Targeting di nanoparticelle funzionalizzate del cancro ovarico: una tecnica per facilitare l'assorbimento dell'agente di contrasto di nanoparticelle coniugato con acido folico da parte delle cellule di cancro ovarico

I recettori dei folati sono glicoproteine associate alla membrana sovraespresse dalla maggior parte delle cellule tumorali ovariche. Lo sfruttamento di questi recettori consente la consegna mirata di nanoparticelle diagnostiche nelle cellule tumorali.

Iniziare con una sospensione dei coniugati dell'agente di contrasto nanoparticellare con acido folico desiderato. Aggiungi questa sospensione di nanoparticelle in una coltura aderente di cellule tumorali ovariche. Incubare la coltura per il periodo di tempo desiderato.

L'acido folico funzionalizzato alle nanoparticelle aiuta a riconoscere i recettori dei folati espressi sulle cellule tumorali, favorendo il legame selettivo dei coniugati delle nanoparticelle con le cellule. Successivamente, la membrana plasmatica si invagina, facilitando l'assorbimento cellulare e l'accumulo di nanoparticelle.

Raccogli le cellule tumorali. Successivamente, centrifugare per separare le cellule dal surnatante contenente eventuali nanoparticelle non legate. Scartare il surnatante e risospendere le celle contenenti nanoparticelle in un tampone adatto per applicazioni a valle.

Innanzitutto, mescola le nanoparticelle di solfuro di rame ricoperte di acido folico alla concentrazione corretta in terreni RPMI freschi. Aggiungere questa soluzione di nanoparticelle a ciascun pozzetto della piastra a 24 pozzetti preparata che contiene celle SKOV-3 a una concentrazione di 400 microgrammi per millilitro. Incubare a 37 gradi Celsius con il 5% di anidride carbonica per due ore.

Successivamente, tripsinizzare le cellule con 0,5 millilitri di tripsina allo 0,25% e EDTA. Per neutralizzare la tripsina, aggiungere almeno 1 millilitro di terreno di coltura completo RPMI 1640 privo di acido folico e centrifugare le cellule a 123 x g per sei minuti. Per lavare le cellule, rimuovere il surnatante.

Risospendere le cellule in 2 millilitri di PBS e centrifugare a 123 x g per sei minuti. Ripetere questa fase di lavaggio due volte per rimuovere eventuali nanoparticelle non legate.

Quindi, risospendere le cellule con 1 o 2 millilitri di una soluzione di Tween al 2% in PBS. Contare le cellule utilizzando un emocitometro e il blu di tripano. Diluire le cellule in una soluzione di Tween al 2% e PBS alla concentrazione scelta per la rilevazione.