Crioconservazione basata sulla vetrificazione: una tecnica di raffreddamento ultrarapido per conservare campioni biologici a temperature molto basse per la conservazione a lungo termine

La vitrificazione, una tecnica di crioconservazione ultrarapida, consente di raffreddare cellule e tessuti viventi e di conservarli a temperature estremamente basse per periodi molto lunghi.

Per vitrificare un tessuto tumorale appena raccolto, per prima cosa, prendi il tessuto su una piastra di coltura. Asportare eventuali regioni necrotiche, regioni contenenti grasso o coaguli di sangue dal tumore. Lavare il fazzoletto per rimuovere eventuali tracce di sangue.

Tagliare il fazzoletto a fette di spessore adeguato. A questo punto, trasferire le fette in una provetta contenente una soluzione di vetrificazione che costituisce DMSO, o dimetilsolfossido, e saccarosio. Questi costituenti agiscono come crioprotettori per proteggere le cellule dai danni da congelamento.

Incubare a bassa temperatura. Il DMSO, un crioprotettore che permea le cellule, si diffonde attraverso la membrana cellulare e sostituisce l'acqua nelle cellule per prevenire la formazione di cristalli di ghiaccio intracellulari. Allo stesso tempo, il saccarosio, un crioprotettore non permeante, agisce a livello extracellulare facilitando la disidratazione cellulare e riducendo la formazione di cristalli di ghiaccio intracel