Arricchimento di fosfopeptidi a base di biossido di titanio: un metodo per l'isolamento selettivo di fosfopeptidi dalla libreria di peptidi

I fosfopeptidi sono brevi stringhe di amminoacidi contenenti residui fosforilati di serina, treonina o tirosina. Per isolare i fosfopeptidi da una miscela di peptidi, inizia prendendo le perle di biossido di titanio in una provetta. Equilibrare per condizionare le perle utilizzando un opportuno tampone legante acidificato contenente un agente estinguente. Aggiungere la concentrazione desiderata di miscela di peptidi all'impasto perlato

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Incubare la miscela agitando continuamente per evitare che le perle si depositino. La condizione acida favorisce il gruppo fosfato dei fosfopeptidi a formare legami coordinati con le perle di titanio. L'agente di tempra nel tampone riduce qualsiasi legame aspecifico di peptidi non fosforilati alle perle, lasciandoli nella sospensione.

Centrifuga per pellettizzare le perle legate al fosfopeptide, mentre i peptidi non fosforilati rimangono nel surnatante. Scartare il surnatante. Trasferire le perle legate al fosfopeptide in una colonna filtrante rotante preassemblata. Centrifugare per rimuovere il tampone legante e intrappolare le perle coniugate con fosfopeptide.

Trasferire il filtro in un tubo pulito e aggiungere una soluzione contenente ammoniaca.