Immunocolorazione con oro delle sezioni esosomiali: una tecnica per visualizzare i marcatori diagnostici nel lume esosomiale

Gli esosomi sono piccole vescicole extracellulari che racchiudono una varietà di biomolecole che fungono da biomarcatori del cancro.

Per visualizzare i biomarcatori esosomiali, iniziare con sezioni esosomiali ultrasottili incorporate in resina supportate su apposite griglie metalliche per microscopia elettronica. Incubare le griglie in gocce di glicina. La glicina lega e neutralizza i gruppi aldeidici reattivi nelle sezioni per superare la loro interferenza con il saggio.

Sciacquare il campione con acqua per rimuovere i reagenti residui. Successivamente, incubare il campione in un tampone di blocco. Il tampone trasporta le proteine sieriche che bloccano i siti di legame degli anticorpi non specifici nel campione.

Quindi, incubare il campione nella soluzione di anticorpi primari desiderata. Questi anticorpi riconoscono e si legano ai loro biomarcatori bersaglio localizzati nel lume esosomiale. Lavare via gli anticorpi non legati con un tampone adatto.

A questo punto, trasferire le griglie portacampioni in gocce contenenti anticorpi secondari coniugati con oro che si attaccano agli anticorpi primari. Le nanoparticelle d'oro fungono da marcatori densi di elettroni per visualizzare la