Name: Un tempo reale impedenza elettrica tecnica basata su Misura Invasione di cellule endoteliali monostrato dalle cellule tumorali (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 51 s
Description: Impara a monitorare l'invasione di cellule tumorali attraverso un monostrato di cellule endoteliali usando la tecnica dell'impedenza elettrica in tempo reale. Questo metodo fornisce dati quantitativi sulle interazioni cellulari che simulano i processi metastatici in vivo.

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Questo lavoro è stato generosamente sostenuto da fondi provenienti da bambini Cancer Foundation (Baltimore, MD), Brandon Lee Carrington Foundation (Silver Spring, MD), DOD (W81XWH-10-1-0137) e NIH (R01CA108641). Vorremmo ringraziare il Dott. Anton Wellstein e membri del suo laboratorio per condividere la loro esperienza e ci aiuta ad ottimizzare i metodi presentati.

1. Preparazione <ol><li> Tutte le procedure devono essere eseguite in condizioni sterili in una cappa di coltura di tessuti. </li><li> La stazione xCELLigence è posto in un incubatore 37 ° C in presenza del 5% di CO 2. </li><li> Utilizzare cellule HUVEC passaggio basso, preferibilmente non più di passaggio 6. Inoltre, assicurarsi che le cellule non sono più del 75% confluenti al momento della raccolta. </li><li> Cellule HUVEC sono coltivate in EGM-2 supporti ricostituita con kit di EGM-2 proiettile (Lonza Biosciences) contenente i fattori di crescita, integratori e 5% di siero fetale bovino. </li><li> Tutte le tracce di tripsina dovrebbero essere rimossi da sospensioni cellulari da spinning cellule a 200xg, lavare una volta con PBS, e li risospensione di densità cellulari indicati. </li><li> E-coat xCELLigence piastra 16 con 0,1% di gelatina per 1 ora a 37 ° C o per una notte a 4 ° C. Lavare la piastra con PBS e aggiungere 100 microlitri ricostituito EGM-2 media. Eseguire una lettura del bianco sul sistema xCELLigence per misurare sfondoimpedenza in assenza di cellule. </li></ol> 2. Generazione di HUVEC monostrato <ol><li> Raccogliere un pallone sub-confluenti di cellule HUVEC per tripsinizzazione. Risospendere le cellule in ricostituite EGM-2 supporti ad una densità finale di 2,5 x 10 5 cellule / ml. </li><li> A ciascun pozzetto di un fondo calibrato E-piastra contenente 100 microlitri EGM-2 supporti, aggiungere 100 microlitri della sospensione di cellule HUVEC (2,5 x 10 4 cellule HUVEC). </li><li> Installare immediatamente E-Plate nello strumento xCELLigence. </li><li> Software xCELLigence programma per eseguire letture di impedenza ad intervalli di 10 minuti. </li><li> Lasciare che le cellule endoteliali crescere per 18-21 ore fino a formare un monostrato, come evidenziato da un indice di appiattimento cella (Figura 2). </li></ol> 3. Aggiunta di invadere le cellule e la normalizzazione dei dati. <ol><li> Una volta che un monostrato HUVEC stabile è formata, raccolta cellule tumorali da parte tripsinizzazione e risospendere ad un tane finalilità di 1 x 10 5 cellule / ml in mezzi utilizzati per coltivare cellule tumorali (ad esempio RPMI o DMEM contenente il 10% supporti FBS) </li><li> Letture di impedenza Pausa sul software xCELLigence e rimuovere E-Plate dalla stazione. </li><li> Rimuovere EGM-2 supporti per aspirazione. Aggiungere 