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0 visualizzazioni • 4:00 min • April 30th, 2023
La colorazione delle fibre elastiche aiuta a esaminare l'invasione delle cellule tumorali oltre la lamina elastica peritoneale o il tessuto elastico sub-mesoteliale.
Per iniziare, aggiungere una soluzione di permanganato di potassio a una sezione di tessuto lavorato, seguita dall'immersione in acido ossalico. La forte proprietà ossidante della combinazione permanganato di potassio-acido ossalico sbianca il pigmento naturale dalla sezione del tessuto per prevenire l'interferenza con il processo di colorazione oscurando la morfologia delle fibre elastiche.
Sciacquare il vetrino con acqua ed etanolo per rimuovere eventuali residui di agente sbiancante. Successivamente, incubare il campione in un colorante di elastina che comprende un complesso ferro-ematossilina. L'elastina, il principale componente della fibra elastica, ha una forte affinità per i complessi ferro-ematossilina.
Lavare il vetrino con etanolo e acqua per rimuovere eventuali macchie residue. Infine, trattare il campione con un colorante di contrasto contenente acido picrico e Ponceau S. Le molecole di acido picrico più piccole penetrano in tutti i tipi di tessuto, ma sono saldamente trattenute dal muscolo a trama stretta e dalle cellule tumorali. Al contrario, le molecole S di Ponceau più grandi sostituiscono l'acido picrico nel collagene poroso, causando una colorazione diversa del collagene rispetto alle cellule muscolari e tumorali.
Se osservate al microscopio, le fibre elastiche appaiono come filamenti blu-neri. Il collagene si colora di rosso, mentre le cellule muscolari e tumorali appaiono gialle. Le cellule tumorali gialle che penetrano la lamina elastica blu-nera confermano l'invasione metastatica.
Innanzitutto, utilizzare della carta velina per rimuovere la soluzione in eccesso sul vetrino o attorno al fazzoletto. Posizionare i vetrini in condizioni che corrispondano alla temperatura e all'umidità della stanza. Aggiungere alcune gocce di permanganato di potassio a ciascun vetrino per ossidarli, assicurandosi che il volume aggiunto sia sufficiente a coprire la sezione di tessuto su ogni vetrino. Dopo 5 minuti, sciacquare i vetrini ossidati con acqua distillata in barattoli Coplin, ripetendo il risciacquo due o tre volte e utilizzando un nuovo barattolo d'acqua per ogni risciacquo. Il tessuto dovrebbe avere un colore marrone osservabile.
Ora, aggiungi alcune gocce di acido ossalico a ciascun vetrino per sbiancarli, assicurandoti che il volume aggiunto sia sufficiente a coprire la sezione di tessuto su ogni vetrino. Dopo 5 minuti, sciacquare i vetrini di candeggina con acqua distillata, ripetendo il risciacquo due o tre volte e utilizzando un nuovo barattolo d'acqua per ogni risciacquo. Lavare brevemente i vetrini in alcool al 95%.
Immergere i vetrini lavati in una soluzione di elastina per 8-24 ore. Quindi, immergere i vetrini direttamente in etanolo al 95% per 1 o 2 minuti per differenziare bene ogni sezione di tessuto. Sciacquare completamente i vetrini con acqua distillata.
Controllare al microscopio la colorazione delle fibre elastiche blu-nere e lo sfondo grigio. È meglio differenziare leggermente il tessuto poiché la successiva colorazione di contrasto di Van Gieson può anche estrarre in qualche modo la macchia elastica.
Controcolorare i vetrini in una soluzione di Van Gieson per 1 minuto, assicurandosi che il volume utilizzato sia sufficiente a coprire completamente la sezione di tessuto su ogni vetrino. Quindi, far cadere rapidamente il 95% di etanolo sulle fette di tessuto per alcuni secondi per differenziare bene ogni sezione di tessuto.