Name: Creazione del Modello reversibile Rat colestatico (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-21T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: Impara a creare un modello colestatico reversibile nel ratto utilizzando tecniche microchirurgiche e anestesia con isoflurano. Questo metodo consente di studiare la fisiopatologia della colestasi e le sue implicazioni cliniche.

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1. Rat anatomia biliare Il diametro del condotto biliare e la lunghezza media è stato di 1 mm e 29 mm, rispettivamente. La distanza media tra il piloro e la papilla duodenale era di 28 mm. Ci sono due dotti pancreatici principali che si aprono nel dotto biliare - il condotto anteriore si apre sul lato sinistro e il condotto posteriore si apre sul lato destro. Oltre a questi canali principali, una serie di canali minori che drenano tutte e tre le parti del pancreas aperta direttamente al dotto biliare 6. 2. Tecnica Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti in accordo con il National Institutes of linee guida Salute per la ricerca etica e sono stati approvati dal comitato di ricerca dell&#39;istituzione e Cura Comitato degli animali. Maschi Sprague-Dawley di 8 settimane sono stati utilizzati per questa dimostrazione. I ratti sono stati ottenuti da Charles River Laboratories a Wilmington, MA e tutti sono stati oltre 300 grammi. Ratti ha avuto accesso alla dieta standard di laboratorio e sono stati alloggiati insieme in condizioni standard di laboratorio. I ratti sono stati anestetizzati con isofluorane inizialmente e tenute sotto anestesia durante l&#39;intervento chirurgico con isofluorane attraverso una maschera. Una linea mediana incisione di 2 cm è stata fatta a partire dal xiphisternum. Una volta che la fascia è stata aperta, i lobi del fegato sono stati retratto cranialmente con arrotolatore uno Sen, e il duodeno era ritirato caudalmente con Q-Tips. Il dotto biliare è stato identificato come una struttura tubolare entrare nel duodeno. Il dotto biliare è stato messo sotto tensione e in parte a cielo aperto. Un tubo in polietilene sterile 5 cm di lunghezza con un diametro interno di 0,6 mm e un diametro esterno di 0,9 mm è stata utilizzata. Una fine di questo tubo è stato termosaldato e l&#39;altra estremità era dolcemente smussati. La fine smussato è stato poi passato nel dotto biliare. Questo è stato fissato in posizione con 8-0 punti di sutura in nylon sia prossimale e distale per l&#39;apertura del dotto biliare. Il tubo rimanenti insieme con l&#39;estremità sigillata è stata posta nella cavità peritoneale. La sede operativa è stata irrigata con soluzione fisiologica. L&#39;addome è stato poi chiuso in 2 strati, con sutura poliglactina 4-0. La linea alba si è chiusa con sutura continua e le suture interrotte cutanea sono stati collocati. Colla pelle è stata poi applicata sulla pelle. I ratti sono stati autorizzati a recuperare in condizioni di laboratorio standard con il monitoraggio quotidiano del peso corporeo per assicurare una corretta idratazione. Per l&#39;operazione di inversione colestasi, i ratti sono stati anestetizzati con isofluorane come descritto in precedenza. L&#39;addome è stato aperto il sito di incisione precedente. Il tubo è stato identificato e portato fuori dalla cavità peritoneale. Aderenze omento attorno al tubo vengono liberati mediante dissezione smussa e taglienti. Un sito nel duodeno è stato poi identificato per un posizionamento confortevole del tubo duodenostomia. Una sutura stringa borsa, 2-3 mm di diametro, è stato poi messo in nylon con 8-0. Il duodeno è stato poi inaugurato all&#39;interno di questa sutura stringa borsa. La fine sigillata del tubo è stato poi tagliato a misura appropriata. Libero flusso della bile è stata assicurata. Questa estremità del tubo è stato poi messo nel duodeno e la sutura stringa di borsa è stato serrato. L&#39;addome era irrigata e chiuso a strati. In uno studio precedente, in cui choledochoduodenostomy è stata effettuata utilizzando una tecnica diversa, i topi erano sopravvissuti per 12 settimane, i topi erano sani durante quel periodo. Anche questo studio ha confermato l&#39;inversione di cambiamenti biochimici e istologici dopo choledochoduodenostomy nei ratti sottoposti ad occlusione del dotto biliare per un periodo di 2 settimane 7.

