Name: Rilevazione di placche neuritiche nel modello di malattia di Alzheimer mouse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 2 s
Description: Scopri metodi per rilevare placche neuritiche nel modello murino di Alzheimer usando immunocitochimica 4G8 e colorazione con tioflavina S. Queste tecniche offrono alta specificità per le proteine beta-amiloidi.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Questo lavoro è stato sostenuto dal Canadian Institutes of Health Research (CIHR), la Famiglia Townsend, e Jack Brown e Famiglia Alzheimer Research Foundation (a WAS). WS è titolare del Canada Research Chair nella malattia di Alzheimer. PTTL è supportato dal Scienze Naturali e Direttore di Ricerca di Ingegneria e del Michael Smith Fondazione per la borsa di studio Health Research.

1. Fissazione dei cervelli del mouse e criosezionamento <ol><li> Topi transgenici sono sacrificati con anidride carbonica, seguita dalla decapitazione e il cervello estratto. </li><li> Il cervello è sezionato longitudinalmente al centro. La metà del cervello saranno istantaneamente congelati in ghiaccio secco per l'analisi biochimica. L'altro sarà sommersa nel 4% paraformaldeide (PFA) per almeno 48 ore a 4 ° C. </li><li> Dopo la fissazione in PFA 4% per almeno 48 ore, il cervello emi sono trasferiti direttamente nella soluzione di saccarosio al 30% e posto a 4 ° C. Al punto, il cervello dovrebbe essere emi galleggiante nella soluzione di saccarosio. Quando il cervello Hemi affondò sul fondo, di solito richiede circa 48 ore, è pronto per essere incorporato in ottobre per criosezionamento. </li><li> Prima criosezionamento, montare un sottile strato di ottobre sulla manopola e far congelare a -20 ° C. Rimuovere il cervelletto dal resto del cervello e emi posto sullo strato di gelato ottobre Coprire immediatamente il cervello emi con OCT e permettono di congelare lentamente a -20 ° C. Una volta che l'embedding ottobre il cervello si è trasformato opaco, è pronto per essere sezionato. </li><li> Impostare lo spessore di ogni sezione a 30 micron. Raccogliere ogni fetta in un contenitore con la soluzione D'Olomos. </li></ol> 2. Procedura di immunoistochimica per placche neuritiche (gratuito sezioni flottante) <ol><li> Trattare ogni sezione in 88% di acido formico per 15 minuti. Dopo il trattamento con acido formico, la sezione sarà temporaneamente volta opaco e può apparire avvizzire. </li><li> Rimuovere ogni sezione in un piatto e lavare con Tx-PBS (0,3% Triton X-100 in PBS) per 5 min x 3 agitando delicatamente. </li><li> Perossido di blocco endogeno blocco dello 0,5% H 2 O 2 in Tx-PBS, RT 30 minuti agitando delicatamente. </li><li> Lavare con Tx-PBS per 10 min x 3 agitando delicatamente. </li><li> Sezione di blocco con 5% senza grassi del latte scremato sciolto in Tx-PBS a temperatura ambiente per 1 ora agitando delicatamente. </li><li> Incubare le sezioni in anticorpo primario (biotinilato 4g8, 1:500-1:2000, Sigillo) diluito in Tx-PBS contenente 5% del latte a 4 ° C per una notte agitando delicatamente. </li><li> Lavare con Tx-PBS per 10 min x 3 agitando delicatamente. </li><li> Preparare protocollo del produttore soluzione ABC successivo (Elite ABC, Vector Laboratories). Incubare le sezioni in miscela ABC per 30 minuti agitando delicatamente. </li><li> Lavare con Tx-PBS per 10 min x 3 agitando delicatamente. </li><li> Preparare 3,3 '-diaminobenzidina tetraidrocloruro (DAB) (Vector Laboratories) protocollo del produttore successivo. Incubare le sezioni in miscela DAB per 5-10 min. A questo punto, si potrà osservare un colore brunastro svilupparsi su ogni sezione. </li><li> Lavare con Tx-PBS per 10 min x 3 agitando delicatamente. </li><li> Free-floating sezioni cervello sono montate su vetrini rivestiti di gelatina, per aiutare con l'adesione dei tessuti. Le sezioni sono poi essiccate all'aria seguita da compensazione