Singh, S., Nugent, D., Crossley, G., Khaytin, I., Chen, C. Y., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+effector+memory+T+cells+with+a+selective+peptide+inhibitor+of+Kv1.3+channels+for+therapy+of+autoimmune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Targeting effector memory T cells with a selective peptide inhibitor of Kv1.3 channels for therapy of autoimmune diseases.</a> Mol. Pharmacol. , 1369-1381 (2005).</li>
<li>Beeton, C., Wulff, H., Standifer, N. E., Azam, P., Mullen, K. M., Pennington, M. W., Kolski-Andreaco, A., Wei, E., Grino, A., Counts, D. R., Wang, P. H., LeeHealey, C. J., Andrews, B. S., Sankaranarayanan, A., Homerick, D., Roeck, W. W., Tehranzadeh, J., Stanhope, K. L., Zimin, P., Havel, P. J., Griffey, S., Knaus, H. G., Nepom, G. T., Gutman, G. A., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kv1.3+channels+are+a+therapeutic+target+for+T+cell+mediated+autoimmune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Kv1.3 channels are a therapeutic target for T cell mediated autoimmune diseases.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. , 17414-17419 (2006).</li>
<li>Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -M., Gola, M., Sabatier, J. -M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+blocking+of+voltage-gated+K%2B+channels+treats+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+inhibits+T-cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation.</a> J. Immunol. , 936-944 (2001).</li>
<li>Devaux, J., Forni, C., Beeton, C., Barbaria, J., Beraud, E., Gola, M., Crest, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+basic+protein-reactive+T+cells+induce+conduction+failure+in+vivo+but+not+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Myelin basic protein-reactive T cells induce conduction failure in vivo but not in vitro.</a> Neuroreport. , 317-320 (2003).</li>
<li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+monitoring+of+adoptive+delayed+type+hypersensitivity+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction and monitoring of adoptive delayed type hypersensitivity in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).</li>
</ol>

Un prelievo di sangue dalla vena safena è un modo conveniente per ottenere piccole quantità di sangue senza anestesia. Se campionamento ripetuto è necessario, verificare le regole per assicurarsi di non attirare troppo sangue da un ratto. Prelievo di sangue da puntura cardiaca è un modo conveniente per ottenere grandi quantità di sangue, ma questa è una procedura terminale. L&#39;animale deve essere l&#39;eutanasia al termine del prelievo del sangue. Queste tecniche (come tutte le tecniche su animali vivi) dovrebbe essere il...

<table><tbody><tr><td>Ago 20G 1/2</td><td>Strumento</td><td>BD Biosciences</td><td>305176</td><td>Per la puntura della vena safena</td></tr><tr><td>Microvette 300</td><td>Strumento</td><td>Sarstedt Ltd</td><td>20.1308.100</td><td>Per raccogliere il sangue dalla vena safena</td></tr><tr><td>Tagliacapelli elettrico</td><td>Strumento</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>CLP-32130</td><td></td></tr><tr><td>Ago 23 G 1</td><td>Strumento</td><td>BD Biosciences</td><td>305145</td><td>Per la puntura cardiaca</td></tr><tr><td>Siringa di plastica da 5 ml, con estremità liscia</td><td>Strumento</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-12</td><td>Per la puntura cardiaca</td></tr></tbody></table>

disegno di sangue di ratti attraverso la vena safena e da puntura cardiaca

Drawing Blood from Rats through the Saphenous Vein and by Cardiac Puncture

Prelievo di sangue da roditori è necessaria per un gran numero di sia in vitro e in vivo. Siti di prelievi di sangue sono numerose nei roditori: retro-orbitale del seno, la vena giugulare, vena mascellare, della vena safena, cuore. Ogni tecnica ha i suoi vantaggi e svantaggi, e alcuni non sono stati approvati più in alcuni paesi (ad esempio, retro-orbitale disegna in Olanda). Una discussione di diverse tecniche di sangue disegno sono disponibili 1-3. Qui, presentiamo due tecniche di prelievo di sangue da topi, ognuno con le sue applicazioni specifiche. Prelievo di sangue dalla vena safena, purché sia ​​fatto nel modo giusto, induce disagio minimo negli animali e non richiede anestesia. Questa tecnica permette ripetuti disegna di piccole quantità di sangue, come necessarie per gli studi di farmacocinetica 4,5, determinando la chimica al plasma, o conta ematica 6. Puntura cardiaca permette la raccolta di grandi quantità di sangue da un singolo animale (fino a 10 ml di sangue può essere prelevato da un topo 150 g). Questa tecnica è quindi molto utile come procedura terminale quando un prelievo di sangue dalla safena non avrebbe fornito un campione abbastanza grande. Noi usiamo puntura cardiaca quando abbiamo bisogno di una quantità sufficiente di siero di un ceppo specifico di ratti a crescere le linee di linfociti T in vitro 4-9.