100 microlitri di sospensione cellulare tumorale contenente 1 x 10 4 cellule. Generalmente, un rapporto di cellule tumorali 1:2,5: cellule endoteliali inseminate, funziona meglio per il dosaggio. Tuttavia, il rapporto può essere ottimizzato per linee cellulari individuali. </li><li> Posizionare la E-piastra sul sistema xCELLigence in incubatrice e continuare letture di impedenza ad intervalli di 10 minuti. </li><li> Invasione può essere monitorato in tempo reale nei prossimi 6-12 ore come una goccia in indice cella a causa della retrazione delle giunzioni endoteliali e penetrazione di invadere le cellule tumorali. </li><li> Normalizzare i risultati al momento dell'aggiunta di invadere le cellule tumorali. Il software permette la normalizzazione xCELLigence a qualsiasi punto e risultati tempopuò essere visualizzato direttamente nella finestra del software. </li></ol> 4. Rappresentante dei risultati: Un esempio di HUVEC monostrato invasione di cellule metastatiche e non metastatico è mostrato in Figura 3. K7M2 è una linea cellulare di osteosarcoma metastatico. Queste cellule esprimono alti livelli della proteina del citoscheletro linker ezrin, che rappresenta le proprietà invasive di questa linea cellulare 13,14. Quando le cellule HUVEC sono sfidati con K7M2 cellule, vi è un calo di resistenza elettrica entro 6 ore. Questa diminuzione della resistenza elettrica rappresenta l'invasione di monostrato HUVEC dalle cellule tumorali invasori. La cella K12-line, invece, esprime livelli molto bassi di ezrin ed è di conseguenza meno metastatica 13. Sfidando il monostrato HUVEC con K12 risultati cellule in un meno ripido calo nella resistenza come le cellule sono in grado di aderire o invadere attraverso il monostrato HUVEC (Figura 3). <imgsrc files alt='"Figura'></imgsrc> Figura 1. Rappresentazione schematica del processo di flusso di lavoro per l'invasione delle cellule endoteliali da parte delle cellule tumorali. Cellule HUVEC sono placcati su E-piastre rivestite di gelatina e ha permesso di formare un monostrato confluente. Cellule maligne sono aggiunti una volta un monostrato è formata e invasione viene monitorata in tempo reale come indice cella cambia a causa invasione del monostrato endoteliale. <img src="/files/ftp_upload/2792/2792fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Formazione monostrato HUVEC. Le variazioni dell'indice delle cellule come le cellule HUVEC attaccano e si diffondono su elettrodi d'oro gelatina rivestite. La formazione di un monostrato confluente è rappresentato da un indice di stabilizzazione cellule dopo 18 ore. <img src="/files/ftp_upload/2792/2792fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Invasione di cellule HUVEC da K7M2 e K12 cellule di osteosarcoma. Una diminuzione netta delle cell-index avviene entro poche ore dalla introduzione di K7M2 cellule altamente metastatiche. K12 celle, d'altro canto, sono meno metastatica e sono in grado di penetrare il monostrato endoteliale nel modo più efficiente K7M2 cellule. Questo è rappresentato da una meno ripida diminuzione dell'indice cella quando il monostrato HUVEC è sfidato con K12 celle. Controllo rappresenta impedenza del monostrato HUVEC in assenza di cellule tumorali. Esperimenti sono stati eseguiti in triplicato.