con una serie di xilene e montati in Entellen. </li><li> Placche sono visualizzati al microscopio ottico con ingrandimento 40X e sono quantificati valutando la media della conta targa per fetta per ogni mouse. </li></ol> 3. Thioflavin S colorazione procedura per l'individuazione delle placche neuritiche <ol><li> Sacrificio del mouse e procedure di estrazione del cervello sono quelli indicati in punti da 1.1 a 1.5. </li><li> Montare 4-5 sezioni del cervello emi su un vetrino e lasciare asciugare completamente prima della colorazione. </li><li> Lavare i vetrini con etanolo al 70% per 1 minuto. </li><li> Lavare i vetrini con 80% etanolo per 1 minuto. </li><li> Incubare i vetrini in soluzione filtrata (0,2 micron filtro) thioflavin S (1% a 80% di etanolo) per 15 minuti. (Soluzione Thioflavin S deve essere filtrata prima di ogni utilizzo). Nota: thioflavin S proteggere dalla luce e proteggere i vetrini colorati dalla luce. </li><li> Lavare i vetrini con 80% etanolo per 1 minuto. </li><li> Lavare i vetrini con il 70% etanolo 1 minuto. </li><li> Lavare con acqua distillata due volte. </li><li> Diapositive montare in acquosi di montaggio e permettere che i vetrini ad asciugare al buio per almeno 2 ore, seguita da coprioggetto tenuta con smalto trasparente. Sezioni colorate devono essere conservati al buio a 4 ° C. </li><li> La fluorescenza verde placche colorate possono essere visualizzate con microscropy fluorescenti. Analizzare le diapositive entro una settimana, perché la colorazione svanirà con il tempo. </li></ol> 4. Rappresentante Risultati Nel nostro recente studio sulla efficacia del farmaco anti-epilettico e stabilizzatore dell'umore acido valproico (VPA) per inibire la formazione di placche neuritiche, abbiamo usato il immunocolorazione sopra descritto e thioflavin S colorazione procedure per identificare le placche neuritiche nei topi modello dC (3). La figura 1 rappresenta un tipico 9 mesi APP23 topo transgenico, colorate con 4g8 con anti-Aβ biotinilato e rilevati con il metodo ABC. Placche neuritiche sono chiaramente etichettati con l'anticorpo e sono indicati dalle frecce bianche. Mediante colorazione thioflavin S, abbiamo rilevato deposizione neuritiche targa 2 mesi vecchia APP23xPS traditopi nsgenic (Figura 2). Thioflavin S legato Aβ contenenti placche neuritiche appare verde al microscopio a fluorescenza (indicato da frecce bianche). Abbiamo dimostrato che il trattamento con VPA, la formazione di placche neuritiche è significativamente ridotto (3). In un altro studio, abbiamo studiato l'ipossia molecolare collegamento sottostante e patogenesi dell'Alzheimer. Ancora una volta, utilizzando sia 4g8 anti-Aβ colorazione immunoistochimica e colorazione thioflavin S, abbiamo scoperto che l'ipossia favorito la formazione di placche contenenti Aβ neuritiche (4). <img src="/files/ftp_upload/2831/2831fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Analisi immunoistochimica della formazione di placche neuritiche in topi transgenici dC. APP23 topi all'età di 9 mesi sono stati sacrificati e sono stati sezionati, fissa e sezionato. Placche neuritiche nel dell'ippocampo sono state rilevate con un anti-Aβ 4g8 anticorpo e sono stati sviluppati utilizzando i metodi ABC e DAB. Le placche sono state visualizzate mediante microscopia ottica con 40X. Frecce bianche indicano placche neuritiche Aβ. <img src="/files/ftp_upload/2831/2831fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Colorazione Thioflavin S di placche neuritiche nei topi dC modellato. APP23xPS45 doppio topi transgenici a 8 settimane di vita sono stati sacrificati e sono stati sezionati, fissa e sezionato. Piaghe neuritiche nel dell'ippocampo sono state confermate mediante colorazione fluorescente thioflavin S e visualizzati al microscopio con ingrandimento 40x. Frecce bianche indicano thioflavin S placche neuritiche macchiato.