I prelievi di sangue sono necessari in un gran numero di studi, ad esempio per studiare il profilo farmacocinetico di un composto. Qui, dimostriamo come disegnare sangue topi utilizzando due tecniche: prelievo di sangue dalla vena safena o da puntura cardiaca.

Disegno di sangue di ratti attraverso la vena safena e da puntura cardiaca

Il prelievo di sangue dai roditori è necessario per un gran numero di studi, sia in vitro che in vivo. I siti di prelievo ematico nei roditori sono molteplici: ...

Ciao, sono Christine Beaton. Sono un ricercatore assistente nel laboratorio di George Chen del Dipartimento di Fisiologia e Biofisica presso l'Università della California di Irvine. E nel video che state per guardare con l'aiuto di Adriana Garcia, una studentessa laureata del laboratorio.Vi mostrerò due tecniche per prelevare sangue dai ratti. La prima tecnica che vi mostreremo è il prelievo di sangue dalla vena safena. Questa è una tecnica molto utile se si desidera ottenere piccole quantità di sangue dal ratto senza anestesia.Ad esempio, se si sta conducendo uno studio di farmacocinetica, che richiede piccole quantità di sangue prelevate a intervalli regolari. La seconda tecnica che vi mostreremo è il prelievo di sangue mediante puntura cardiaca. Questa è una tecnica terminale, pertanto il ratto deve essere sacrificato al termine del prelievo ematico.Ma il vantaggio di questa tecnica è che può fornire quantità molto maggiori di sangue, diversi millilitri. Una volta definita l'area, applichiamo una normale crema per la pelle soprattutto per evitare che peli si stacchino e finiscano nel tubo, causando la coagulazione del sangue. Poi, con il pollice, eserciterò una pressione in un punto preciso in modo che la vena si gonfi leggermente, dopodiché Adriana pungerà la vena; a volte la vena si sposta e in tal caso non riusciamo a colpirla, quindi ripetiamo la puntura.Ora che abbiamo perforato la vena, delle gocce di sangue fuoriescono a intervalli regolari; le raccogliamo quindi con una microprovetta e continuiamo finché non abbiamo abbastanza sangue per il nostro saggio o finché non smette di uscire sangue. A seconda del ratto e della qualità della perforazione, otteniamo una maggiore o minore quantità di sangue dal cervello. Per favorire l'uscita di ulteriore sangue, comprimiamo la gamba.Questa è la quantità di sangue che otteniamo tipicamente da un prelievo venoso. Ora sono pronto a mostrarvi come eseguire il kaun. Per questa procedura, ciò di cui abbiamo davvero bisogno è soltanto una siringa di plastica da cinque millilitri e un ago da 23 gauge.Quindi il ratto è profondamente anestetizzato con alano, e applico una maschera, costituita da una siringa con un fazzoletto Kim imbevuto di alano, per assicurarmi che il ratto non si risvegli. Essendo destro, pongo l'indice sinistro a livello del plesso solare per orientarmi. Poi, per individuare il cuore, mi sposto di circa un centimetro più in alto, leggermente verso destra, inserendo la siringa con un angolo di circa 45 gradi.E se sono nel cuore, dovrei avere un flusso costante di sangue. Se non sono nel cuore, posso andare più in profondità o più in superficie. Utilizzando questa tecnica, dovrei essere in grado di prelevare diversi millilitri di sangue da un singolo ratto.Certo, quando il cuore si ferma, anche il flusso sanguigno si interromperà contemporaneamente. Pertanto è necessario anestetizzare profondamente il ratto, ma senza farlo morire troppo rapidamente. Quando la siringa è piena, l'ho staccata dall'ago e l'ho versata in un tubo, facendola scendere lentamente per evitare emolisi, poiché desidero poter utilizzare in seguito il mio siero per colture cellulari o per diluire i farmaci da iniettare.E poiché ho lasciato l'ago in posizione, posso provare a vedere se riesco a prelevare ancora sangue da quella mano. E ancora, se il flusso è molto ridotto, come ora, muoverò l'ago su e giù per verificare se riesco a trovare un punto in cui è possibile prelevare più sangue. E ovviamente, una volta trovato il punto, non si deve muovere l'ago.Abbiamo appena mostrato come prelevare sangue dai ratti, sia dalla vena ombelicale sia mediante puntura cardiaca. Buona fortuna con i vostri esperimenti.