<ol><li>Klein, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer.+The+metastasis+cascade%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cancer. The metastasis cascade.</a> Science. 321, 1785-1787 (2008).</li>
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</ol>

Il costo della pubblicazione di questo manoscritto è stato gentilmente fornito da Roche Applied Science.

Il tempo reale saggio di invasione HUVEC è un metodo semplice, ma potente per il monitoraggio invasione. Esso fornisce risultati in tempo reale, che è un vantaggio significativo rispetto ad altre tecniche tradizionali che si basano su analisi end-point. Il dosaggio può essere modificato per testare farmaci, anticorpi, ligandi e proteine ​​come inibitori o stimolatori di metastasi. L&#39;effetto di agenti diversi su endoteliale / carcinoma diafonia può essere valutata come bene. Nell&#39;introdurre agenti esogeni, quali fattori di crescita e medicinali nei terreni di coltura, è importante garantire che non influenzano l&#39;integrità del monostrato HUVEC. Perturbazione del monostrato HUVEC può essere testato introducendo l&#39;agente esogeno in assenza di invadere le cellule, e garantendo che non vi è alcun cambiamento di indice cella. Così, gli opportuni controlli dovrebbero essere inclusi come parte del disegno sperimentale. Diverse linee cellulari differenti curve dimostrano cell-index quanto formano un confmonostrato luent. La forma della curva, così come il massimo cellula-index raggiunto, è tipo cellulare specifico. Cellule HUVEC mostrano una caratteristica transitoria appiattimento indice cella 4-6 ore dopo la semina, seguito da un altro stabilizzazione ad un indice cella superiore dopo 16-18 ore. Quindi, è importante permettere alle cellule formano un monostrato confluente per almeno 18 ore prima dell&#39;aggiunta di cellule tumorali. Poiché l&#39;indice cella dipende l&#39;ambiente ionico in corrispondenza dell&#39;elettrodo / cellula interfase, vari fattori come cellula-morfologia e qualità delle adesioni cellula-cellula influenzano la cellula-index, oltre alla zona del fondo ben coperto. Così, la diminuzione dell&#39;indice cella, che si verifica su di invasione delle cellule tumorali, è funzione di diversi fattori, che includono la retrazione delle giunzioni endoteliali e successiva invasione delle cellule tumorali. Lo strumento xCELLigence è prodotto in tre diverse configurazioni: analizzatore cellula tempo reale(RTCA) SP, RTCA MP e RTCA DP. Lo strumento RTCA SP detiene un 96-ben E-piastra che lo strumento RTCA MP può contenere fino a sei a 96 pozzetti e-piastre contemporaneamente. Questo permette di high-throughput screening di farmaci e composti. Gli esperimenti in questo articolo sono eseguite utilizzando lo strumento RTCA DP, che può contenere tre a 16 e E-piastre. Ogni stazione di partecipazione E-piastra può essere utilizzato in modo indipendente, che consente a più utenti di eseguire esperimenti contemporaneamente. Lo strumento RTCA DP può essere utilizzato anche per studiare la migrazione utilizzando CIM-piastre. Queste sono le piastre a 16 pozzetti con camere superiori e inferiori separati da un polietilene tereftalato (PET) membrana con dimensione dei pori media di 8um. I sensori elettronici sono situati sul lato inferiore della membrana porosa della camera superiore. La camera inferiore funge da serbatoio per chemiotattico per cellule nella camera superiore. Tuttavia, uno dei principali vantaggi del saggio di invasione HUVEC negli CIM-piastre è che l&#39;invasione delle cellule tumorali nel primo is non è limitata dalla dimensione dei pori, l&#39;invasione delle cellule endoteliali dipende diafonia tra le cellule tumorali ed endoteliali. Il saggio di invasione HUVEC può anche essere eseguita su strumento ECIS Z, prodotto da Applied Biophysics (Troy, NY). Lo strumento ECIS Z utilizza una tecnologia simile allo strumento xCELLigence, con differenze nelle configurazioni di array elettrodo. Abbiamo effettuato con successo i test di invasione HUVEC utilizzando gli array ECIS 8 pozzetti. È importante notare che la superficie di fondo è ben maggiore nelle matrici ECIS, che richiede un numero maggiore di cellule endoteliali e tumorali di essere placcato: 2,5 x 10 5 e 1 x 10 5 cellule rispettivamente.

<table><tbody><tr><td>Stazione xCELLigence RTCA DP</td><td><a href="http://www.aceabio.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Roche Group</a></td><td>05469759001</td><td></td></tr><tr><td>Unità di controllo RTCA</td><td><a href="http://www.aceabio.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Roche Group</a></td><td>05454417001</td><td>Notebook con software RTCA preinstallato</td></tr><tr><td>Piastra E-16</td><td><a href="http://www.aceabio.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Roche Group</a></td><td>05469830001</td><td></td></tr><tr><td>Cellule HUVEC</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-2517</td><td></td></tr><tr><td>Mezzo EGM-2</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-3156</td><td></td></tr><tr><td>Kit bullet EGM-2</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-4176</td><td></td></tr><tr><td>Gelatina 0,1% in H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O sterile</td><td>EMD Millipore</td><td>MCPROTO045</td><td></td></tr></tbody></table>

un tempo reale impedenza elettrica tecnica basata su misura invasione di cellule endoteliali monostrato dalle cellule tumorali

A Real-time Electrical Impedance Based Technique to Measure Invasion of Endothelial Cell Monolayer by Cancer Cells