<ol><li>Glenner, G. G., Wong, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease%3A+initial+report+of+the+purification+and+characterization+of+a+novel+cerebrovascular+amyloid+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease: initial report of the purification and characterization of a novel cerebrovascular amyloid protein.</a> Biochem Biophys Res Commun. 120, 885-890 (1984).</li>
<li>Hardy, J., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+amyloid+hypothesis+of+Alzheimer%27s+disease%3A+progress+and+problems+on+the+road+to+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics.</a> Science. 297, 353-356 (2002).</li>
<li>Qing, H., He, G., Ly, P. T., Fox, C. J., Staufenbiel, M., Cai, F., Zhang, Z., Wei, S., Sun, X., Chen, C. H., Zhou, W., Wang, K., Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Valproic+acid+inhibits+Abeta+production%2C+neuritic+plaque+formation%2C+and+behavioral+deficits+in+Alzheimer%27s+disease+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Valproic acid inhibits Abeta production, neuritic plaque formation, and behavioral deficits in Alzheimer's disease mouse models.</a> J Exp Med. 205, 2781-2789 (2008).</li>
<li>Sun, X., He, G., Qing, H., Zhou, W., Dobie, F., Cai, F., Staufenbiel, M., Huang, L. E., Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+facilitates+Alzheimer%27s+disease+pathogenesis+by+up-regulating+BACE1+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Hypoxia facilitates Alzheimer's disease pathogenesis by up-regulating BACE1 gene expression.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 18727-18732 (2006).</li>
</ol>

Tutti gli esperimenti sono stati condotti in conformità con l&#39;Università di cura degli animali Columbia britannica e il comitato Usa e le linee guida CIHR.

Immunoistochimica utilizzando il biotinilato macchie anticorpo marcato 4g8 placche neuritiche nel AD modellato topi con specificità. Il risultato colorazione consente la quantificazione e il confronto del carico di placca tra i diversi gruppi di trattamento. Ci sono diversi passi cruciali che potrebbero influenzare l&#39;esito. Poiché il cervello emi non sono perfusi prima dell&#39;estrazione dal cranio, la cura deve essere usato durante il processo di estrazione al fine di prevenire danni al cervello emi. Inoltre, poiché il cervello emi è passivamente perfuso, si consiglia di incubazione in 4% PFA per almeno 48 ore a 4 ° C prima immersione nella soluzione di saccarosio al 30%. In alternativa, la perfusione transcardial poteva essere fatto prima di estrarre il cervello. Se il cervello è fissata correttamente, dovrebbe avere una consistenza gommosa. Nel caso in cui il cervello non è fissato bene, le sezioni sarà facile strappare nella soluzione D&#39;Olomos o durante le procedure di colorazione. L&#39;anticorpo monoclonale 4g8 è reattivo ai residui di aminoacidi 17-24 di Aβ e ha riconosciuto l&#39;epitopo nella sequenza core (VFFAE). Dal momento che 4g8 è derivato da specie del mouse, si tende a dare una colorazione di fondo più alto. Così, abbiamo scelto di incubare le sezioni alla diluizione indicata con considerazioni a raggiungere un vero segnale, minimizzando la colorazione di fondo. Oltre a immunocolorazione per neuritiche rilevamento targhe con l&#39;anticorpo 4g8, metodo di colorazione uno thioflavin S è anche utilizzato per identificare le placche. Thioflavin S è una miscela omogenea colorante che risulta dalla metilazione di dehydrothiotoluidine con acido solfonico. Thioflavin S non si lega selettivamente i contenuti foglietto beta di proteine, come quelle in oligomeri amiloide. Su vincolante, thioflavin subisce un cambiamento caratteristico blu del suo spettro di emissione. Al contrario vincolante thioflavin S alle forme monomeriche non suscitare un spostamento verso il blu e non poteva essere rilevata con il microscopio a fluorescenza. Colorazione Thioflavin S offre una valida alternativa per lo screening rapido per amiloide come l&#39;intensità della fluorescenza permette una buona visualizzazione di piccole quantità di depositi di amiloide. Tuttavia, uno svantaggio di colorazione thioflavin S è la mancanza di specificità. Molti altri componenti del tessuto tra cui fogli contenenti beta estese, quali fibrinoids, ialina, cheratina, ecc, hanno un po affinità con questo colorante.