<ol><li>Gouma, D. J., Roughneen, P. T., Kumar, S., Moody, F. G., Rowlands, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+nutritional+status+associated+with+obstructive+jaundice+and+biliary+drainage+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Nutr%22%5BJournal%5D)">Changes in nutritional status associated with obstructive jaundice and biliary drainage in rats.</a> Am J Clin Nutr. 44, 362-369 (1986).</li>
<li>Ohtsuka, M., Miyazaki, M., Kondo, Y., Nakajima, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil-mediated+sinusoidal+endothelial+cell+injury+after+extensive+hepatectomy+in+cholestatic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil-mediated sinusoidal endothelial cell injury after extensive hepatectomy in cholestatic rats.</a> Hepatology. 25, 636-641 (1997).</li>
<li>Abe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kupffer+cell-derived+interleukin+10+is+responsible+for+impaired+bacterial+clearance+in+bile+duct-ligated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Kupffer cell-derived interleukin 10 is responsible for impaired bacterial clearance in bile duct-ligated mice.</a> Hepatology. 40, 414-423 (2004).</li>
<li>Saiki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preoperative+internal+biliary+drainage+is+superior+to+external+biliary+drainage+in+liver+regeneration+and+function+after+hepatectomy+in+obstructive+jaundiced+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Preoperative internal biliary drainage is superior to external biliary drainage in liver regeneration and function after hepatectomy in obstructive jaundiced rats.</a> Ann Surg. 230, 655-662 (1999).</li>
<li>Subhas, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+methylprednisolone+on+warm+ischemia-reperfusion+injury+in+a+cholestatic+rat+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Protective effect of methylprednisolone on warm ischemia-reperfusion injury in a cholestatic rat liver.</a> Am J Surg. 199, 377-380 (2010).</li>
<li>Kara, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anatomical+study+on+the+rat+pancreas+and+its+ducts+with+emphasis+on+the+surgical+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Anat%22%5BJournal%5D)">The anatomical study on the rat pancreas and its ducts with emphasis on the surgical approach.</a> Ann Anat. 187, 105-112 (2005).</li>
<li>Ryan, C. J., Than, T., Blumgart, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choledochoduodenostomy+in+the+rat+with+obstructive+jaundice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Choledochoduodenostomy in the rat with obstructive jaundice.</a> J Surg Res. 23, 321-331 (1977).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Colestasi porta ad una miriade di cambiamenti nel sistema gastrointestinale. Gli studi sono stati fatti guardando i cambiamenti nel sistema immunitario e lo stato nutrizionale. Colestasi 1-3 possono influenzare gli esiti di interventi di chirurgia epatica. Sono stati condotti studi per migliorare gli esiti di interventi chirurgici epatica in presenza di colestasi. 4-5 Con il miglioramento della medicina e della ricerca, ulteriori studi saranno fatto su colestasi. Quindi è necessario avere un buon m...

creazione del modello reversibile rat colestatico

Creation of Reversible Cholestatic Rat Model

Colestasi è una condizione clinica comunemente incontrate dai chirurghi e gastroenterologi. Colestasi può causare diversi cambiamenti fisiologici e influenzano lo stato nutrizionale e risultati chirurgici. Studio delle alterazioni fisiopatologiche che si verificano nel fegato e altri organi è di importanza. Vari studi sono stati condotti in modelli di ratto colestatico. Abbiamo usato un modello reversibile ratto colestatico nel nostro recente studio guardando il ruolo di metilprednisolone nel danno da riperfusione ischemia. Varie tecniche per la creazione di un modello reversibile colestatico sono stati descritti. Creazione di un modello reversibile ratto colestatico può essere difficile in vista della taglia più piccola e unica anatomia hepatopancreatobiliary nei ratti. In questo articolo il video dimostra la creazione di un modello colestatico reversibile. Questo modello può essere utilizzato in vari studi, come ad esempio guardando i cambiamenti nutrizionali, fisiologici, patologici, alterazioni istologiche e immunologiche nel tratto gastrointestinale. Questo modello può essere utilizzato anche per vedere gli effetti di colestasi e vari interventi terapeutici sui principali interventi di chirurgia epatica.