Diffusione metastatica delle cellule maligne richiede degradazione della membrana basale, dell&#39;adesione delle cellule tumorali all&#39;endotelio vascolare, retrazione delle giunzioni endoteliali ed infine invasione e la migrazione delle cellule tumorali attraverso lo strato endoteliale per entrare nel flusso sanguigno come mezzo di trasporto in sedi lontane l&#39;host 1-3. Una volta nel sistema circolatorio, le cellule tumorali aderiscono per capillarità pareti e stravaso al tessuto circostante per formare tumori metastatici 4,5. I vari componenti di interazione cellula-cellula endoteliale tumorale possono essere replicate in vitro sfidando un monostrato di cellule endoteliali della vena ombelicale umana (HUVEC) con cellule tumorali. Studi eseguiti con elettroni e microscopia in contrasto di fase suggeriscono che la sequenza in vitro di eventi rappresenta in maniera corretta il processo metastatico in vivo 6. Qui, descriviamo una tecnica basata elettrico-impedenza che controlla e quantifica in tempo reale le Invasione delle cellule endoteliali mediante cellule tumorali maligne. Giaever e Keese prima descritto una tecnica per misurare fluttuazioni di impedenza quando una popolazione di cellule crescono sulla superficie degli elettrodi 7,8. Lo strumento xCELLigence, prodotto da Roche, utilizza una tecnica simile a misurare le variazioni di impedenza elettrica come cellule attaccano e dispersi in un piatto di coltura coperto con una matrice microelettrodo oro che copre circa l&#39;80% della zona sul fondo di un pozzo. Come cellule aderiscono e diffondono sulla superficie dell&#39;elettrodo, porta ad un aumento di impedenza elettrica 9-12. L&#39;impedenza viene visualizzata come parametro adimensionale definito cell-index, che è direttamente proporzionale alla superficie totale del tessuto-coltura bene che è coperto da cellule. Quindi, la cellula-indice può essere utilizzato per monitorare l&#39;adesione cellulare, diffusione, morfologia e densità cellulare. Il saggio di invasione descritto in questo articolo si basa su cambiamentiin impedenza elettrica all&#39;elettrodo / cellula interfase, come una popolazione di cellule maligne invadono attraverso un monostrato HUVEC (Figura 1). La distruzione delle giunzioni endoteliali, retrazione del monostrato endoteliale e la sostituzione da parte delle cellule tumorali portare a grandi cambiamenti di impedenza. Questi cambiamenti correlano direttamente con la capacità invasiva delle cellule tumorali, cioè, invasione di cellule altamente aggressivi portare a grandi cambiamenti di impedenza della cella e viceversa. Questa tecnica fornisce un duplice vantaggio rispetto ai metodi esistenti di misurazione invasione, come camera di Boyden e dosaggi Matrigel: 1) l&#39;interazione cellula-tumorale delle cellule endoteliali imita più da vicino il processo in vivo, e 2) i dati sono ottenuti in real- tempo ed è più facilmente quantificabile, al contrario di analisi end-point per altri metodi.

Questo articolo descrive una<em&gt; In vitro</em&gt; Tecnica per le cellule tumorali che invadono monitoraggio mediante un monostrato di cellule endoteliali. I dati vengono acquisiti in tempo reale in funzione delle variazioni dell&#39;impedenza sulla superficie degli elettrodi sul fondo del pozzo.

Un tempo reale impedenza elettrica tecnica basata su Misura Invasione di cellule endoteliali monostrato dalle cellule tumorali

La disseminazione metastatica delle cellule maligne richiede la degradazione della membrana basale, l'adesione delle cellule tumorali all'endotelio vascolare, la retrazione di...

