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0 visualizzazioni • 2:31 min. • April 30th, 2023
Per iniziare la macrodissezione, prelevare un vetrino con un campione di tessuto. Inoltre, prelevare un vetrino di riferimento contenente lo stesso campione di tessuto e colorarlo utilizzando ematossilina ed eosina per la colorazione H&E.
Nelle cellule normali, l'ematossilina conferisce una colorazione blu agli acidi nucleici, mentre la controcolorazione dell'eosina mostra le proteine cellulari rosa. La colorazione blu intenso del nucleo aiuta a differenziare le cellule tumorali dalle cellule normali.
Sovrapporre il vetrino colorato H&E con il vetrino non colorato per allineare i campioni di tessuto. Individuare la parte contenente le cellule tumorali sul vetrino colorato con H&E. Contrassegnare l'area corrispondente sul vetrino non colorato.
Raschiare il tessuto desiderato dal vetrino non colorato. Utilizzando una punta della pipetta bagnata, raccogliere il tessuto raschiato, in modo da garantire un facile trasferimento del campione di tessuto. Trasferire il tessuto in una provetta contenente un tampone di lisi. I componenti del tampone di lisi digeriscono il tessuto, rilasciando i costituenti della cellula.
Trattare il lisato con una proteasi adatta e incubare ad alta temperatura. La proteasi scinde le DNasi contaminanti, proteggendo così il DNA dalla degradazione. Conservare il DNA contenente lisato tissutale per l'analisi a valle.
Identificare i tessuti tumorali dell'area tumorale più adatti alla macrodissezione in base alla sezione colorata H&E appropriata. Quindi, macrosezionare il tessuto tumorale in base alla sezione contrassegnata. Prendi una lama di rasoio pulita e raschia delicatamente il tessuto tumorale dal vetrino, cercando di tenerlo tutto intero. Utilizzare la punta della pipetta per trasferire il tessuto raschiato, nella fiala del tampone di lisi.
Ripeti questo processo con il resto delle diapositive. Dopo che tutto il tessuto è nel tubo, usa la punta per assicurarti che il tessuto sia completamente immerso e non sia attaccato alla parete. Aggiungere 20 microlitri di una serina proteasi correlata alla subtilisina alla fiala e mescolare delicatamente. Posizionare la fiala in un blocco termico a 55 gradi Celsius per almeno 4 ore o durante la notte, assicurandosi di vorticare leggermente dopo 2 ore.