Colestasi è una condizione clinica comunemente incontrate dai chirurghi e gastroenterologi. Creazione di un modello reversibile ratto colestatico può essere difficile in vista della taglia più piccola e unica anatomia hepatopancreatobiliary nei ratti. In questo articolo il video dimostra la creazione di un modello colestatico reversibile.

Creazione del Modello reversibile Rat colestatico

La colestasi è una condizione clinica comunemente riscontrata sia dai chirurghi che dai gastroenterologi. La colestasi può causare varie alterazioni fisiologiche e...

Creazione di un modello ratto reversibile di colestasi. Salve a tutti. Sono un specializzando in Chirurgia Generale presso l'Ospedale e i Centri Medici di Providence a Southfield, Michigan.Oggi dimostrerò la creazione di un modello reversibile di ratto con colestasi. Il ratto viene anestetizzato utilizzando isoflurano nella camera e successivamente con una maschera. Durante l'intervento, si usa un tubo in poliestere con un diametro esterno di 0,9 millimetri e un diametro interno di 0,6 millimetri, con un'estremità aperta e l'altra sigillata. Gli strumenti utilizzati includono un set standard di strumenti microchirurgici per ratto, spatole oftalmiche, bastoncini di ovatta e nylon 8-0. L'intervento viene eseguito utilizzando un microscopio operatorio.Alternativamente, può essere eseguito utilizzando loupes chirurgici. Qui viene applicato un campo operatorio stabile. Questa procedura viene eseguita rispettando tutte le precauzioni sterili.Si pratica un'incisione mediana di due centimetri a partire dallo sterno zip. I tessuti sottocutanei e la fascia vengono aperti con le forbici. Qui viene aperto il peritoneo, esponendo il fegato.Assicurare l'emostasi utilizzando una cauterizzazione manuale. Questa è la porzione mediana e il lobo sinistro del fegato. Anatomia biliare del ratto. Questo è un diagramma schematico dell'anatomia biliare del ratto.Il fegato del ratto è diviso in lobi mediano destro, sinistro e caudato. Questo è il nu e lo stomaco, e questa è la via biliare. Qui si osserva che una porzione significativa della via biliare non è associata alla vena porta e all'arteria epatica.È questa porzione del dotto biliare che viene utilizzata per l'aggancio e la creazione della colangite ostruttiva. I lobi epatici vengono retratti utilizzando un retraore a pinza e un bastoncino di cotone per tirare verso il basso il num. Il dotto biliare viene quindi agganciato mediante uno strumento microchirurgico in prossimità delum.Questo è lo stesso passaggio di aggancio del dotto biliare, che viene dimostrato in un diverso modello di ratto. Ancora una volta, si tratta dello stesso passaggio di aggancio del dotto biliare, registrato dall'esterno del microscopio operatorio. Per la creazione della colestasi, un filetto polisub suture viene quindi passato al di sotto del dotto biliare e il dotto biliare viene messo in trazione.Questo è il dotto biliare sotto trazione. Questa è una vista ingrandita. Il dotto biliare viene aperto qui.Il bordo del tubo poli viene quindi inserito in questo dotto biliare. Utilizziamo uno strumento microchirurgico per alimentatori a tubo per assistenza in questo procedimento. È necessario fare attenzione a inserire delicatamente il tubo.Viene quindi praticata un'apertura nel dotto biliare prossimale. Un filo di sutura in nylon numero otto viene quindi passato attraverso questa apertura. Il filo di sutura ATO viene quindi legato con tre nodi quadrati per fissare il tubo in posizione.Viene creata una seconda finestra al di sotto del dotto biliare prossimale, vicino al primo punto di sutura. Un altro filo di sutura ATO viene utilizzato per fissare il tubo in posizione prossimale. Successivamente, viene praticata una finestra nella parte distale del dotto biliare e il filo di sutura ATO viene fatto passare attraverso di essa.Questo viene utilizzato inizialmente per legare il dotto biliare. Il punto viene quindi avvolto intorno al tubo e annodato intorno ad esso, assicurando così saldamente il tubo. Il punto viene tagliato qui; successivamente, il