Questo video dimostra un metodo per monitorare l'invasione di un monocstrato di cellule endoteliali da parte di cellule tumorali, utilizzando una tecnica basata sull'impedenza elettrica in tempo reale. Innanzitutto, cellule endoteliali provenienti dalla vena ombelicale umana, indicate come VE, vengono seminate in piastre EPL a 16 pozzetti rivestiti con elettrodi d'oro sul fondo dei pozzetti. Per formare un monocstrato confluenziale, vengono aggiunte cellule tumorali che si attaccano alle VE e invadono il monocstrato HVAC, alterando le giunzioni tra le cellule endoteliali. Successivamente, vengono registrate le misurazioni di impedenza, che dipendono dalla superficie totale del fondo del pozzetto coperta dalle cellule.Il grado di invasione può quindi essere determinato in base alle variazioni dell'impedenza elettrica. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come il saggio con camera vuota e il saggio METROGEL, è che le interazioni tra cellule endoteliali e cellule tumorali riproducono in modo più fedele il processo metastatico in vivo, e i dati vengono ottenuti in tempo reale e sono più facilmente quantificabili rispetto all'analisi finale richiesta da altri metodi. Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sull'invasione delle cellule tumorali.È inoltre applicabile ad altri sistemi, come lo studio delle interazioni tra cellule nel sistema immunitario. Inoltre, la fase iniziale dell'esperimento, in cui si osserva la crescita delle cellule UX, può essere utilizzata per valutare la proliferazione cellulare di qualsiasi linea cellulare, senza ulteriori passaggi di invasione, dimostrando che la procedura sarà eseguita da Rahim, studente laureando del mio laboratorio. Tutti i passaggi di questo protocollo devono essere eseguiti in condizioni sterili all'interno di una cappa per colture cellulari.Il sistema Xcel utilizzato per questo esperimento viene mantenuto permanentemente in un incubatore a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica, dedicato esclusivamente a questo strumento fin dal suo primo utilizzo. Lo strumento deve essere lasciato nell'incubatore per almeno 16 ore per permetterne l'equilibrazione con il nuovo ambiente termico e di umidità. Successivamente, preparare Thence EPL 16 rivestendolo con gelatina 0,1% per un'ora a 37 gradi Celsius.Dopo aver rivestito la piastra, lavarla una volta con PBS. Quindi aggiungere 100 microlitri di mezzo e gm due ricostituito per eseguire una lettura di bianco. Per misurare l'impedenza di fondo in assenza di cellule.Posizionare l'EPL nel sistema dell'agente Excel sul computer. Aprire il software dell'agente Excel facendo clic sull'icona del software RTCA sul desktop nella finestra del software. Fare clic sulla scheda layout e selezionare le pozzette contenenti i campioni.Per programmare la frequenza di acquisizione dati in tempo reale, fare clic sulla scheda programma, quindi fare clic sull'icona aggiungi un passaggio. Scansione indica il numero di letture e intervalli indica l'intervallo di tempo tra le letture. Questi valori sono impostati automaticamente rispettivamente su uno e 1,00 minuto.Questo programma il sistema per eseguire una lettura di fondo. Fare clic su aggiungi un passaggio e inserire 300 nella casella delle scansioni e 10 minuti nella casella degli intervalli. Questo programmerà lo strumento per effettuare misurazioni di impedenza per un massimo di 50 ore.Per iniziare l'esperimento, fare clic sull'icona avvia un passaggio. L'impedenza di fondo di ogni pozzetto verrà misurata dopo che è stata eseguita la misurazione del fondo. La finestra visualizza il messaggio.Pronto per il passaggio successivo, fare clic. Passaggio successivo da avviare. A questo punto, è possibile aggiungere le cellule e monitorare la formazione di un monostrato come descritto.Nella sezione successiva, le cellule endoteliali venose umbelicali umane, o VE utilizzate in questo caso, vengono coltivate in mezzo EGM due recostituito con il kit EGM due bullet contenente integratori di fattori di crescita e 5% di FBS. Le cellule devono essere mantenute in un incubatore a 37 gradi Celsius in presenza di 5% di anidride carbonica. Nel giorno dell'esperimento, verificare la confluenza delle HUB E al microscopio: le cellule devono avere un numero