Purificazione di sottopopolazioni di vescicole extracellulari: una tecnica per purificare sottopopolazioni di vescicole extracellulari mediante ultracentrifugazione a gradiente di densità

Le vescicole extracellulari o EV sono vescicole di dimensioni nanometriche, eterogenee, legate alla membrana secrete da varie cellule, comprese le cellule tumorali cerebrali. Le piccole vescicole extracellulari sono una sottopopolazione che comprende vescicole extracellulari di derivazione endosomica e con perdita di membrana.

Per purificare le piccole vescicole extracellulari, iniziare assumendo vescicole extracellulari preestratte sospese in un tampone integrato con saccarosio che mantiene una soluzione omogenea e preserva l'integrità strutturale delle vescicole extracellulari.

A questa soluzione, quindi, si aggiunge un volume appropriato di iodixanolo - un mezzo inerte e non tossico a gradiente di densità - per ottenere la densità desiderata.

Lo iodisxanolo solubilizza le proteine contaminanti per essere rimosse successivamente.

Successivamente, aggiungere strati di soluzioni di iodixanolo di densità progressivamente decrescenti per creare un gradiente di densità discontinuo.

Centrifugare la provetta ad alta velocità.

A seconda dei loro tassi di galleggiamento, le vescicole extracellulari più dense migrano verso uno strato altrettanto denso di mezzo di gradiente, mentre le vesci