punto di trazione viene rimosso.Qui stiamo eseguendo nuovamente uno zoom indietro. Il tubo viene quindi riposizionato all'interno della cavità peritoneale e disposto in posizione confortevole. L'addome viene quindi lavato utilizzando due ml di soluzione fisiologica.Il liquido viene quindi drenato utilizzando una garza due per due. Viene quindi effettuata un'ultima verifica per confermare la corretta e confortevole posizione del tubo e l'emostasi prima della chiusura dell'addome. La fascia viene chiusa con una sutura continua in poliattina 5-0.La cute viene quindi chiusa con punti di sutura dermici interrotti. Il rigurgito della colestasi viene invertito addestrando il cubo di poliestere nell'odume. L'inversione della colestasi viene dimostrata nel ratto nello stesso contesto. Qui. La cute e la fascia vengono tagliate con le forbici.Il fegato viene retratto e si esercita una trazione sul retto. Con i bastoncini di cotone, identifichiamo un punto nel retto in cui posizionare comodamente il tubo in poliestere. Successivamente, posizioniamo suture a scoppio con filo 8/0 o nylon attorno al sito precedentemente selezionato per l'inserimento del tubo.Assicuriamo che vengano prelevati campioni del muscolo sieroso durante ogni punto di sutura. Il tubo in polietilene (NEP) viene quindi estratto dalla cavità peritoneale. Nei casi in cui il tubo sia stato lasciato in sede per un periodo più lungo, potrebbe esserci una notevole adesione tissutale o adesione mentale attorno al tubo, che dovrà essere delicatamente liberata.Il tubo viene quindi tagliato con le forbici sopra un tampone per raccogliere il drenaggio biliare. Nei casi in cui il tubo è stato lasciato in sede per un periodo più lungo, si osserva una quantità significativa di bile che fuoriesce. Quando il tubo viene aperto, il duramadre viene quindi inciso al centro del punto di sutura con filo a impulsi, utilizzando le forbici, assicurandosi che tutta la spessore del duramadre sia stato completamente aperto.Il tubo viene quindi inserito nel nu e verifichiamo che giaccia comodamente e sia allineato nella direzione corretta. La sutura di fissaggio viene quindi stretta con tre nodi quadrati per ancorare il tubo nel dynam. La ferita viene poi irrorata per rimuovere la bile, che potrebbe essersi fuoriuscita durante la procedura, e l'ADOS viene quindi chiuso per assicurare che il tubo giaccia comodamente e che vi sia un'adeguata emostasi prima della chiusura.Dimostrazione del drenaggio biliare qui, solo a scopo dimostrativo, stiamo estraendo il tubo dal Jordan per dimostrare che c'è un drenaggio libero di bile dal tubo. Applicazione di questo modello, applicazione di questo modello. Questo modello può essere utilizzato per studiare le alterazioni fisiologiche, patologiche e istologiche del sistema biliare e del tratto gastrointestinale associate alla colestasi. Questo modello può essere impiegato per studiare gli effetti della colestasi sull'intervento chirurgico epatico e può inoltre essere utilizzato per analizzare i cambiamenti dello stato nutrizionale associati alla colestasi.

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Qui descriviamo un metodo comune per indurre la lesione cronica del fegato nei topi di alimentazione di una dieta di colina-carenti ed etionina-completati (CDE). Dimostriamo che la sorveglianza sanitaria, aspersione epatica, isolamento e conservazione. Un corso di sei settimane di tempo può informare circa il disturbo al fegato, pathohistology, fibrosi, infiammatoria e risposte delle cellule progenitrici del fegato.

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Questo protocollo descrive un metodo comune e fattibile per indurre lesioni epatiche acute (ALI) tramite l'esposizione di CCl4 attraverso un tubo orogastrico. L'esposizione a CCl4 induce ALI attraverso la formazione di specie reattive dell'ossigeno durante la sua biotrasformazione nel fegato. Questo metodo viene utilizzato per analizzare la fisiopatologia di ALI ed esaminare diverse strategie eaptoprotettive.

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