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome del reagente e </th><th> Azienda </th><th> Numero di catalogo </th></tr><tr><td> Paraformaldeide </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P6148-1KG </td></tr><tr><td> Polyvinylpyrrolidene </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> PVP40-100G </td></tr><tr><td> Saccarosio </td><td> Fisher Scientific </td><td> S5-3 </td></tr><tr><td> Glicole etilenico </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 324558-2L </td></tr><tr><td> Tissue-Tek ottobre Compound </td><td> Sakura </td><td> 4583 </td></tr><tr><td> 88% di acido formico </td><td> Fisher Scientific </td><td> A118P-500 </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> ICN Biomedicals </td><td> 807426 </td></tr><tr><td> H2O2 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H-1009 </td></tr><tr><td> Biotina etichetta 4g8 anticorpi </td><td> Cedarlane </td><td> SIG-39240-500 </td></tr><tr><td> Elite ABC kit </td><td> Vettore </td><td> PK-6100 </td></tr><tr><td> Imm PATTO DAB </td><td> Vettore </td><td> SK-4105 </td></tr><tr><td> Xilene </td><td> Fisher Scientific </td><td> X4-4 </td></tr><tr><td> Entellan </td><td> EM scienza </td><td> 65037-71 </td></tr><tr><td> SuperFrost * Plus preparati microscopici </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> Criostato </td><td> Leica </td><td> CM-3050-S </td></tr><tr><td> MX35 Premier microtomo lama </td><td> Thermo Scientific </td><td> 3052835 </td></tr><tr><td> Thioflavin S </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T1892-25G </td></tr></tbody></table>

rilevazione di placche neuritiche nel modello di malattia di alzheimer mouse

Detection of Neuritic Plaques in Alzheimer's Disease Mouse Model

Malattia di Alzheimer (AD) è il disturbo più comune neurodegenerativa che porta alla demenza. La formazione di placche neuritiche è una delle caratteristiche patologiche della malattia di Alzheimer. Il componente centrale di placche neuritiche è una piccola proteina chiamata proteina filamentosa β amiloide (Aβ) 1, che è derivata da sequenziale taglio proteolitico della proteina beta-amiloide precursore (APP) da β-secretasi e γ-secretasi. L&#39;ipotesi amiloide comporta che Aγ contenenti placche come il meccanismo sottostante tossici in AD patologia 2. L&#39;analisi post-mortem della presenza di placca neuritiche conferma la diagnosi di Alzheimer. Per ulteriormente la nostra comprensione della neurobiologia Aγ nella patogenesi dell&#39;Alzheimer, vari ceppi di topi che esprimono AD-correlati mutazioni nei geni APP umani sono stati generati. A seconda della gravità della malattia, questi topi si svilupperà placche neuritiche in età diverse. Questi topi servire come preziosi strumenti per lo studio della patogenesi e sviluppo di droghe che potrebbero influenzare il percorso di elaborazione APP e la formazione della placca neuritiche. In questo protocollo, utilizziamo un metodo di immunoistochimica per l&#39;individuazione specifica delle placche neuritiche nei topi modello dC. Noi specificamente discutere della preparazione di estrarre il cervello e mezzo, la fissazione paraformaldeide, criosezionamento, e due metodi per rilevare placche nevrotico nel AD topi transgenici: rilevazione immunoistochimica utilizzando il metodo ABC e DAB e la rilevazione con metodo di colorazione fluorescente thiofalvin S.

