Scissione degli sferoidi per la sub-coltura e la spedizione: una procedura per la propagazione e il trasferimento di sferoidi dal tumore neuroendocrino dell'intestino tenue

Gli sferoidi sono colture in vitro di cellule auto-aggregate per formare strutture sferiche tridimensionali. Per la propagazione degli sferoidi tumorali, iniziare con gli sferoidi coltivati in una matrice extracellulare adatta, o ECM, contenuta in una piastra di coltura.

Triturare utilizzando una micropipetta per rompere meccanicamente la MEC e allentare gli sferoidi. Trasferire la miscela sferoide-ECM in una provetta da microcentrifuga.

Centrifugare a bassa velocità per pellettizzare gli sferoidi e separarli dall'ECM nel surnatante. Scartare il surnatante contenente ECM esaurito. Trasferire il tubo contenente il pellet di sferoide sul ghiaccio per evitare la solidificazione della ECM durante le fasi successive.

Integrare il pellet con ECM liquefatto fresco. Per la sub-coltura, mescolare il contenuto pipettando ripetutamente su e giù per dissociare le cellule sferoidi e rilasciarle in sospensione.

Semina questa miscela contenente cellule che formano sferoidi e ECM in un piatto di coltura fresco. La ECM si solidifica, consentendo l'intrappolamento delle cellule tumorali. Aggiungi il terreno di coltura desiderato. Incubare per facilitare la crescita delle cellule intrappolate in nuov