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Cateterismo cronico dei vasi sanguigni nel ratto è spesso necessaria per la somministrazione di sostanze, ottenere campione di sangue per un periodo di tempo o per le misure dirette consapevole della pressione arteriosa. Cateterismo arterioso femorale di ratto e le corrispondenti misure della pressione arteriosa nell'animale cosciente sarà dimostrato.

Femorale cateterismo arterioso e venoso per il campionamento del sangue, Drug Administration e pressione sanguigna consapevole e misure di frequenza cardiaca

I campioni di sangue sono utili per valutare i biomarcatori degli stati fisiologici o della malattia in vivo. Qui descriviamo la metodologia per campionare il sangue dalla vena laterale della coda nel ratto. Questo metodo fornisce campioni rapidi con dolore e invasività minimi.

Prelievo di sangue dalla vena della coda laterale del Topo

Qui, descriviamo un metodo di prelievo di sangue della vena della coda semplice in ratti anestetizzati con non utilizzando un sistema di tubo di aspirazione. Questo metodo riduce il rischio di esposizione diretta al sangue e semplifica prendendo campioni multipli da un singolo prelievo venoso.

Ripetuto il prelievo di sangue dalla vena di coda dei ratti Non anestetizzati con un sistema di raccolta di sangue sotto vuoto

Qui, presentiamo un protocollo per raccogliere campioni di sangue dalla vena succlavia del ratto.

Puntura della vena succlavia come metodo alternativo di raccolta del campione di sangue in ratti

Tecniche microchirurgiche dettagliate sono dimostrate per stabilire un modello di ratto di cannulazione della vena giugulare a lungo termine per la raccolta sequenziale del sangue nello stesso animale. I parametri fisiologici ed ematologici sono stati monitorati durante la fase di recupero del ratto. Questo modello è stato applicato per studiare la farmacocinetica del polifenolo somministrato per via orale senza indurre stress animale.

Abilità microchirurgiche di stabilire la cannulazione permanente della vena giugulare nei ratti per il campionamento seriale del sangue del farmaco somministrato per via orale

Il presente protocollo descrive un metodo semplice ed efficace per la raccolta dinamica e in tempo reale del sangue del cuore di ratto utilizzando la tecnica della microdialisi.

Estrazione dinamica continua del sangue dal cuore di ratto tramite tecnica di microdialisi non invasiva

Qui, presentiamo un protocollo per offrire alternative di raccolta del sangue rapide, facili e affidabili per il modello di ratto. Descriviamo tre diversi metodi di prelievo del sangue in base al contesto: puntura della vena della coda in anestesia o su un animale cosciente e puntura della vena del pene dorsale in anestesia.

Puntura modificata della vena della coda e della vena del pene per il prelievo di sangue nel modello di ratto

Qui presentiamo una combinazione di efficaci metodi di restrizione dei ratti e puntura della vena succlavia che consentono una raccolta di sangue rapida, sicura e ripetuta nei ratti senza anestesia.

Prelievo di sangue della vena succlavia nei ratti coscienti

La puntura cardiaca della sottoclavia è un metodo semplice e affidabile per raccogliere sangue terminale nei topi. È facile da usare e garantisce campioni ad alta purezza.

Raccolta di sangue cardiaca tramite puntura succlavia nei topi

Cellule killer naturali sono una piccola popolazione di linfociti. Qui mostriamo come isolare queste cellule dal sangue umano per selezione negativa, utilizzando un kit da Technologies StemCell. Le cellule ottenute sono vitali e incontaminata dagli anticorpi, e quindi pronti per essere utilizzati per una serie di procedure.

Arricchimento di cellule NK dal sangue umano con il kit RosetteSep Technologies StemCell

Impara due tecniche di prelievo ematico nei ratti: dalla vena safena senza anestesia e dalla puntura cardiaca per volumi maggiori. Questi metodi sono essenziali per studi farmacocinetici etici.

Disegno di sangue di ratti attraverso la vena safena e da puntura cardiaca

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