Microscopia a fluorescenza di trappole extracellulari neutrofile o NET: una tecnica per osservare l'interazione adesiva tra cellule tumorali e NET

In condizioni patologiche come il cancro, i neutrofili attivati rilasciano trappole extracellulari per neutrofili o NET - una rete di DNA extracellulare con enzimi associati e proteine antimicrobiche - che intrappolano le cellule tumorali circolanti.

Per visualizzare l'interazione adesiva tra NET e cellule tumorali in vitro, iniziare coltivando neutrofili a bassa densità, un sottotipo di neutrofili, in un piatto di coltura rivestito di polimero che promuove l'adesione cellulare. Incubare per alcune ore per stimolare i neutrofili a formare NET simili a ragnatele.

Aggiungere una sospensione di cellule tumorali marcate con fluoresceina rossa alla coltura dei neutrofili. Incubare le cellule tumorali con NET per un breve periodo per facilitare l'interazione cellula tumorale-NET. Il NET-DNA agisce come un fattore chemiotattico che attrae le cellule tumorali e ne promuove l'adesione ai NET.

Rimuovere il mezzo esaurito. Lavare delicatamente la coltura con un terreno fresco adatto per rimuovere bene eventuali cellule tumorali non attaccate dalla coltura.

Ora, aggiungi una colorazione nucleare fluorescente verde impermeabile alla membrana per colorare selettivamente i NET extracellulari. Oss