Una delle caratteristiche patologiche di Alzheimer è la formazione di placche di amiloide β neuritiche proteina positivo. In questo protocollo si descrivono due metodi per rilevare placche neuritiche in topi transgenici modello AD: rilevazione immunoistochimica utilizzando il metodo ABC e DAB e la rilevazione con metodo di colorazione fluorescente thioflavin S.

Rilevazione di placche neuritiche nel modello di malattia di Alzheimer mouse

La malattia di Alzheimer (AD) è il disturbo neurodegenerativo più comune che conduce alla demenza. La formazione di placche neuritiche è uno dei tratti patologici distintivi...

L'obiettivo generale di questa procedura è preparare i cervelli di topi modello di Alzheimer per la rilevazione delle placche reticolari mediante immunoistochimica con l'anticorpo 4G8 e colorazione con tioflavina S. Questo viene ottenuto estraendo innanzitutto il cervello del topo dal cranio e sottoponendolo a perfusione passiva in PFA al 4%, seguita dall'immersione in soluzione di saccarosio al 30% e da sezione crio, in cui il cervello viene tagliato longitudinalmente con uno spessore di 30 micron. Successivamente, le placche reticolari vengono colorate utilizzando l'anticorpo 4G8 e rese visibili mediante il metodo DAB.Inoltre, colorare le placche reticolari mediante la colorazione con flavina S e visualizzarle utilizzando la microscopia a fluorescenza. In definitiva, i risultati ottenuti possono mostrare il deposito di placche reticolari nei tessuti cerebrali attraverso un rilevamento basato su anticorpi e la colorazione con il colorante flavina S. Il vantaggio principale di queste tecniche rispetto ai metodi esistenti è che la colorazione 4G8 e la colorazione con flavina S sono altamente selettive per le placche reticolari contenenti proteine beta.Sebbene questo metodo qui mostrato sia finalizzato alla rilevazione delle placche beta nei topi transgenici per la malattia di Alzheimer, esso può essere utilizzato anche per rilevare le placche beta nella malattia di Alzheimer nell'uomo. Sacrificare i topi transgenici mediante gas anidride carbonica, seguito da decapitazione, estrarre il cervello e sezionarlo longitudinalmente al centro. Congelare rapidamente metà cervello su ghiaccio secco per l'analisi biochimica, immergere l'altra metà in paraformaldeide al 4% per almeno 48 ore a quattro gradi Celsius.Trasferire l'emicerello cerebrale in una soluzione di saccarosio al 30% a quattro gradi Celsius. Inizialmente, l'emicerello cerebrale galleggerà nella soluzione di saccarosio, ma dopo 24-48 ore affonderà sul fondo. Prima della criosezionatura, applicare uno strato sottile di OCT sul pomello e lasciarlo congelare a meno 20 gradi Celsius. Rimuovere il cervelletto dal resto dell'emicerello cerebrale.Posizionare il campione residuo sullo strato di OCT congelato, coprirlo immediatamente con OCT e lasciarlo congelare lentamente a meno 20 gradi Celsius. Impostare il criostato su uno spessore di sezione di 30 micron e raccogliere ogni fetta in un contenitore con soluzione Domo. Trattare ogni sezione libera con acido formico all'88% per 15 minuti.Le sezioni appariranno raggrinzite. Successivamente, trasferire ciascuna sezione su una piastra e lavarla tre volte con Triton XPBS per cinque minuti con agitazione delicata. Inibire l'attività endogena con perossido di idrogeno 0,5% in Triton XPBS per 30 minuti a temperatura ambiente con