basso di passaggi, preferibilmente non superiore a sei e con confluenza inferiore al 75%, per generare un monocstrato uniforme. Raccogliere le cellule mediante tripsinizzazione. Una volta che le cellule si sono staccate dalla fiasca, rimuovere completamente ogni traccia di tripsina mediante centrifugazione a 200 ×g. Dopo la centrifugazione, lavare le cellule una volta con PBS.Quindi ri-sospendere le cellule e il mezzo e GM due ricostituito a una concentrazione di 2,5 × 10⁵ cellule per millilitro. Una volta ri-sospese le cellule, rimuovere il EPL calibrato di fondo dal sistema EXOGEN e aggiungere 100 microlitri della sospensione HX ai 100 microlitri di mezzo E GM due già presenti nella piastra. Posizionare immediatamente il EPL nell'analizzatore cellulare del sistema Excel.Iniziare ad acquisire le letture di impedenza cliccando sul pulsante di avvio nella finestra del software. Lasciare crescere le cellule endoteliali. Il sistema continuerà a effettuare letture di impedenza ogni 10 minuti.Le uve mostrano un caratteristico appiattimento transitorio dell'indice cellulare quattro-sei ore dopo la semina, seguito da un ulteriore stabilizzazione dopo 16-18 ore. Pertanto, è importante lasciare che le cellule formino un monostrato confluenziale per almeno 18 ore. Una volta formato il monostrato, è il momento di aggiungere le cellule invadenti in preparazione al saggio di invasione.Preparare le cellule tumorali invasive. In questo caso vengono utilizzate cellule di osteosarcoma. Iniziare raccogliendo le cellule mediante tripsina.Rimuovere completamente ogni traccia di tripsina centrifugando le cellule a 200 G e lavandole una volta con PPS. Dopo il lavaggio, sospendere le cellule a una densità finale di uno per dieci alla quinta cellule per millilitro nel mezzo utilizzato per coltivare le cellule tumorali, come il mezzo RPMI o DMEA contenente il 10% di FBS. Interrompere temporaneamente l'esperimento facendo clic sull'icona del passaggio di pausa nella finestra del software.Rimuovere l'EPL e aspirare il mezzo EGM-2 dal monostrato cellulare. Aggiungere 100 microlitri di sospensione di cellule tumorali contenente 1 × 10⁴ cellule. In generale, un rapporto di 1 a 2,5 tra cellule tumorali e cellule endoteliali funziona meglio per il saggio.Tuttavia, il rapporto può essere ottimizzato per singole linee cellulari. Rimettere l'EPL nel sistema Excel agent nell'incubatrice. Fare clic sul passaggio continua per proseguire con le letture di impedenza a intervalli di 10 minuti.Monitorare l'invasione in tempo reale nelle successive sei-dodici ore. Una diminuzione dell'indice cellulare risulterà dal restringimento delle giunzioni endoteliali e dalla penetrazione delle cellule tumorali invasive. Al termine dell'esperimento, utilizzare il software Exergen per normalizzare i risultati rispetto al tempo di aggiunta delle cellule tumorali invasive.Il software exergen permette la normalizzazione a qualsiasi punto temporale in cui le VEX sono state coltivate sul sistema exergen, come mostrato in questo video, e successivamente, dopo la formazione del monostrato, sono state aggiunte cellule K7M2 o cellule K12. Come mostrato qui, si verifica una brusca diminuzione dell'indice cellulare entro poche ore dall'introduzione delle cellule K7M2. K7M2 è una linea cellulare di osteosarcoma altamente metastatica.Queste cellule esprimono alti livelli della proteina legante il citoscheletro ene, che spiega le proprietà invasive della linea cellulare. Le cellule K 12, d'altro canto, sono meno metastatiche e non riescono a penetrare il monostrato endoteliale in modo altrettanto efficiente rispetto alle cellule K seven M two. Ciò è rappresentato da una diminuzione meno marcata dell'indice cellulare, come mostrato qui.Il controllo mostrato qui rappresenta l'impedenza del monocstrato uveale. In assenza di cellule tumorali, gli esperimenti sono stati eseguiti in triplice replicato. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come misurare l'invasione in tempo reale generando un monocstrato di cellule endoteliali e sottoponendo il monocstrato a cellule tumorali.I passaggi iniziali dell'esperimento che prevedono la formazione di un monocstrato di HU XL possono essere utilizzati per valutare la proliferazione cellulare mediante impedenza.Two.