agitazione delicata.Quindi lavare le sezioni tre volte con Triton XPBS per 10 minuti sotto agitazione delicata, bloccare le sezioni con latte scremato al 5% non grasso disciolto in Triton XPBS a temperatura ambiente per un'ora con agitazione delicata. Continuare a incubare le sezioni nell'anticorpo primario diluito in Triton XPBS contenente il 5% di latte a quattro gradi Celsius durante la notte con agitazione delicata. Lavare i campioni tre volte con PBS contenente Triton per 10 minuti.Ora preparare una soluzione b, C seguendo il protocollo del produttore e incubare le sezioni nella miscela A B, C per 30 minuti con agitazione delicata, seguita da tre lavaggi con PBS trite next per 10 minuti. Incubare le sezioni nella miscela DAB appena preparata per cinque a 10 minuti, fino a quando si sviluppa un colore marroncino su ciascuna sezione, quindi lavare tre volte con PBS trite next per 10 minuti con agitazione delicata. Montare le sezioni cerebrali libere su vetrini rivestiti di gelatina e farle asciugare all'aria, quindi chiarire con una serie di trattamenti con xilene e montare in lin.Visualizzare le placche mediante microscopia ottica a un ingrandimento di 40x e quantificare il numero medio di placche per sezione per ciascun topo; estrarre il tessuto cerebrale dai topi come mostrato in precedenza. Montare quattro o cinque sezioni emicerelari su un vetrino e lasciarle asciugare all'aria; disidratare completamente i campioni in etanolo al 70% per un minuto, seguito da etanolo all'80% per un minuto. Successivamente, incubare i vetrini in una soluzione di THEOF Flavin S filtrata allo 0,1% per 15 minuti.Avendo cura di proteggere la soluzione di Theof Flavin S e i vetrini colorati dalla luce, lavare i vetrini con etanolo all'80% per un minuto, con etanolo al 70% per un minuto e con acqua distillata due volte. Ora montare i vetrini in un mezzo di montaggio acquoso e farli asciugare all'aria al buio per almeno due ore, quindi sigillare il coprioggetti con smalto trasparente. Conservare le sezioni colorate al buio a quattro gradi Celsius.Infine, visualizzare le placche marcate con fluorescenza verde mediante microscopia a fluorescenza entro una settimana. Nel nostro recente studio sull'efficacia del farmaco antiepilettico e stabilizzatore dell'umore, l'acido valproico, nell'inibire la formazione di placche reticolari, abbiamo utilizzato la procedura di immunomarcatura sopra descritta e la procedura di marcatura con flavine per identificare le placche reticolari in modelli murini di ad. Un tipico topo transgenico APP23 di nove mesi viene marcato con anti-Aβ utilizzando il 4G8 BIOTINILATO e rilevato tramite il metodo ABC.Le placche reticolari neuro sono chiaramente marcate con l'anticorpo e sono indicate dalle frecce bianche. Qui la colorazione con flavina S rileva il deposito di placche reticolari in topi transgenici APP23×PS di due mesi. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere completata in tre giorni se eseguita correttamente. Durante l'esecuzione di questa procedura, è fondamentale fissare completamente il cervello in PFA al 4% e assicurarsi che il cervello affondi completamente sul fondo della soluzione di saccarosio al 30%.Al termine di questa procedura, possono essere eseguiti altri metodi, come l'immunomarcatura per tau, al fine di indagare ulteriori aspetti quali l'iperfosforilazione della tau e la degenerazione neuronale.