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Questo video descrive un test di invasione utilizzando un array a tre camere basato sull'impedenza elettrica. Questa tecnica misura il potenziale invasivo delle cellule tumorali sotto l'influenza di fattori solubili secreti dalle cellule stromali residenti nei microambienti tumorali.

Saggio di impedenza basato su array a tre camere: una tecnica di analisi in tempo reale per valutare il potenziale invasivo delle cellule tumorali misurando l'impedenza elettrica

Fonte: Mudduluru, G., et. al. Misurazione in tempo reale basata sull'impedenza della migrazione e dell'invasione delle cellule tumorali. J. Vis. Exp. (2020)Questo video dimostra un test basato sull'impedenza per misurare l'invasione e la migrazione delle cellule di glioblastoma. Le cellule degradano la matrice extracellulare, si muovono attraverso le membrane microporose e aderiscono agli elettrodi, generando impedenza. Questa analisi in tempo reale riflette il loro potenziale invasivo per le...

Misurazioni basate sull'impedenza dell'invasione delle cellule tumorali cerebrali

Questo protocollo commenti elettrico Cell-substrato Impedance Sensing, un metodo per registrare ed analizzare lo spettro di impedenza di cellule aderenti per la quantificazione di adesione cellulare, la proliferazione, motilità, e le risposte cellulari agli stimoli farmacologici e tossici. Rilevamento di permeabilità endoteliale e la valutazione di cellula-cellula e cellula-substrato contatti sono enfatizzati.

Elettrico Cell-substrato Impedance Sensing per la quantificazione dei Endothelial proliferazione, Barriera funzione e motilità

Il cancro è una malattia letale a causa della sua capacità di metastasi a diversi organi. Determinare la capacità delle cellule tumorali di migrare e invadere in varie condizioni di trattamento è fondamentale per valutare le strategie terapeutiche. Questo protocollo presenta un metodo per valutare le capacità metastatiche in tempo reale di una linea cellulare del cancro del glioblastoma.

Misurazione in tempo reale dell'invasione e dell'invasione delle cellule tumorali basata sull'impedimento

Descriviamo un approccio per rilevare e catturare sottopopolazioni cellulari invasive in tempo reale. Il progetto sperimentale utilizza l'analisi cellulare in tempo reale monitorando i cambiamenti nell'impedenza elettrica delle cellule. Il cancro invasivo, le cellule immunitarie, endoteliali o stromali nei tessuti complessi possono essere catturati e l'impatto delle co-colture può essere valutato.

Rilevamento e acquisizione in tempo reale di sottopopolazioni cellulari invasive da co-colture

Molti geni sovraregolati stimolano la migrazione e l'invasione delle cellule tumorali, portando a una prognosi infausta. Determinare quali geni regolano la migrazione e l'invasione delle cellule tumorali è fondamentale. Questo protocollo presenta un metodo per studiare gli effetti dell'aumentata espressione di un gene sulla migrazione e l'invasione delle cellule tumorali in tempo reale.

Misurazione quantitativa in tempo reale della migrazione e dell'invasione delle cellule tumorali in seguito alla trasfezione sintetica di mRNA

L'attuale studio descrive un protocollo per monitorare i cambiamenti nelle cellule endoteliali della vena ombelicale umana (HUVEC) durante l'infezione virale utilizzando un sistema di analisi cellulare in tempo reale (RTCA).

Monitoraggio dei cambiamenti nelle cellule endoteliali della vena ombelicale umana in seguito a infezione virale utilizzando l'analisi cellulare in tempo reale basata sull'impedenza

Qui dimostriamo la tecnica di utilizzo di biosensori basati sull'impedenza: ECIS e cellZscope, per misurare la forza della barriera endoteliale cerebrale. Descriviamo in dettaglio la preparazione e la tecnica per aggiungere vari stimoli a un modello in vitro dell'endotelio cerebrale. Misuriamo, registriamo e forniamo un'analisi rappresentativa dei risultati.

Misurazione dei cambiamenti nell'integrità della barriera endoteliale cerebrale con due biosensori basati sull'impedenza in risposta alle cellule tumorali e alle citochine

Vi presentiamo un nuovo approccio per quantificare la localizzazione delle nanoparticelle nei vasi di tumori umani xenotrapiantati utilizzando dinamica, imaging in tempo reale intravitale in un modello di embrione aviaria.

Valutazione della captazione nanoparticelle nei tumori in tempo reale utilizzando intravitale Imaging

Una panoramica completa delle tecniche coinvolte nella generazione di un modello murino di cancro orale e monitoraggio quantitativo di invasione tumorale all'interno della lingua attraverso multi-fotone microscopia di cellule marcate è presentato. Questo sistema può essere utilizzato come piattaforma utile per la valutazione molecolare e di efficacia dei farmaci anti-invasiva composti.

Multi-fotone Imaging di invasione delle cellule tumorali in un modello di mouse ortotopico di carcinoma orale a cellule squamose

Impara a monitorare l'invasione di cellule tumorali attraverso un monostrato di cellule endoteliali usando la tecnica dell'impedenza elettrica in tempo reale. Questo metodo fornisce dati quantitativi sulle interazioni cellulari che simulano i processi metastatici in vivo.

Un tempo reale impedenza elettrica tecnica basata su Misura Invasione di cellule endoteliali monostrato dalle cellule tumorali

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