detection-of-neuritic-plaques-in-alzheimer-s-disease-mouse-model

Research

Ricerca

JoVE Journal

Neuroscience

Neuroscienze

Transgenici (Tg) modelli murini di AD forniscono un'eccellente opportunità per indagare come e perché i livelli di Aβ o tau nel liquido cerebrospinale cambiare il progredire della malattia nei pazienti umani. Qui, dimostrano una raffinata tecnica di puntura cisterna magna per il campionamento CSF ​​seriale dal mouse.

Una tecnica per la raccolta seriale del liquido cerebrospinale dalla Magna Cisterna in Mouse

Fonte: Bisht, K., et. al. Microscopia correlativa alla luce e agli elettroni per studiare le interazioni microgliali con placche di β-amiloide. J. Vis. Exp. (2016) Questo video mostra la visualizzazione e la mappatura delle placche amiloidi marcate con Metossi-X04 nel cervello di topo con malattia di Alzheimer sezioni che utilizzano la fluorescenza e la microscopia a campo chiaro, consentendo una correlazione precisa delle placche con le strutture anatomiche per lo studio della patologia di...

Visualizzazione e mappatura di placche amiloidi marcate con metossi-X04 in una sezione cerebrale di topo con malattia di Alzheimer

Fonte: Arango-Lievano, M. et. al., Imaging longitudinale in vivo della cerebrovascolarizzazione: rilevanza per le malattie del SNC. J. Vis. Exp. (2016)Questo video dimostra l'imaging in vivo a due fotoni per visualizzare placche amiloidi marcate in fluorescenza e vascolarizzazione cerebrale. La fluorescenza blu segna le placche, mentre la fluorescenza verde evidenzia i vasi sanguigni cerebrali. Una mappa 3D della regione di interesse e l'imaging a mosaico ad alta risoluzione rivelano...

Imaging in vivo di vasi cerebrali e placche amiloidi in un modello murino di Alzheimer

Qui, presentiamo un protocollo per l'infusione diretta stereotassica cerebrale di amiloide-beta. Questa metodologia fornisce un modello murino alternativo in vivo per affrontare gli effetti a breve termine dell'amiloide-beta sui neuroni cerebrali.

Infuso stereotassico di Oligomeric amiloide-beta nelle Hippocampus mouse

L'amiloide-β (Ap) -injected modello animale consente la somministrazione di una quantità e specie di frammenti Ap definiti e riduce le differenze individuali all'interno di ciascun gruppo di studio. Questo protocollo descrive la intracerebroventricolare (ICV) iniezione di Ap senza strumenti stereotassica, consentendo la produzione di anomalie comportamentali Alzheimer-like nei topi normali.

Iniezione intracerebroventricular dei peptidi beta-amiloide in topi normali per indurre Acutamente Alzheimer-like Deficit cognitivi

Qui, descriviamo l'installazione, software di navigazione, e l'analisi dei dati per un metodo spazialmente e temporalmente precisa misurazione toniche e fasiche cambiamenti glutammato extracellulare in vivo utilizzando matrici di microelettrodi enzimatico (MEA).

Utilizzando biosensori a base di enzimi misurare Tonic e Phasic glutammato in modelli murini di Alzheimer

Qui descritto è un approccio scenico di screening comportamentale che può essere utilizzato per la ricerca di composti che presentano l'efficacia in vivo sui comportamenti motori cognitivi e funzionali nei modelli di topi transgenici di β-amiloidosi e tauopatia. Questi metodi sono ottimizzati per schermare composti per attività in attività di memoria a breve termine e di lavoro.

Valutazione di alternanza spontanea, riconoscimento novello di oggetti e attacco degli arti nei modelli di topo transgenico Modelli di neuropathologia di Amiloide-β e Tau

Il presente protocollo descrive e confronta la procedura per eseguire un'analisi a regione o sottoregione di interesse di sezioni cerebrali di topo sagittale per quantificare il carico di amiloide-beta nel modello murino transgenico APP / PS1 della malattia di Alzheimer.

Quantificazione completa rispetto a quella subregionale del carico di amiloide-beta sulle sezioni cerebrali del topo

Una caratteristica della malattia di Alzheimer è l'elevazione di...

Preparazione di oligomeriche β-amiloide 1-42 E induzione di Impairment plasticità sinaptica in fettine di ippocampo

Aptameri sono ribo-/deoxyribo-oligonucleotides corti...

Selezione di Aptamers per β-amiloide proteina, l&#39;agente eziologico della malattia di Alzheimer

Scopri metodi per rilevare placche neuritiche nel modello murino di Alzheimer usando immunocitochimica 4G8 e colorazione con tioflavina S. Queste tecniche offrono alta specificità per le proteine beta-amiloidi.

Rilevazione di placche neuritiche nel modello di malattia di Alzheimer mouse

Esplora altri video